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抗阪崎肠杆菌LPS单克隆抗体的制备及双抗夹心ELISA方法的建立抗阪崎肠杆菌LPS单克隆抗体的制备及双抗夹心ELISA方法的建立

一、引言

阪崎肠杆菌（EscherichiacoliO157:H7）是一种对人类健康构成严重威胁的食源性病原菌，能够引起严重的肠胃道感染和血液感染等疾病。因其产生的内毒素（LPS）在病原性中发挥重要作用，因此开发有效的抗阪崎肠杆菌LPS单克隆抗体及快速、灵敏的检测方法对于防控阪崎肠杆菌感染具有重要意义。

二、抗阪崎肠杆菌LPS单克隆抗体的制备

1.LPS提取与纯化

从阪崎肠杆菌培养物中提取LPS，并经过氯仿/甲醇的萃取与纯化，得到高纯度的LPS样品。

2.抗原制备与免疫

将纯化的LPS样品与佐剂混合，制备成为抗原。选择免疫动物如小鼠，按照一定免疫程序进行免疫，以产生针对LPS的特异性抗体。

3.脾细胞融合与筛选

收集小鼠脾脏，制备脾细胞悬液。与骨髓瘤细胞进行融合，得到杂交瘤细胞。通过HEPES缓冲液中的间接ELISA法，筛选出能够特异性识别LPS的杂交瘤细胞。

4.单克隆抗体的扩增与纯化

将筛选出的杂交瘤细胞进行无限次的体外培养，并在适当机会选择有效的细胞进行动物内扩充培养。收集上清液，通过分子筛、离子交换层析和凝胶过滤等纯化技术，纯化单克隆抗体。

三、双抗夹心ELISA方法的建立

1.建立抗原与抗体的最适浓度

通过稀释不同浓度的LPS抗原与单克隆抗体，反复进行抗原与抗体的最佳配对浓度的确定。

2.ELISA板的涂布

将抗原溶液平行均匀地涂布在微孔板表面，并充分干燥。

3.阻断剂的添加

加入合适的阻断剂阻止非特异性结合。

4.加入样品及控制组

将待测样品系列稀释并加入到微孔板中，设置阴性对照组和阳性对照组，以及空白对照组。

5.加入单克隆抗体

加入与抗原最佳配对浓度的单克隆抗体。

6.加入酶标二抗

加入与单克隆抗体结合的酶标二抗。

7.加入底物及停止剂

加入合适的底物反应液，使其与酶标二抗发生反应。在适当时间后，加入停止剂终止反应。

8.测量与分析

使用酶标仪对微孔板中的吸收值进行测定，并分析结果以获取样品中LPS的含量。

四、结论

通过采用上述步骤，成功地制备了抗阪崎肠杆菌LPS的单克隆抗体，并建立了双抗夹心ELISA检测方法。该方法具有操作简便、快速灵敏、结果准确等优点，可以为阪崎肠杆菌感染的快速检测提供有效的技术支持本研究成功地制备了抗阪崎肠杆菌LPS的单克隆抗体，并通过建立双抗夹心ELISA检测方法实现了对LPS含量的快速检测。该方法具有操作简便、快速灵敏、结果准确等优点，为阪崎肠杆菌感染的快速检测提供了有效的技术支持。通过稀释不同浓度的LPS抗原与单克隆抗体，确定了抗原与抗体的最佳配对浓度，并将抗原溶液均匀地涂布在微孔板表面。通过加入适当的阻断剂，阻止非特异性结合；加入待测样品系列、阴性对照组和阳性对照组，以及空白对照组；加入与抗原最佳配对浓度的单克隆抗体和酶标二抗；加入适当的底物反应液，并在适当时间后加入停止剂终止反应。最后使用酶标仪对微孔板中的吸收值进行测定，并成

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