精液冷冻保存在宫腔内人工授精周期中的应用

精液冷冻保存在宫腔内人工授精周期中的应用

宫内粘连技术（iui）作为辅助生殖技术的重要组成部分，通过该技术的简单操作和相对较低的成本，它在治疗失眠症方面发挥着越来越重要的作用。人类精液冷冻保存起源于1963年,目前该技术已经相对成熟并在临床和科研上得到广泛应用,在男性生育力保存以及克服男性心理疾患等方面发挥着重要作用。少弱精子是导致男性不育的主要原因。中药、IUI是治疗少弱精子症较常用的方法,但中药单独治疗周期较长,部分少弱精子症患者中药治疗后并无明显改善,而单行IUI则常因精子质量问题导致治疗失败。若能将少弱精子症患者精液多次冷冻保存,富集活力高的精子用于IUI,可能是解决其生殖障碍的有效方法。本文分析了本中心2008年3月至2009年6月152个IUI治疗周期,对部分少弱精子症患者的精液进行冷冻保存,精液解冻后结合新鲜精液行IUI,以探讨因少弱精子症所致不育的有效治疗方法。1数据和方法1.1少弱精子症选择2008年3月至2009年5月来本中心就诊患者103对夫妇,均为原发性不孕,共行152个IUI治疗周期;其中精液正常者53个周期,少弱精子症者99个周期。按精液质量情况将152个IUI治疗周期分为3组,精液正常患者对其配偶行IUI53个周期(组1),少弱精子症者行IUI52个周期(组2),经中药治疗后无明显改善的少弱精子症患者,经精液冷冻保存后结合新鲜精液行IUI47个周期(组3)。少弱精子症的诊断参照WHO《人类精液及精子宫颈粘液相互作用手册》第四版标准。女方患者阴道B超监测有排卵,输卵管碘油造影检查至少一侧输卵管通畅。1.2抗机构1.4模型的重建中药治疗后无效的少弱精子症患者,当精液处理前前向活动精子总数(a+b)不低于5×106时,患者在签署精液冷冻保存知情同意书后行精液冷冻保存。1.3不同冷冻条件下精子的解冻待精液液化完全后按1∶3的比例分别将SpermCryoProtecTMⅡ(Nidacon,美国)和新鲜精液加入到2ml的冻存管(Corning,美国)中,混匀后将冷冻管固定于冷冻支架(NALGENE,美国)上,于4℃平衡1h,随后将冷冻支架置于距离液氮面1cm处熏蒸10～15min,然后迅速投入液氮中保存。IUI时将冷冻管迅速取出后置于37℃水浴锅中持续震荡解冻10min。精液冷冻前、解冻后用精子专用计数板(Makler板)于显微镜下检测精子活力、密度等指标。将新鲜精液或冷冻复苏后的精液标本分别加至底层为1.5ml的80%PureSperm(Nidacon,美国),上层为1.5ml的40%PureSperm液面上,保持界面的清晰,300×g离心15min(冷冻复苏精液离心20min),弃上清。将沉淀悬浮于4ml的PureSpermWash(Nidacon,美国)中,300×g离心10min,留沉淀0.5～0.8ml混匀备用,精液洗涤前后取样镜检。要求患者精液处理后前向活动精子总数(a+b)达到10×106以上方可行IUI。1.4血hcg检测女性患者根据年龄、卵巢功能和性激素水平不同,一般采用克罗米酚、人绝经期促性腺激素(HMG)、来曲唑等不同的促排卵治疗方案,持续监测卵泡发育情况,当优势卵泡发育成熟或检测到LH峰值时,注射人绒毛膜促性腺激素(hCG)5000～10000IU,于次日下午行IUI治疗。女方取截石位,甲硝唑和无菌生理盐水消毒清洗会阴,暴露宫颈后用1ml的注射器与专用的人工授精管(WALLACE,AIC18,英国)连接,抽吸精子悬液注入宫腔后,抬高臀部,平卧休息30min。IUI后次日B超监测卵泡排卵后,中药口服健黄体并辅以黄体酮肌注20mg/d,14d后检测女方血hCG值确定有无生化妊娠;35d女方复查B超,见胎心认定为临床妊娠。