DHA藻油与植物食用油的调配

DHA藻油与植物食用油的调配及其生理活性的研究*Ⅵ对SD大鼠脑皮层细胞MDA、T-AOC、CAT的影响尹佳收稿日期：基金项目：国家粮食局粮食公益性行业科研专项“食用植物油适度和稳态化加工工艺研究与关键装备开发”(201313012-03)，嘉必优生物工程（武汉）有限公司委托科研项目。作者简介：尹佳，女，武汉轻工大学硕士研究生，微生物油脂（E-mail)408039399@.电话讯作者：何东平，男，教授，粮食、油脂及植物蛋白（E-mail)hedp123456@163.com.柳梦1李迅2陈涛3田华1收稿日期：基金项目：国家粮食局粮食公益性行业科研专项“食用植物油适度和稳态化加工工艺研究与关键装备开发”(201313012-03)，嘉必优生物工程（武汉）有限公司委托科研项目。作者简介：尹佳，女，武汉轻工大学硕士研究生，微生物油脂（E-mail)408039399@.电话讯作者：何东平，男，教授，粮食、油脂及植物蛋白（E-mail)hedp123456@163.com.1武汉轻工大学食品科学与工程学院（武汉，430023）2武汉市中心医院检验科（武汉，430014）3中国科学院武汉病毒研究所（武汉，430071）4武汉大学人民医院（武汉，430061）5嘉必优生物工程（武汉）有限公司（武汉，430000）摘要：目的：探究含DHA藻油的植物食用油对SD大鼠大脑皮层自由基代谢(MDA)、总抗氧化能力（T-AOC)、过氧化氢酶（CAT)的影响。方法：SD雄性大鼠60只，随机分为10组：阴性对照组，即普通饲料组（简称CK1，CK3下同）；阳性对照组，即纯DHA藻油组（简称CK2，CK4下同）；低、中、高剂量DHA藻油大豆调配油组、低、中、高DHA藻油花生调配油剂量组。连续给小鼠灌胃4周，实验结束后，取大鼠脑组织，测其MDA含量、T-AOC、CAT活性。结果：与对照组CK1相比，DHA大豆调配油、DHA花生调配油均能显著降低大鼠脑组织中MDA含量，提高T-AOC、CAT活性，这间接说明DHA藻油大豆调配油和DHA藻油花生调配油有助于增强机体清除自由基，降低脂质过氧化损伤。其中DHA大豆调配油中，高剂量组相对于阴性对照组CK1，MDA、T-AOC、CAT差异均非常显著，相对于阳性对照组CK2均无显著差异，故而选择高剂量组即纯DHA藻油含量为750mg/(kg·d)效果最好；而DHA藻油花生调配油中，高剂量组相对于阴性对照组CK3，MDA、T-AOC差异均非常显著，CAT差异显著，相对于阳性对照组CK4，MDA、T-AOC均无显著差异，故选择高剂量组即纯DHA藻油量为750mg/(kg·d)效果最好。关键词：DHA调配油MDAT-AOCCATStudyonthedeploymentofDHAalgaeoilandvegetableoilanditsphysicalandchemicalpropertiesVIInfluenceononratbrainMDA,T-AOC,CATYinJia1LiuMeng1ChenTao2TianHua1HeDong-ping11WuhanPolytechnicUniversityFoodScienceandEngineering(WuhanEvergreenGarden430023)2ChinaWuhanvirus(WuhanInstituteofWuchang,430071)Abstract:Objective:TostudytheeffectofplantoilscontainingDHAalgaeoilonfreeradicalmetabolism(MDA),totalantioxidantcapacity(T-AOC)andcatalase(CAT)inthecerebralcortexofSDrats.Methods:60SDmaleratswererandomlydividedinto10groups:negativecontrolgroup,namelythenormaldietgroup(CK1,CK3thesamebelow);positivecontrolgroup,namelypureDHAgroup(CK2,CK4thesamebelow);DHAsoybeanoil:low,medium,highdosegroup;DHApeanutoil:low,mediumandhighdosegroup.TakedifferentdosesofDHAsoybeanoil,DHApeanutoiltofeedtheratsfor4weeks,aftertheexperiment,measuretheMDAcontent,T-AOC,CATactivityoftheratbraintissue.Conclusion:ComparedwiththecontrolgroupCK1,DHAsoybeanoilandDHApeanutoilcansignificantlyreducethecontentofMDAinbraintissue,improvetheactivityofT-AOCandCAT，whichcanhelptoenhancethebody'sfreeradicalscavengingandreducelipidperoxidationinjury.IntheDHAsoybeanoilgroup,thereisasignificantdifferencebetweenhighdosegroupandnegativecontrolgroup,whilethereisnosignificantdifferencebetweenhighdosegroupandpositivecontrolgroup,sowechosethehighdosegroupwhicepureDHAcontensi750mg/(kg·d)asthebesteffect.AndinDHApeanutsoil,highdosegroupcomparedwiththenegativecontrolgroupCK3,MDA,T-AOCdifferenceswereverysignificant,CATsignificantdifference,comparedwiththepositivecontrolgroupCK4,MDA,T-AOCwerenosignificantdifference,sochoosehighdosegroupofpureDHAcontentof750mg/(kg·d)thebesteffect.Keywords:DHAdeploymentMDAT-AOCCATDHA(docosahexaenoicacid，DHA)，二十二碳六烯酸，属于ω-3不饱和脂肪酸，是一种对人体非常重要的必需脂肪酸。大量实验研究证明，DHA是神经系统细胞生长及维持的一种主要不饱和脂肪酸，是大脑和视网膜的重要构成成分，能增强记忆与思维能力、对提高智力等作用尤为显著；同时，对人的视觉形成、大脑活动、心脑血管疾病、免疫功能及老年性痴呆均有预防和治疗作用[1]-[4]。根据各国科学家的研究结果，当前人类膳食中的DHA含量远远低于人体机体所需含量，因此，科学家们也越来越多将DHA添加到膳食中以补充人体所需DHA含量，而将DHA添加到食用油中则成为一种新型补充DHA的途径[5]-[8]。在前研究的基础上（5篇），我们进行了含DHA藻油植物调配油对SD大鼠脑组织MDA、T-AOC、CAT影响的研究，现将结果报道如下。1材料1.1实验动物初断乳雄性SD大鼠(80±10)g,60只，由武汉大学动物实验中心提供。1.2实验试剂与仪器DHA藻油的调配及产品见参考文献[14]，总蛋白、丙二醛(MDA)、总抗氧化能力（T-AOC）和过氧化氢酶（CAT）测定试剂盒，均购自南京建成生物工程研究所；0.9%生理盐水注射液，规格:250ml,国药准字H42020745；试管、微量移液器、漩涡混匀器、HH-6数显恒温水浴锅、可见分光光度计（595nm、520nm、405nm、412nm、550nm）、BC-2600全自动血液细胞分析仪；3K15高速冷冻离心机；S10手提式高速分散器。1.3受试物DHA含量为1.5%、3.0%、4.5%的大豆调配油和花生调配油产品。（嘉必优（武汉）生物工程有限公司提供，DHA含量≥40%）。