贝克曼全自动生化分析仪电解质配套试剂盒的研制

贝克曼全自动生化分析仪电解质配套试剂盒的研制

美国贝克曼-库尔特的生物化学分析仪是一种非全日制自动分析仪。它具有高精度、精密度和稳定性。已在中国各级医院使用。该分析仪电解质(NA+、K+、CL-)采用间接离子选择电极测定原理,目前进口配套试剂成本较高,影响了实验室的应用。现国内已有对CX系列分析仪生化项目配套试剂的研制报道,但尚无对电解质测定配套试剂研制成功的报道,为此,本研究对CX系列电解质测定的配套试剂(包括缓冲液、参比液、清洗液等)进行了研制,也已取得成功,现将该试剂盒的研制和验证结果进行介绍。1材料和方法1.1加入适量稳定剂或防腐体系贝克曼-库尔特△CX3、CX5全自动生化分析仪;精密分析天平;原装贝克曼CX系列电解质测定配套试剂;自配试剂:①缓冲液:精确称取各分析物溶于去离子水,加入适量稳定剂或防腐剂。物质浓度:三羟甲基氨基甲烷(Tris)0.5mol/L,顺丁烯二酸25g/L,异丙醇5ml/L,曲拉通1ml/L。②参比液:精确称取各分析物溶于去离子水,加入适量稳定剂或防腐剂。物质浓度:CH3COOCa2mmol/L,NaCl96mmol/L,NaNO334mmol/L,NaHCO310mmol/L,KCl4mmol/L。③清洗液:异丙醇25%(V/V),苯氧乙醇12%(V/V),曲拉通20ml/l。1.2英国朗道公司生化质控血清(批号:296UN);门诊和住院患者血清标本100份混合分装,另选线性范围内浓度分布均匀的临床血清标本40份,-20℃保存。1.3方法1.3.1标准溶液及试剂稳定性试验①定标曲线:自配试剂采用贝克曼原装定标液定标,定标曲线ADC值(类比数字信号)应符合仪器设定范围;②准确度试验:试剂盒在适用机型上测定定值质控品(英国朗道公司)20次,计算平均偏差;③精密度试验:采用混合血清标本批内测定20次;批间20d,每次采用一个分装血清标本,重复测定2次,计算批内和批间精密度;④线性范围测定:配置一定浓度的电解质标准液,稀释成一系列浓度梯度进行测定,要求Na+:100～200mmol/L;K+:1～15mmol/L;Cl-:50～200mmol/L;⑤稳定性试验:配套试剂不稳定主要见于参比液pH值和离子成分变化,因此将试剂室温下存放一年,每两个月测定pH值和主要离子成分Na+、K+、Cl-、Ca2+。⑥相关比较试验:用自配试剂与贝克曼原装试剂同时测定40份临床血清标本,计算回归方程和相关系数。1.3.2统计方法正态分布计量资料采用均数±标准差(x¯±s)(x¯±s)表示,组间比较采用配对t检验,P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1混合血清批检测结果按实验设定,自配试剂采用贝克曼原装定标液的三条定标曲线ADC值完全达到仪器要求,满足仪器的要求设定。自配试剂盒测定朗道质控血清20次,Na+、K+、Cl-测定结果分别为144.06±0.962mmol/L、4.02±0.021mmol/L、101.09±1.027mmol/L,平均相对偏差分别为0.83%、1.03%、1.34%,能满足临床实验室需要。自配试剂盒测定混合血清批内20次、批间20d变异系数均小于2%,精密度较好,满足临床实验室要求。结果见表1。采用自配试剂对一系列浓度梯度的稀释标准液进行测定,结果表明Na+在80～200mmol/L、K+在1～15mmol/L、Cl-在50～200mmol/L有较好的线性关系,与原装试剂基本一致。将自配试剂室温放置一年,每两个月分别测定参比液pH值和主要离子成分,结果表明在室温条件下参比液基本无变化,稳定性较好。用自配试剂与贝克曼原装试剂同时测定40份临床血清标本,结果表明自配试剂与贝克曼原装试剂高度相关,Na+、K+、Cl-相关系数r均大于0.99;配对t检验显示两种试剂检测结果差异无统计学意义(P>0.05),满足临床实验室要求。结果见表2。3实验结果与分析公司推荐的新型全自动生化分析仪,具有选择性单美国贝克曼(BECKMAN-COULTER)推出的CX系列产品(包括CX3、△CX3、CX4、CX5、CX7、CX9),属于多项目任选式全自动分析仪,由于其检测速度快、标本用量少、性能稳定,被多家医院所运用。该系列电解质的测定,采用离子选择电极法,由于其准确度和精密度极高,电极寿命很长,仪器故障率较低,在电解质测定方面享有很高的知名度,在中国目前已销售近千台,属于比较主流的全自动生化分析仪。但进口试剂较昂贵,同时也存在供货不太及时的缺陷(贝克曼在中国目前还没有试剂生产基地),对实验室的广泛应用产生了一定影响。国内已有总蛋白、肌酐、尿素、肝功酶类、血脂贝克曼生化试剂研制成功的报道,但其配套电解质测定试剂盒尚没有报道。为此,本研究开展了对CX系列分析仪电解质测定配套试剂的研制。从实验结果来看,准确度、精密度、线性范围、试剂的稳定性均达到实验预期目标,与进口试剂的相关性较好(r>0.99)。两种试剂检测结果差异无统计学意义(P>0.05),与原装试剂基本一致。与原装试剂相比,我们研制的缓冲液在可以提供适当离子强度的前提下,Tris仅为0.5mol/L(原装试剂需要1.5mol/L),主要原材料成本可以减少2/3用量。另外,本研究选择顺丁烯二酸作为缓冲液pH调节原料,没有采用原装试剂选用的H3PO4,因为在实际应用中我们发现,Cl-定标过程中,尤其是Cl-电极使用很长时间,经过多次打磨后,含有H3PO4的原装试剂在定标过程中有超范围报警,导致定标失败。而我们研制的缓冲液选用顺丁烯二酸避免了此种情况的发生,且自配试剂在Na+、K+、Cl-定标过程中与原装试剂基本一致。在参比液试剂方面,我们在研制过程中将其pH值选择为9左右,比原装试剂略小,因为国内很多贝克曼CX系列生化仪用户发现,原装参比液试剂存在开盖后不稳定的情况,特别是Ca2+,原装参比液开盖一周后,由于存在与空气接触,其参比液中Ca2+大大降低,导致定标时出现标1超范围报警,定标失败。本研究研制的参比液已经克服了这一缺陷,可以稳定保存一年,同时在实际使用过程中也没