高效液相色谱法测定农产品灭多威残留量

高效液相色谱法测定农产品灭多威残留量

为了监测永久性残余对农产品的影响，评估永久性残余留在农产品中的情况，防止其污染，本实验对广州不同品种的农产品进行了测定。从不同程度上讲，需要调查不同程度的分散残余，为分析和解决当前市场上农产品的农药和卫生问题提供了一定的基础。1实验部分1.1仪器美国Biorad700高效液相色谱仪、1706UV检测器,7125进样器,C18色谱柱,分析天平,恒温水浴箱。1.2甲醇溶液现用灭多威标准储备液1.17mg/ml,灭多威储备液1.00mg/ml甲醇溶液均由广东省植保站提供;乙酸乙酯、石油醚、正己烷、氯仿、NaCl、无水硫酸钠均为分析纯,甲醇为色谱纯,实验用水均为双蒸水。1.3实验步骤1.3.1选择样品,购买样品从广州市农林市场购买菜心、菠菜、白菜、番茄、茄子、四季豆、蕃石榴等样品,中华广场吉之岛超市购买生菜、芥蓝、菜心、青椒、布林、贡梨、砂糖桔、苹果、烟叶等样品。1.3.2提取液的制备称取样品20g,搅碎,用50ml乙酸乙酯分次洗入250ml具塞三角烧瓶中,浸泡、振荡半小时。将提取液过滤,滤液移入蒸发皿,用15ml乙酸乙酯分次洗涤残渣,洗液并入蒸发皿。在60℃水浴中蒸发除去乙酸乙酯后,用25ml双蒸馏水分次洗入125ml分液漏斗中,加入2.5gNaCl,用30ml石油醚分次萃取水层后弃去,再用20ml正己烷分两次萃取水层后弃去,水层用50ml氯仿分3次萃取,萃取液流经5g无水硫酸钠干燥后,移入蒸发皿,于60℃水浴蒸发除去氯仿,用甲醇溶解定容至3ml,待上机分析。加标样是搅碎的样品在用乙酸乙酯洗入三角烧瓶后加入50μl灭多威标准储备液,其余处理同样品。1.3.3标准曲线的测定色谱柱为100×8mmC18反相键合柱,流动相为甲醇∶水(V/V)=1∶1,流速为1.0ml/min,检测波长为235nm,进样20μl,在上述条件下,用灭多威的保留时间定性,用峰面积,按标准曲线定量。2结果2.1不同色谱条件下灭多威的保留时间取20μl灭多威标准液(1.17μg/ml),在上述的色谱条件下得到灭多威的保留时间为3.73min±0.4min,及其标准色谱图。2.2标准工作曲线用标准灭多威储备液配成1.17μg/ml,11.7μg/ml,23.4μg/ml,46.8μg/ml标准工作液,按照上述色谱条件进样分析,绘出标准工作曲线,回归方程为Y=-0.880+1.053×10ˉ2X,r=0.998,灭多威在1.17～46.80μg/ml范围内呈现良好的线性关系。按产生二倍噪声信号时的最小进样量测得最小检出限为2.0ng,最低检出浓度为0.4μg/ml。2.3加标回收率的测定选取未受灭多威污染的农产品做加标回收实验,按表1加入一定量的灭多威标准溶液,按实验方法处理后,在上述的色谱条件下测定灭多威的残留量,结果见表1,灭多威在农产品样中的平均加标回收率为71%～98%,变异系数小于7.0%。2.4残留量测定取多种农产品样品,按实验方法处理后,在上述的色谱条件下测定灭多威的残留量,见表2、3。灭多威在市场来源样品中的检出率为42.86%,在超市来源样品中的检出率为33.33%,总样品检出率为37.50%。3关于消灭灭多威的农业残留情况灭多威,也称万灵,是一种广谱性氨基甲酸酯类杀虫剂,可用于防治多种作物的菜青虫、蚜虫、跳甲、斜纹夜蛾、甜菜夜蛾、蓟马、潜叶蛾、烟青虫等,在我国登记的作物为甘蓝、柑桔、烟草、棉花等。通过对我省农药使用情况的调查,以及广东省植保站2003年农药需求的统计得知,2003年灭多威在我省的需求量为150吨,折100%含量为75吨。近年来,灭多威作为一种新型氨基甲酸酯类杀虫剂,在广大农村地区开始被逐渐用于防治蔬菜、瓜果、棉花病虫害。由于灭多威是一种高毒杀虫剂,其毒性强,气味小,无色,易溶于水,易因灭多威在农作物中的残留而引起食物中毒事件的发生,因此应建立对灭多威在农产品中的残留情况进行监测。目前有关灭多威残留量的分析方法,国内外报道较少,且大都前处理过程操作繁杂,回收率也较低。3.1检测方法的选择根据国内外文献报道,目前灭多威的测定方法主要为气相色谱法和高效液相色谱法,由于灭多威的热稳定性差,使气相色谱法的应用受到了一定的限制。因此,近年来国内外对高效液相色谱法检测灭多威残留量的研究较为活跃,多为柱后衍生-荧光检测器检测的高效液相色谱法。但是使用柱后衍生-荧光检测器方法需要专门的衍生反应装置,有的需要使用昂贵的全自动凝胶渗透色谱净化仪(GPC),而且操作过程十分繁琐,不易普及推广。所以本实验选用高效液相色谱法-紫外检测器方法检测灭多威残留量,该方法操作比较简便,选择的检测波长为灭多威最大吸收波长235nm,用石油醚除去农作物中的酯溶性强的色素及其它杂质,再用正己烷进一步除去酯溶性稍弱些的色素等杂质,经过前处理杂质已经分离较完全,灭多威和杂质峰也有很好分离效果;再用灭多威的保留时间定性,用峰面积,按标准曲线定量,检测方法精密度高,准确度好。而且本方法没有使灭多威和热水直接接触,避免灭多威在热水中的水解,使加标回收率提高到71%～98%,高于国外文献报道的70%左右。3.2实验残留结果在所测农产品样中灭多威的残留检出率为33%～43%,其检出量为0.45～7.88mg/kg,如果按照回收率约为80%计算,其实际含量约为0.56～9.85mg/kg。本实验残留结果分析说明,灭多威作为高毒杀虫剂,在我国广大地区仍有一定的使用量,在市售产品中的残留问题仍然比较严重。根据我国农业部颁布的《农药安全使用标准》,限制灭多威仅限用于甘蓝、柑桔、烟草和棉花的杀虫,而本实验测得含有灭多威的样品中,除了砂糖桔是在灭多威的使用范围内,菜心、白菜、蕃石榴、芥蓝和布林均是在灭多威的使用范围之外,这是违反了我国《农药合理使用准则》和《农药安全使用标准》的。3.3预防农药残留问题根据我国农药毒性分级标准,灭多威属高毒杀虫剂,原药大鼠急性经口LD50为17～24μg/kg,而本实验测得含有灭多威的样品中实际最高残留量高达9.85mg/kg左右,检出率达33%～43%,可见灭多威在市售农产品中的残留问题仍比较严重,这是不容忽视的。有调查显示,种植的农民一般都是在收获期前10～15d内使用农药,甚至有在收获前4d使用农药的,结果使农产品上农药残留量浓度高,影响食用者的健康,特别是高毒农药,更有引起中毒的可能。福建省就曾报道过一起因空心菜残留灭多威所引起的食物中毒事件,其当时测得空心菜样的灭多威残留含量为9.8mg/kg。因此,应警惕违规