心肌肌钙蛋白I(cTnI)定量检测试剂(免疫荧光层析法)产品技术要求万孚

医疗器械产品技术要求编号：产品名称心肌肌钙蛋白I（cTnI）定量检测试剂（免疫荧光层析法）型号、规格通用包装规格为5人份/盒、25人份/盒、40人份/盒和100人份/盒。结构及组成试剂由测试卡、缓冲液、ID芯片和使用说明书组成。其中：（1）测试卡由试纸条、塑料盒组成。试纸条上的主要成分有：硝酸纤维素膜、吸水纸、PVC板及其他试纸条支持物；硝酸纤维素膜包被有cTnI单克隆抗体和兔IgG。（2）缓冲液含有荧光标记cTnI单克隆抗体和荧光标记抗兔IgG。产品适用范围/预期用途适用于体外定量检测人全血、血清或血浆中的心肌肌钙蛋白I（cTnI）的浓度。产品型号/规格通用包装规格为5人份/盒、25人份/盒、40人份/盒和100人份/盒。2.性能指标2.1外观检查外观应平整，材料附着应牢固，各组份应齐全，卡固定紧密。2.2物理检查膜条宽应不小于2.0mm；液体移行速度应不低于10mm/min。2.3线性范围取同一批号的试剂分别对五个浓度的心肌肌钙蛋白I参考品进行检测，其检测范围为0ng/mL～40ng/ml，每份参考品重复检测3次，计算相关系数r，其中r值应≥0.99。2.4精密度2.4.1批内精密度随机抽取同一批号的试剂10份，分别对同一浓度的心肌肌钙蛋白I参考品进行检测，其变异系数CV（%）值应≤15%。2.4.2批间精密度随机抽取连续三个批号的试剂，每个批号取3份分别对同一浓度的心肌肌钙蛋白I参考品进行检测，其变异系数CV（%）值应≤15%。2.5准确度 用同一批号试剂分别测定三个水平浓度的心肌肌钙蛋白I参考品，计算样本测定结果均值和相对偏差，其中相对偏差（Bias%）应在±15%内。2.6最低检出限取同一批号的试剂10份，对配制参考品基质进行检测，计算样本测定结果均值和标准偏差SD，其中（+2SD）≤0.1ng/mL。2.7分析特异性选择同一浓度的心肌肌钙蛋白I参考品分别加入胆固醇、甘油三酯、胆红素，使干扰物最终浓度胆固醇60mg/mL、甘油三酯40mg/mL、胆红素2mg/mL，各干扰样本重复检测3次，计算样本检测结果的均值和相对偏差，其中相对偏差（Bias%）应在±15%内。3.检验方法3.1外观检查取出试剂，用目测方式观察，结果应符合2.1的规定。3.2物理检查用游标卡尺检查测试条宽度或观察窗口宽度，以缓冲液作为待测样品，水平放置，用秒表记录液体移行至测试条吸水纸前端或通过观察窗口所需的时间，结果应符合2.2的规定。3.3线性范围取同一批号的试剂分别对心肌肌钙蛋白I浓度为0ng/mL、0.5ng/mL、2.0ng/mL、10.0ng/mL、40.0ng/mL的参考品进行检测，每份参考品重复检测3次并计算每个浓度的平均值，按公式（1）、（2）、（3），计算直线方程y=a+bx，以及相关系数r，结果应符合2.3的要求。式中：b—回归线的斜率；|a|—回归线截距的绝对值；r—相关系数；—参考品的实际值；—参考品的3次重复测量均值；i—1，2，3，…..，n；n—测定样本数3.4精密度3.4.1批内精密度试验随机抽取同一批号的试剂10份，分别对浓度为0.5ng/mL的心肌肌钙蛋白I参考品进行测定，按公式（4）、（5）、（6）计算平均值、标准差S及变异系数CV（%）值，结果应符合2.4.1的要求。………(6)式中：Xi—单次测量值；n—测量次数。3.4.2批间精密度试验随机抽取连续三个批号的试剂，每个批号取3份分别对浓度为0.5ng/mL的心肌肌钙蛋白I参考品进行检测，计算9份测试卡测定总均值和每个批号测定均值（），其变异系数CV（%）值按公式（7）进行计算，结果应符合2.4.2的规定。式中：—中的最大值；—中的最小值；—总均值。3.5准确度用同一批号试剂分别测定浓度0.5ng/mL、2.0ng/mL、10.0ng/mL的心肌肌钙蛋白I参考品，每个参考品重复测定3次，计算样本测定结果均值，按公式（8）计算相对偏差（Bias%），结果应符合2.5的规定。式中：—相对偏差；—样本测定结果均值；X—测定样本理论值。3.6最低检出限取同一批号的试剂10份，对配制参考品基质进行检测，计算样本测定结果均值和标准偏差SD，其中（+2SD）应符合2.6的要求。