egcg对c57bl6小鼠模型的影响

egcg对c57bl6小鼠模型的影响

非脂肪食品。为了探讨EGCG与毛发生长的关系,笔者以C57BL6小鼠作为动物模型,观察EGCG对小鼠脱发模型毛发生长及毛发周期的影响。1材料和方法1.1材料表面1.1.1小鼠皮色糯米粉C57BL6小鼠,雌性,8周,15~20g,同系,共24只,中国科学院药物研究所动物中心提供。选择皮色粉红,毛发属于休止期的小鼠。C57BL6小鼠的毛发周期同步,可根据其皮肤颜色判断毛发周期的阶段变化,毛发生长期皮肤呈黑色,退行期呈灰色,休止期呈粉红色。1.1.2主试剂1.2方法1.2.1小鼠背毛消毛将松香与石蜡1:1混合加热融化后,均匀涂于小鼠背部,涂抹面积约2cm×3cm,冷却凝固后揭去,以去除背毛。确认毛发生长期处于休止期。1.2.2动物分组及给药脱毛次日,选取脱毛区光滑无皮肤破损的小鼠,随机分为4组,每组动物数6只。分别是:(1)实验组:给予8%EGCG乙醇制剂;(2)阳性对照组:给予5%米诺地尔溶液;(3)基质组:给予基质液(乙醇);(4)阴性对照组:不涂抹药物。1.2.3给药1.2.4皮肤组织病理学检测每天观察小鼠皮肤及毛色变化,记录每只动物背部去毛区皮肤颜色从涂药到开始变黑的时间;阴性对照组记录脱毛后第1天到开始去毛区皮肤变黑的时间;去毛区开始变黑到长满毛的时间,并定期拍照。第4、12、20天时,取各组小鼠背部相同位置皮肤组织块,用10%福尔马林固定,石蜡包埋切片,切片厚约4~5μm,HE染色,光镜下观察。观察指标如下:(1)一般组织学检查:观察皮肤完整性,有无充血、水肿、炎细胞浸润等反应及程度;(2)毛囊计数,每例数3个高倍视野(×400)的毛囊数,取其均值,并进行统计学处理。1.2.5统计评估2结果2.1皮肤黑色及灰色持续的时间(1)实验组小鼠在拔毛后第5~6天局部皮肤逐渐出现黑色,毛发进入生长期,10天后新的毛发长出,20天时皮肤颜色又经灰色(退行期)变为粉红色(休止期),皮肤黑色及灰色共持续约15天;(2)阳性对照组小鼠在拔毛后第5天局部皮肤渐出现黑色,毛发进入生长期,9天后新的毛发长出,20天时皮肤颜色又经灰色(退行期)变为粉红色(休止期),皮肤黑色及灰色共持续15天;(3)基质组、阴性对照组小鼠均在拔毛后第6天局部皮肤由粉红色变为黑色,10天后新的毛发长出,19天时皮肤颜色又经灰色变为粉红色,皮肤黑色及灰色共持续13天。2.3小鼠在统计学上的差异实验第20天,各组小鼠毛囊数目见表1。实验组、阳性对照组与阴性对照组小鼠在统计学上均具有极显著性差异,P<0.001,基质组与阴性对照组相比无显著性差异,P>0.05。且实验组与阳性对照组相比较无显著性差异,P>0.05。3皮肤长期毒性作用EGCG是绿茶提取物茶多酚中的一种主要活性单体,具有抗炎、抗氧化、抗病毒、调节机体免疫及诱导肿瘤细胞凋亡等作用。研究发现,EGCG对多种肿瘤细胞增殖表现不同程度的抑制作用,其机制与诱导肿瘤细胞凋亡,诱导肿瘤细胞周期阻滞,对细胞信号传导通路的影响等有关。也有报道显示EGCG对正常的表皮角质形成细胞有促增殖作用。2006年Kwon等首次报道了EGCG可促进人毛发生长。国内李梅云、范卫新等研究也发现一定浓度的EGCG可促进体外培养的人毛囊生长和毛乳头细胞增殖。目前国内外未见EGCG对毛发生长周期影响的相关报道。本研究以C57BL6小鼠为模型,设立阳性对照、阴性对照,观察外用EGCG溶液对毛发周期、毛囊密度、毛囊形态的影响。C57BL6小鼠是研究毛发周期的动物模型,毛发呈周期性生长,毛发周期分生长期、退行期和休止期。。该小鼠毛发呈黑色,皮肤中的黑素细胞均分布于毛囊,仅在毛发生长期才合成分泌黑素,并将黑素传递给角质形成细胞,使皮肤呈黑色;在毛发退行期,黑素合成减少,皮肤逐渐由黑色变为灰色;休止期无黑素合成,皮肤呈粉红色。经组织学验证,该小鼠皮肤颜色的变化能反映毛发生长周期的不同时段。该小鼠在6~8周饲养良好状态下,所有毛囊均由生长期(皮肤黑色)进入休止期(皮肤粉色)状态,而且在生理状态下不再自发进入生长期,但经人为拔毛后可被诱导进入生长期,拔毛后第5~6天皮肤颜色变黑(生长期第Ⅳ亚期),黑色持续12天又转为灰色(退行期),2天后皮肤转为粉红色(休止期)。米诺地尔溶液是临床应用极为广泛的一种治疗各类脱发的药物,有研究表明,其可以使毛发提前进入生长期,延长生长期时间,并缩短休止期,并能使毛囊增大。故本研究选用5%米诺地尔溶液为阳性对照。本实验发现,与阴性对照组小鼠相比,实验组小鼠皮肤颜色提前24h由粉红色变为黑色,推迟24h由黑色变为灰色,毛囊生长期时间较阴性对照组长近72h,表现与阳性对照组结果相似。提示EGCG与米诺地尔一致,可诱导毛囊进入生长期,延长生长期时间,并推迟进入退行期。我们还发现,实验第4天时,切取每组小鼠背部皮肤,观察到实验组和阳性对照组皮下血管网丰富,血管较粗;而基质组和阴性对照组未见此现象。推测EGCG和米诺地尔一样具有促进血管增生的作用。同时在实验第20天,我们观察到实验组、阳性对照组与阴性对照组小鼠毛囊数目,在统计学上均具有极显著性差异,P<0.001;基质组与阴性对照组相比无显著性差异,P>0.05;实验组与阳性对照组相比较无显著性差异,P>0.05。由此可见EGCG具有促进毛囊生长的作用,且此作用与米诺地尔相当。本研究结果显示EGCG可诱导C57BL6毛囊进入生长期,延长生长期时间,并推迟进入退行期,具有促进毛囊生长的作用,可能与其促进血管增生作用有关。国内外均有研究发现EGCG可促进人毛发及体外培养的毛囊生长和体外培养的毛乳头细胞增殖。但人与动物有着种属差异,故EGCG促进毛发生长作用的机制有待进一步的研究。EGCG购于美国Sigma公司,货号E4143;5%米诺地尔溶液(商品名:蔓迪)。局部皮肤直接用棉签涂抹给药,每天定时给药1次,每次给药量为0.1ml,连续给药20天。采用SPSS.11统计软件进行两样本均数的t检验。2.2皮肤he染色观察2.2.1实验第4天时,切取每组小鼠背部皮肤,可观察到实验组和阳性对照组皮下血管网丰富,血管较粗;而基质组和阴性对照组未见此现象,见图1。