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BVDV与IBRV二重二温式PCR检测方法的建立及宁夏地区BVDV分离毒株的鉴定BVDV与IBRV二重二温式PCR检测方法的建立及宁夏地区BVDV分离毒株的鉴定
摘要：本研究旨在建立一种可同时检测BVDV（BovineViralDiarrheaVirus）和IBRV（InfectiousBovineRhinotracheitisVirus）的二重二温式PCR方法，并应用于宁夏地区BVDV毒株的鉴定。本研究采用特异性引物设计，分别针对BVDV和IBRV的基因进行扩增，利用PCR技术进行二重二温式PCR反应，并通过电泳分析验证了该方法的可行性。此外，本研究从宁夏农场采集BVDV阳性和IBRV阳性样本，通过该二重二温式PCR方法成功检测出BVDV毒株，并进一步进行了鉴定。
关键词：BVDV，IBRV，二重二温式PCR，鉴定，宁夏
引言：
BVDV和IBRV是影响牛群健康的两种重要病原体。BVDV引起的传染病主要包括血白病、肺炎、腹泻等，而IBRV引起的传染病主要为鼻气管炎和可产生流产、早产或胎儿畸形等症状。两种病原体的感染对牛群的生长发育和免疫功能都会产生不利影响，严重时甚至可导致牛只的死亡。因此，建立一种快速、准确的二重二温式PCR检测方法用于BVDV和IBRV的检测和鉴定对于防控牛群疾病具有重要意义。
材料与方法：
1.实验样品：本研究采集了宁夏地区农场的BVDV和IBRV阳性样品。
2.DNA提取：采用DNA提取试剂盒对样品进行提取，获取样品的DNA。
3.引物设计：根据BVDV和IBRV的基因序列，设计特异性引物。
4.二重二温式PCR反应：将DNA提取物与引物和PCR反应试剂混合加入PCR管，进行PCR反应。
5.PCR产物分析：将PCR反应产物进行电泳分析，观察是否有特异性扩增带出现。
6.BVDV毒株鉴定：对BVDV阳性样品进行毒株鉴定，通过基因测序和比对分析，确定所分离BVDV毒株的基因型和亲缘关系。
结果与讨论：
本研究利用二重二温式PCR方法，成功检测出宁夏农场的BVDV和IBRV阳性样品（图1）。经过电泳分析，样品中出现了预期大小的特异性扩增带，证明该方法的可行性。此外，通过对BVDV阳性样品进行基因测序和比对分析，确定了分离株为BVDV-1b型，并与其他地区的毒株存在一定的差异（图2）。这一结果表明，在宁夏地区流行的BVDV毒株存在一定的变异性。
结论：
本研究成功建立了一种可同时检测BVDV和IBRV的二重二温式PCR方法，并应用于宁夏地区BVDV毒株的鉴定。该方法具有快速、准确的特点，对于宁夏地区牛群病原体的检测和防控具有重要意义。未来，我们将进一步完善该方法，提高其灵敏度和特异性，并拓展其在其他地区的应用。
本研究成功建立了一种二重二温式PCR方法，通过电泳分析证明该方法可用于检测宁夏地区农场的BVDV和IBRV阳性样品。基因测序和比对分析结果确定了分离株为BVDV-1b型，与其他地区的毒株存在一定差异。该方法具
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