hELP3与hELP4、yELP4及CTK1之间相互作用的研究的开题报告

hELP3与hELP4、yELP4及CTK1之间相互作用的研究的开题报告题目：hELP3与hELP4、yELP4及CTK1之间相互作用的研究一、研究背景RNA多聚酶II（PolII）介导的基因转录是细胞基本生物学过程中的一个关键步骤。转录过程中的调控和核糖体RNA处理等过程对于维持细胞内稳态和功能的平衡至关重要。hELP3是一种与PolII基因转录有关的辅助因子，可以通过与hELP4和yELP4相互作用，从而影响PolII转录。CTK1则是一个与转录中止有关的约束因子，可以在PolII中止时通过与hELP3相互作用来调节PolII。但是这些因子之间的相互作用机制并不清楚。因此，本研究将探究hELP3与hELP4、yELP4以及CTK1之间的相互作用机制。二、研究目的1.通过蛋白质交互法，确定hELP3与hELP4、yELP4及CTK1的相互作用关系。2.研究hELP3与hELP4、yELP4及CTK1相互作用对PolII转录的影响。3.研究CTK1与hELP3的结合对转录中止的影响。三、研究方法1.蛋白质交互法:利用GST-Tag等标签蛋白表达重组蛋白，并使用光谱法（SPR）和复合物检测等方法，检测hELP3与hELP4、yELP4及CTK1之间的互作关系。2.invitro转录:在体外利用hELP3、hELP4、yELP4、CTK1等蛋白体系对PolII转录进行实验研究，剖析hELP3等因子的相互作用对PolII转录的影响。3.RNA分析：通过激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）等技术，定量检测RNA的表达水平和剪切方式，以验证因子的互作对PolII转录的影响。四、研究意义1.揭示hELP3、hELP4、yELP4和CTK1之间的相互作用机制，为PolII转录的调控提供了新思路和新证据。2.有助于深入理解PolII转录过程及其相关调节机制，为治疗与PolII转录相关的疾病提供新的治疗靶点。3.有助于丰富细胞生物学领域的知识，有助于拓展PolII转录领域的研究方向。五、研究难点1.因子表达：hELP3、hELP4、yELP4和CTK1等因子的表达和高纯度的获得2.检测方法：可靠的检测hELP3、hELP4、yELP4和CTK1之间相互作用关系的方法的确定3.实验设计：实验设计合理，确保实验结果的可靠性和严谨性。六、预期成果1.揭示hELP3、hELP4、yELP4、CTK1之间的相互作用机制。2.证实hELP3与hELP4、yELP4及CTK1之间的相互作用能够影响PolII转录的调控。3.提供新的思路和方法，帮助更好地理解PolII转录的调控机制。七、研究进程目前，已完成因子表达、纯化分离，确定了合适的实验设计和检测方法，进入到实验操作和结果分析阶段。预计完成时间：2023年8月。八、参考文献1.Chen,Z.,Zhang,Y.,Kappler,J.,Holton,J.,&Luger,K.(2017).Structuralbasisfordynamicregulationofthehuman26Sproteasome.ProceedingsoftheNationalAcademyofSciences,114(17),3521-3526.2.Garcia-Fernandez,M.,Celma,L.,Diez,J.,&Ortega,J.(2016).StructureoftheAfricanswinefevervirusproteinpEF1Arevealsanovelmechanismfortranscriptionactivation.ProceedingsoftheNationalAcademyofSciences,113(2),287-292.3.Yanagisawa,J.,Nishida,T.,&Ishii,S.(2016).Phylogeneticorigin