骨碎补烫制品中柚皮苷含量下降的原因分析

骨碎补烫制品中柚皮苷含量下降的原因分析

骨碎补是龙眼骨科植物的rynaliandryndarin（kunze）j.sm的干燥根茎。具有补肾强骨、连续伤止痛的功效，尤其是黄酮类化合物，如酒精。由于生品骨碎补覆有较多的鳞毛,因此在临床应用时往往采用砂烫法达到净制去毛的目的。烫制过的骨碎补膨胀鼓起,质地酥脆,利于粉碎和便于有效成分的溶出。有研究表明骨碎补烫制前后所含柚皮苷总量降低约30%,而又有研究表明砂烫骨碎补与生品(去毛)中的柚皮苷含量基本相同。同样是采用高效液相色谱法测定砂烫骨碎补中柚皮苷的含量,为什么结果却有如此之大的差异呢?笔者在试验研究中也遇到过此种情况,结合实践分析,认为在手工烫制骨碎补时虽然存在诸多影响因素,但最主要的影响因素应是投药量多少的不同,当投药量过大时,单锅烫制药材造成炮制过火导致成品质量下降,从而影响了炮制品中柚皮苷含量的差异。兹有实验数据证明如下。1仪器、药品和试剂液化天然气灶具(河北红日);圆底锅(锅口直径36cm,锅深32cm);水银温度计(量程300℃)电热鼓风恒温干燥箱(上海福马DGX-9143B-1,温度范围1℃-300℃,温度波动±0.1℃)高效液相色谱仪(SHIMADZULC-10AT);SPD-10A可调紫外检测器;MI-CROLITER.IM#702手动进样器;天津-chrom真空泵;AutoscienceAs3120B超声清洗器;N2000浙大智达色谱工作站。骨碎补药材购自河北安国昌达饮片公司,经本系中药鉴定学教研室主任崔桂华教授鉴定为水龙骨科植物槲蕨Drymariafortunei(Kunze)J.Sm.的干燥根茎。柚皮苷对照品(110722-200709,供含量测定用,购自中国药品生物制品检定所)。乙腈(色谱纯,天津科密欧化学试剂厂),水为重蒸馏水,甲醇、磷酸为分析纯。2方法和结果2.1净河砂的制作取未切制的原药材,除去个头较大和较小者。将2.5kg净河砂置于锅内,武火加热至灵活状态,投入大小均匀的骨碎补,不断翻埋,至药材全部膨胀鼓起,用笊篱捞出,放凉。撞去毛。2.2重量测定2.2.1流动相、柱温度色谱柱为DiammondODSC18反相柱(4.6mm×200mm),粒径5μm;流动相:乙睛—0.05mol/L磷酸三乙胺溶液(20:80);检测波长:283nm;柱温:25℃;流速:0.9ml/min。2.2.5精密度测试精密吸取同一供试品溶液10μl,按上述色谱条件操作,连续进样5次,分别测定色谱峰面积,测定结果RSD=0.87%。2.2.6重复试验取同一批次六份样品,分别按上述条件测柚皮苷含量,RSD为0.89%。2.2.7回收率试验取一样品粉末,精密称取5份,分别加入混合标准溶液1ml,按2.2.3项下方法制备、测定,测得柚皮苷平均回收率为98.11%。2.2.8样品的重量测量取药材及烫制品各0.25g,按2.2.3项下方法制得供试品溶液,以上述色谱条件测定,结果见表1。3讨论3.1骨碎补在实验条件下的化合物测定从表1中的实验数据可以看出,编号为A和B的烫制品中柚皮苷的量与生品相差不多,并且略高于生品,说明骨碎补在该实验条件下经过砂烫后其柚皮苷等黄酮类化合物的含量并没有受到影响,却有利于有效成分的溶出,与文献报道的结果一致。3.2水果粉中柚皮苷的含量编号为C的烫制品中柚皮苷的量却明显低于生品中柚皮苷的量,前者的平均含量较之于后者下降了约24%,与文献报道的情况较为相似。3.3碎补中柚皮苷的含量对标号为C的烫制品进行研究发现,一部分骨碎补的断面为红棕色或深褐色,这种骨碎补中柚皮苷的含量在0.297～0.303%之间,约占总量的52%。而另一部分断面仍为淡棕色的骨碎补中柚皮苷的含量为0.573%左右,约占总量的48%。两种不同含量制品的共存使得编号为C的烫制品中柚皮苷的量明显低于生品和其他烫制品。3.4锅内河砂质量柚皮苷含量范围在0.297%～0.303%之间的烫制品除了断面颜色加深外,表面焦斑也较多,属于炮制操作中的“过火”现象。砂烫药材时,要求河砂的量应以能完全掩盖包埋住药材为度。由于本实验中,锅内河砂的量是固定的,所以在烫制药材时如果投药量较多(500g),则在翻炒过程中会造成部分药材沉入锅底,而锅底的温度非常高,很容易使药材炮制过火。其次,如果单锅烫制的药材的量较大,则使锅内药材全部膨胀鼓起的时间就会较长,而长时间的加热会使河砂蓄积的热量过大从而使砂温过高,也会使药材出现过火现象。因此,笔者认为在相同的操作条件下投药量过大造成药材炮制过火是导致成品质量下降的主要原因。3.53.6砂烫后膨胀鼓起骨碎补药材质地坚硬,干瘪而弯曲,砂烫后立刻膨胀鼓起且比较直,此种变化较之于饮片来说更为明显,因而在本实验中采用的是药材的个子货而非饮片。3.7工作中不可替代而对于那些不具备自动炒药机的医疗、科研及教学单位,手工烫制药物仍是工作中不可替代的操作手段。在手工操作时,河砂的用量,火力的大小,加热时间的长短,投药时机的判断,投药量的多少,翻炒的速度和方法,药物炒至程度的辨别以及出锅的快慢都会影响到炮制品质量的好坏。3.82烫制时间的影响笔者在研究中发现,河砂的温度范围在140℃～190℃之间,都会使药材“膨胀鼓起”,只是烫制的时间不同。烫制品虽然在外观上较为相似,但内在差异往往较大。因此建议药典对烫制要求的描述进行量化。3.92.2.2稀释液的稀释精密称取在110℃干燥至恒重的柚皮苷对照品12mg,置l0ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取lml,置l0ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,再精密量取稀释液5m1置l0ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。(68.7μg/ml)。2.2.3微孔滤膜将骨碎补生品及烫制品粉碎成粗粉备用,精密称定0.25g样品于100ml锥形瓶中,加甲醇30m1,加热回流3小时,放冷,滤过,滤液置50m1量瓶中,用少量甲醇分数次洗涤容器,洗液滤入同一量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,过微孔滤膜,即得。2.2.4药物投加量的影响精密吸取对照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10μl注入高效液相色谱仪中,按上述色谱条件进行测定,记录色谱峰面积,以峰面积对药物质量进行回归,得回归方程为y=1085.82467x-1.