2方法2.1实验动物的饲养2.1.1动物分组初断乳SD雄性大鼠60只，随机分成10组，每组6只；阴性对照组：CK1，CK3，阳性对照组：CK3、CK4，给药组：大豆调配油低、中、高剂量组，花生调配油低、中、高剂量组。2.1.2动物饲养在相同的自然环境下，普通饲料定量进食，自由饮水，保持自然光照，良好通风，以及一定室温，饲养一周以使SD大鼠适应实验环境，观测大鼠生长活动正常后，每天上午灌胃给药，持续给药4周，每3d称量大鼠体重，以变换给药量。试验在武汉大学动物实验中心进行。2.1.3动物给药方法给药情况见表1、表2。表1大豆组小鼠给药情况分组名称给药情况对照组CK1(阴性对照组）大豆调配油1ml／(kg·d)CK2（阳性对照组）DHA藻油450mg／(kg·d)给药组低剂量组含DHA藻油大豆调配油，纯DHA量为250mg/(kg·d)中剂量组含DHA藻油大豆调配油，纯DHA量为500mg/(kg·d)高剂量组含DHA藻油大豆调配油，纯DHA量为750mg/(kg·d)表2花生组小鼠给药情况分组情况给药情况对照组CK3(阴性对照组）花生调配油1ml／(kg·d)CK4(阳性对照组DHA藻油450mg／(kg·d)给药组低剂量组含DHA藻油花生调配油，纯DHA量为250mg/(kg·d)中剂量组含DHA藻油花生调配油，纯DHA量为500mg/(kg·d)高剂量组含DHA藻油花生调配油，纯DHA量为750mg/(kg·d)2.2实验动物的取材方法及制备大鼠禁食24小时（可自由饮水），麻醉大鼠，取血后，迅速于冰上剥离大脑组织，用预冷生理盐水漂洗并剔除血液与结缔组织，滤纸吸干，置于-20℃冰柜中保存备用。从冰柜中取出脑组织解冻，取0.1g，按质量比1:9加入生理盐水，研磨匀浆，置于离心机内3500r/min离心10min，取上清液测定。2.3测定指标的具体操作及方法各测定方法均按照南京建成生物工程研究所提供说明书上步骤进行。2.4统计学方法数据以均数±标准差（±s)来表示，应用SPSS软件进行分析和检验，组间比较采用单因素方差分析，以P<0.05有差异统计学意义。3实验结果与分析3.1DHA藻油大豆调配油对大鼠脑组织中MDA、CAT、T-AOC的影响DHA藻油大豆调配油对大鼠脑组织中MDA(nmol/L)、CAT(U/mg)、T-AOC(U/mg)的影响见表3表3DHA大豆调配油对大鼠脑组织中MDA(nmol/L)、CAT(U/mg)、T-AOC(U/mg)的影响（n=6,±s)组别MDACATT-AOC对照组CK12.112±0.4704.698±0.6632.898±0.510CK20.73±0.57813.333±1.8884.481±0.375给药组低剂量0.796±0.107**6.373±0.948△△3.113±0.452△中剂量0.540±0.110**9.986±1.180*△3.680±0.235高剂量0.712±0.151**11.885±2.056**5.046±0.777***表示与CK1相比，△表示与CK2相比。表3结果显示：对SD大鼠脑组织中MDA含量，DHA藻油大豆调配油低、中、高剂量组与CK1之间差异均极显著（P<0.01)，与对CK2之间差异均不显著，说明DHA大豆调配油对大鼠脑组织中MDA有显著降低作用，且中剂量即含纯DHA量为500mg/(kg·d）降低脑组织中MDA效果最好。对SD大鼠脑组织中CAT值，与CK1相比，DHA藻油大豆调配油低剂量组无显著差异，中剂量组差异显著（P<0.05)，高剂量组差异非常显著（P<0.01)，这说明DHA藻油大豆调配油可以显著提高大鼠脑组织中CAT的含量；而与对照组CK2相比，低、高剂量组差异显著（P<0.05)，而高剂量组无显著差异，说明，高剂量组对提高大鼠脑组织中CAT的效果最好。对SD大鼠脑组织中T-AOC，与CK1相比，低、中剂量组均无显著差异，高剂量组差异非常显著（P<0.01)。说明DHA调配油对大鼠脑组织中T-AOC有显著提高作用，与对CK2相比，低剂量组有显著差异，中、高剂量组无显著差异，且高剂量组对提高T-AOC的效果最好。综合对降低MDA、提高CAT和T-AOC的总体效果，选择高剂量组，即纯DHA含量为750mg/(kg·d）的大豆调配油为最佳配方。