1.5妊娠率的统计方差分析采用SPSS17.0对各组间不孕患者年龄、不孕年限、各项精液常规参数等数据进行方差分析,对各组间妊娠率进行χ2检验。P<0.05为差异有显著性。2两组前向活动精子总数的比较各组之间男方年龄、女方年龄及不孕年限均无显著性差异,见表1。组3处理前精液体积、精子密度、精子活率、a级精子、b级精子、处理后前向活动精子总数均低于组1,差异有极显著性(P<0.01);组3精液体积、精子活率、a级精子均低于组2(P<0.01),组3处理后前向活动精子总数高于组2,但差异不显著(P>0.05),见表1。组3生化妊娠率最高,组1次之,组2生化妊娠率最低;组1临床妊娠率最高,组3临床妊娠率低于组1,高于组2,但各组间妊娠率差异不显著(P>0.05)。见表2。3妊娠率的总体要求IUI是治疗各种原因引起的男性不育的主要方法之一。与体外受精-胚胎移植(IVF-ET)和单精子显微注射(ICSI)等技术难度更大、费用更高、侵袭性更强的其他辅助生殖技术相比,IUI更符合正常的生殖生理过程,其治疗费用、胎儿畸形率和死胎率均比较低,因此当男性不育病因治疗无效时,通常先尝试IUI治疗,除非患者无可供使用的精子。Francavilla等的研究认为,对于少弱精子、畸精症及抗精子抗体阳性夫妇而言,IUI结合卵巢微刺激较单纯行IUI更为有效。大部分文献都认为,IUI过程中妊娠率随着活动精子总数的增加而递增,处理后的活动精子总数可以作为事先预测IUI妊娠结果的指标。一般认为,处理后活动精子总数(PTMS)是判断男性患者生育力的潜在指标,要想获得预期的IUI妊娠率必须要求PTMS达到一定的量。对于PTMS阈值目前尚无统一标准,不同研究者之间的观点并不统一。多数文献认为PTMS>10×106时,可以获得IUI适宜的周期妊娠率。Braschd等认为PTMS计数3×106是IUI受孕的最低阈值,但只有当PTMS>20×106时才可以显著提高妊娠率。Francavilla等则认为如果没有畸形的精子,甚至少于5×106的严重少精患者也不会影响IUI妊娠率。卢少明等建议当男性患者PTMS>10×106时,应首选IUI治疗;当PTMS为5～10×106时,因IUI较之其他辅助生殖技术经济、易接受等特点,也可先试行IUI;但若PTMS<5×106,则应直接求助其它更为可靠的辅助生殖技术。中医药治疗少弱精子可以明显改善患者精子质量,有一定疗效。何驰华等研究证明,中药制剂联合密度梯度离心制备法治疗少弱精子症较单独用中药治疗或单独用IUI治疗其配偶妊娠率要高。但临床实践中表明部分少弱精子症患者通过中医药治疗后精液质量并无明显改善,无法满足IUI的要求。本文针对少弱精子症患者进行精液冷冻保存,以获得尽可能多的PTMS,尤其是前向活动精子总数并应用于IUI,同时对各组精液处理前后的各项参数以及妊娠率进行比较,结果显示,少弱精子症患者经精液冷冻保存后结合新鲜精液行IUI,处理后前向活动精子总数达到20×106以上,明显高于未冻存精液的少弱精子症患者,说明通过精液冷冻保存,可以增加患者PTMS,尤其是前向活动精子总数,满足开展IUI技术的要求。组3生化妊娠率最高,但临床妊娠率低于组1,推测精液冷冻过程中是否会对精子结构产生影响,虽然可以使卵子受精并着床,促使滋养层细胞分泌hCG,却无法维持胚胎着床后的继续发育。未冻存精液的少弱精子症患者临床妊娠率不足10%。经精液冷冻保存后结合新鲜精液行IUI的少弱精子症患者临床妊娠率高于未冻存者,与精液正常患者临床妊娠率接近,但差异无显著性(P>0.05)。因此通过精