3.7分析特异性选择浓度为10.0ng/mL的心肌肌钙蛋白I参考品分别加入胆固醇、甘油三酯、胆红素，使干扰物最终浓度胆固醇60mg/mL、甘油三酯40mg/mL、胆红素2mg/mL，各干扰样本重复检测3次，计算样本检测结果的均值和相对偏差，按照公式（8）计算相对偏差，结果应符合2.7的规定。附录A主要原材料主要原材料及基本要求如下：主要原材料厂家基本要求cTnI单克隆抗体MeridianLifeScience,Inc.纯度＞90％兔IgGMeridianLifeScience,Inc.纯度＞90％抗兔IgGMeridianLifeScience,Inc.纯度＞90％硝酸纤维素膜德国赛多利斯公司孔径5.0μm～12.0μm注：其它化学试剂均要求分析纯以上级别。

附录B内控品溯源性资料国内外研究表明，目前市场上检测cTnI的方法学很多，由于抗原决定簇与抗体结合的位点各有差异，不同检测系统检测结果之间有一定的差异性，但在整个行业内，化学发光法或化学发光微粒子免疫检测法是目前较为准确可靠的测定方法，其方法特异性较好，具有辅助诊断价值且适用于动态检测及预后判断。我司免疫荧光层析法这一方法学，在行业内没有一个统一的标准，所以内控品的定值需选取一个公认的检测方法，将其靶值转移到本公司的内控品，完成其计量学溯源，从而使常规测定结果可溯源到参考系统所提供的准确性基础上来。B.1我司内控品的制备a)内控品的来源①cTnI抗原：取HyTest公司的HumancardiactroponinI(cTnI)（来源人体心脏组织）干粉。②阴性样本：由广东省江门市五邑中医院提供的乙型肝炎病毒表面抗体（HbsAg）、丙型肝炎病毒（HCV）和人类免疫缺陷病毒（HIV）1/2型抗体检测均为阴性且丙氨酸氨基转移酶检测值在正常参考值范围内的血清，同时cTnI呈阴性。b)前处理阴性样本灭活处理：60℃水浴30min，然后12000r/min离心15min。c)对采集到的阴性样本进行确认采用贝克曼cTnI系统进行测定，显示cTnI阴性。用本公司生产的心肌肌钙蛋白I（cTnI）定量检测试剂（免疫荧光层析法），用PC软件扫描，均无明显峰值。d)量取需要量的阴性血清，以两份阴性血清添加1份5%BSA-PBS溶液的比例，配制好稀释液，作为最终标化用的阴性血清。e)cTnI干粉采用经确认的阴性血清复融。f)配制共5个浓度内控品。B.2内控品定值及验证程序我司配制的内控品应参照《GB/T21415-2008体外诊断试剂医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》5.6（具有制造商选定测量程序，但既无国际约定参考测量程序，也无国际约定校准品，不能在计量上溯源到SI的情况）的要求建立我司内控品的校准传递方案。B.2.1cTnI校准等级和向非一级制造商选定测量程序的计量学溯源校准校准赋值程序实施物质f）贝克曼ACCESS免疫测定系统MLMLMLML制造商和终端用户g）万孚工作内控品h）万孚免疫荧光测量程序i）万孚产品内控品j）万孚免疫荧光测量程序图B.1cTnI校准等级和向非一级制造商选定测量程序的计量学溯源cTnI校准传递方案：（1）贝克曼ACCESS免疫测定系统赋值万孚工作内控品(f→g)仪器：贝克曼ACCESS免疫测定系统试剂：肌钙蛋白I测定试剂盒（化学发光法）检验室工作环境：温度为（25±5）℃，湿度为45%～75%（2）万孚工作内控品校准万孚免疫荧光测量程序(g→h)仪器：万孚免疫荧光检测仪试剂：心肌肌钙蛋白I（cTnI）定量检测试剂（免疫荧光层析法）万孚实验室工作环境：温度为（25±5）℃，湿度为45%～75%（3）万孚免疫荧光测量程序赋值万孚产品内控品(h→i)仪器：万孚免疫荧光检测仪试剂：心肌肌钙蛋白I（cTnI）定量检测试剂（免疫荧光层析法）万孚实验室工作环境：温度为（25±5）℃，湿度为45%～75%（4）万孚产品内控品校准万孚免疫荧光测量程序(i→j)仪器：万孚免疫荧光检测仪试剂：心肌肌钙蛋白I（cTnI）定量检测试剂（免疫荧光层析法）工作环境：温度为（25±5）℃，湿度为45%～75%B.3标识把上述样本组成一整套内控品，制定批号。B.4内控品储存把各内控品分装为100微升/管，贴标签（标注产品名称、批号、有效期、储存条件），放置在-20℃长期保存，有效期一年。B.5内控品的使用说明a)长期保存应在-20℃冷冻保存，避免反复冻融；b)使用前从冷冻取出，室温复温至少15分