3.2DHA藻油花生调配油对大鼠脑组织中MDA、CAT、T-AOC的影响DHA藻油花生调配油对大鼠脑组织中MDA、CAT、T-AOC的影响见表4表4DHA藻油花生调配油对大鼠脑组织中MDA、CAT、T-AOC的影响（n=6,±s)组别MDA(nmol/L)CAT(U/mg)T-AOC(U/mg)对照组CK32.092±0.4504.708±0.6532.980±0.496CK40.741±0.55613.401±1.7984.501±0.356给药组低剂量0.777±0.519**5.321±0.437△△3.457±0.191中剂量1.209±0.799**△8.021±1.103**△△3.895±0.359**高剂量0.520±0.085**7.611±1.437*△△3.771±0.036***表示与CK3相比，△表示与CK4相比表4结果显示：对SD大鼠脑中MDA，相对于对CK3，DHA藻油花生调配油低、中、高剂量组差异均非常显著（P<0.01)，说明DHA花生调配油能显著降低大鼠脑中MDA含量；相对于CK4，低、高剂量组差异均不显著。且高剂量组降低MDA的效果最好。对大鼠脑中CAT含量，相对于CK3，DHA花生调配油中、高剂量组均有显著差异（P<0.05)，其中中剂量组差异非常显著，说明DHA花生调配油能显著提高大鼠脑中CAT含量，相对于CK4，低、中、高剂量组均有显著差异。对大鼠脑中T-AOC含量，相对于CK3，中、高剂量组差异均非常显著，DHA花生调配油能显著提高大鼠脑中T-AOC含量，而相对于CK4，低、中、高剂量组均不显著。4讨论丙二醛(MDA）是脂质过氧化物反应重要的产物之一，它的产生能加剧膜的损伤，MDA含量变化可间接反应体内自由基损伤引起的脂质过氧化物反应的强弱[9-10]。本实验结果显示，DHA藻油大豆调配油和DHA藻油花生调配油均能显著降低SD大鼠脑皮层细胞中的MDA含量，提示DHA藻油大豆调配油和DHA藻油花生调配油可以降低SD大鼠脑组织过氧化程度。T-AOC是体内酶促体系抗氧化物质和非酶促体系抗氧化物质的总和。它的主要作用是维持体内环境活性氧的动态平衡，分解过高的自由基和活性氧，提高机体的抗自由基的能力，减少脂质过氧化[11-12]。本次试验结果显示，DHA藻油大豆调配油和DHA藻油花生调配油高剂量组相对于阴性对照组，均能显著提高SD大鼠脑组织中T-AOC活力，提示当大豆油和花生油中纯DHA量为750mg/(kg·d）时，对大鼠脑组织中T-AOC活力有一定促进作用。CAT是过氧化氢酶，它能够清除脂类代谢过程中产生的过氧化氢，从而使细胞免于遭受过氧化氢的毒害[13-14]。本实验结果显示，DHA藻油大豆调配油高剂量组和DHA藻油花生调配油中剂量组均能显著增强SD大鼠脑组织中CAT活力，减少脂质过氧化损失。总之，DHA藻油大豆调配油和DHA藻油花生调配油均能不同程度的减少MDA含量，增强CAT和T-AOC活力，这间接说明DHA藻油大豆调配油和DHA藻油花生调配油有助于增强机体清除自由基，降低脂质过氧化损伤，综合对降低MDA、提高CAT和T-AOC的总体效果，选择高剂量组，即纯DHA含量为750mg/(kg·d）的大豆调配油为最佳配方。至于DHA藻油大豆调配油和DHA藻油花生调配油是否具有直接清除自由基作用、以及提高抗氧化酶活力、作用机理和有效活性成分还有待于进一步研究。4参考文献[1]赵金萍,丁爱石,刘玉军等.二十二碳六烯酸对神经细胞生长发育的作用[J].营养学报,2001,23(2):106-109.DOI:10.3321/j.issn:0512-7955.2001.02.003.[2]尤丽菊.DHA的药理作用[J].河南职工医学院学报,2008,20(6):619-621.DOI:10.3969/j.issn.1008-9276.2008.06.048.[3]陈殊贤,郑晓辉.微藻油和鱼油中DHA的特性及应用研究进展[J].食品科学,2013,34(21):439-444.DOI:10.7506/spkx1002-6630-201321085.[4]藻油DHA对人类一生的益处[J].食品工业科技,2012,33(16):38-38.[5]黎煜.提高记忆力走捷径--在饮食中加入藻油DHA[J].中国食品,2013,(18):6