hIFNβ-HSA在毕赤酵母中的诱导表达及其降解蛋白酶的鉴定的开题报告_第1页
hIFNβ-HSA在毕赤酵母中的诱导表达及其降解蛋白酶的鉴定的开题报告_第2页
hIFNβ-HSA在毕赤酵母中的诱导表达及其降解蛋白酶的鉴定的开题报告_第3页
全文预览已结束

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

hIFNβ-HSA在毕赤酵母中的诱导表达及其降解蛋白酶的鉴定的开题报告一、研究背景和研究意义干扰素β(HumanInterferonBeta,HIFNβ)是一种具有抗病毒、抗肿瘤、免疫调节等多种生物学活性的重要蛋白质。由于其广泛的临床应用价值，人们对其生产工艺进行了长期的研究，目前已经形成了以真菌或昆虫细胞为表达宿主的生产技术。然而，由于这些表达宿主存在生长速度慢、细胞培养成本高、蛋白质难以纯化等问题，使得HIFNβ的生产成本极高，从而限制了其临床应用。毕赤酵母(Pichiapastoris)是一种单细胞真菌，具有高度可调节的真核表达系统，能够高效表达同源外源蛋白，且表达产物易于纯化。因此，使用毕赤酵母表达HIFNβ，可以有效解决HIFNβ的生产成本高的问题，并为其临床应用提供了更广阔的前景。在毕赤酵母中表达HIFNβ的研究已经取得了一定的成果。然而，毕赤酵母中表达的外源蛋白需通过胞外分泌途径被分泌出细胞外，此过程中存在蛋白质不稳定、部分失活、较长的表达周期等问题，从而限制了其产量。因此，本研究计划通过构建高效的HIFNβ-HSA表达载体，并通过系统地优化表达条件、筛选降解蛋白酶等手段，提高HIFNβ在毕赤酵母中的表达水平和稳定性，为HIFNβ的生产提供更高效、更经济的方法，推动HIFNβ的临床应用。二、研究内容1.构建高效的HIFNβ-HSA表达载体本实验将设计一种基于毕赤酵母的HIFNβ-HSA表达载体，通过PCR从HIFNβ和HSA源DNA中扩增出HIFNβ和HSA的开放阅读框，并采用SOE-PCR的方法，将其连接起来。连接产物将用限制性内切酶切开，并与表达载体pPICZαA连接，形成pPICZαA-HIFNβ-HSA表达载体。随后，将鉴定重组质粒中HIFNβ-HSA编码序列和酶切位点的正确性。2.优化HIFNβ-HSA表达条件本实验将通过对信号肽和启动子的选择、过渡金属离子和产酸模型添加物等条件的优化，提高HIFNβ-HSA的表达水平。3.鉴定HIFNβ-HSA的表达水平和稳定性本实验将通过Westernblot和SDS鉴定HIFNβ-HSA的表达水平和稳定性，同时测定不同HIFNβ-HSA表达菌株的菌体和培养液的生长情况，确定表达最佳菌株。4.筛选分泌过程中的降解蛋白酶本实验将使用不同的降解蛋白酶针对HIFNβ-HSA进行分析，筛选分泌过程中的降解蛋白酶，探究其对HIFNβ稳定性的影响，为提高表达产量提供参考。三、研究进度安排2020年12月：文献综述与实验设备准备2021年1月-2月：样品采集、DNA扩增与质粒构建2021年3月-4月：对信号肽和启动子等表达条件进行优化2021年5月-7月：进行HIFNβ-HSA的表达水平和稳定性的鉴定2021年8月-9月：筛选分泌过程中的降解蛋白酶2021年10月-11月：数据处理和结果分析2021年12月：论文撰写和提交。四、预期成果本研究旨在通过构建高效的HIFNβ-HSA表达载体、优化表达条件、鉴定HIFNβ-HSA的表达水平和稳定性以及筛选

人人文库> 全部分类> 毕业设计 > 开题报告

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论