两头尖地上有效成分的化学结构研究

两头尖地上有效成分的化学结构研究

中药的两个头部是毛科银莲花的干燥茎，通常生长在东北和山东，是吉林省最大的灵体银莲花。该药首载于明朝刘文泰所著《本草品汇精要》中,临床上有“祛风除湿,消痈肿”的作用,用于“风寒湿痹、四肢拘挛、骨节疼痛、疮痈溃烂”等症,国内学者先从两头尖中分离鉴定出三萜皂苷、内酯、挥发油、油脂、氨基酸等化学成分,其主要活性成分为皂苷类。两头尖皂苷具有抗肿瘤、抗炎、镇痛、镇静、抗惊厥、抑菌等生物活性[7,8,9,10,11,12,13,14],竹节香附素A作用较强。本文对两头尖地上茎、叶、果部分进行了提取、分离,得一单体皂苷,经化学和光谱证明为竹节香附素A,并以其为含量测定指标,用HPLC法测定了茎、叶、果及根茎中的含量,为进一步扩大药源提供了科学依据。1提取、分离和鉴定2头尖茎、叶片和果实中的肥皂酚1.1材料和方法1.1.1毛科银莲花属植物的鉴定两头尖茎、叶、果实采于吉林左家,经长春中医学院邓明鲁教授鉴定为毛莨科银莲花属植物多被银莲花(AnemoneraddeanaRegel)。1.1.2仪器、试剂和仪器三用紫外灯,上海顾村电光仪器厂;自动部分收集器(BSI-100型):上海沪西仪器厂;冷冻干燥机(JDY-Ⅱ型):宁波新艺科器研究所;显微熔点测定仪(X-4型)吉林大学生产;傅立叶变换红外光谱仪(FTS-135型),美国Bio-RAD公司;LC-6A高效液相色谱仪(日本);甲醇分析纯,北京化工厂;紫外光谱纯甲醇,上海振兴化工二厂;其它试剂均为分析纯。1.2皂苷的提取取茎粗粉加甲醇回流3次,每次1h,过滤,滤液回收甲醇,浓缩至小体积,倾入5倍量丙酮,放置过滤,沉淀加适量水溶解,乙醚萃取,水层加水饱和正丁醇萃取5次,正丁醇层减压回收正丁醇至干,加水溶解,过滤,滤液上大孔吸附树脂AB-8(脱糖,脱色),60%洗脱,醇洗脱液回收乙醇至干,得总皂苷提取物,经硅胶干柱层析,以CHCl3:MeOH:H2O=65:35:10洗脱至柱底分割硅胶各段,经TLC检识竹节香附素A,与对照品鉴定,相同合并,用甲醇洗脱,回收甲醇,得皂苷粗分物,经甲醇反复重结晶,得化合物Ⅰ。1.3结构评价1.3.1低极性溶剂化合物Ⅰ为白色粉末状结晶,易溶于水、甲醇、乙醇,不溶于丙酮、乙酸乙酯等低极性溶剂,该化合物李伯曼(Liekermann-Burchard)反应呈紫红色阳性反应。且与对照品竹节香附素A作混合熔点测定与文献比较基本一致,即混合熔点不下降,mp:243.5℃～244℃(温度计未校正)。1.3.2反相硅胶高效层析显色以3种溶剂系统A、B、C进行薄层(高效硅胶G薄层板)展开,并与对照品竹节香附素A作同行对照,喷以10%H2SO4乙醇液于105℃烘约5min,均为一紫红色斑点,无其它杂质斑点,Rf值分别为0.45、0.37、0.34,其反相硅胶高效薄层(RP-HPLC)展开(MeOH-H2O=6:4),硫酸显色亦为紫红色单一斑点且无杂质斑点,其Rf值为0.74。1.3.3检测波长及检测波长色谱条件:(1)SPD-6A紫外可见检测器,Shimpack-C18反相色谱柱:MeOH:H2O=7:3,流速1.0ml/min,检测波长:206nm(紫外光谱中最大吸收浓度为206nm,见紫外光谱图);(2)SPD-6A紫外可见检测器,Shimpack-C18反应色谱柱,柱形:4.6mm×200mm,流动相:CH3CN:H2O=4:6,流速:0.8ml/min,检测波长206nm,化合物Ⅰ经HPLC法检测,2种色谱条件下均为单一色谱峰,经面积归一化法计算其相对纯度分别为98.7223%和98.0374%。1.3.4光谱测定1.3.4.1uv光谱化合物I经紫外全波长扫描,在206nm处有最大吸收,即λmax=206nm,其紫外光谱图与竹节香附素A对照品作对照完全一致。1.3.4.对照品标准图谱红外光谱中有波数为3415cm-1的羟基吸收峰,2942cm-1的C-H伸缩振动峰,1635cm-1和1542cm-1的C=C伸缩振动峰,1076cm-1和1052cm-1的C-0键吸收峰,以其特征吸收峰均与竹节香附素对照品标准图谱一致。1.3.5测定化合物a通过化合物I的理化分析、混合溶点、TLC、HPLC、UV光谱、IR光谱测定并与对照品竹节香附素A作对照,鉴定化合物Ⅰ为已知化合物,即两头尖皂苷竹节香附素A。1.3.6结构鉴定方法本文同时进行了叶和果中皂苷的提取、分离和结构鉴定,方法与茎相同,也分别获得一白色粉末结晶,经同上方法鉴定其结构为已知化合物两头尖皂苷竹节香附素A。2两头尖茎、叶、果及根中竹节香附素a含量的测定按上述两头尖茎、叶、果的提取工艺,分别获得两头尖茎、叶、果及根茎总皂苷,用HPLC法,分别测定了两头尖茎、叶、果实及根茎中竹节香附素A的含量,结果见表1。3单体化合物的筛选本文首次从两头尖茎、叶、果中提取分离得到总皂苷及一单体皂苷,经紫外光谱、红外光谱、高效液相、薄层色谱及熔点等测定分析,确定了分得的单体化合物为竹节香附素A(RaddeaninA)。实验结果表明,两头尖活性成