10呋喃唑酮快速检测试剂盒说明书

2023-01版呋喃唑酮代谢物〔2023-01版一、原理本试剂盒承受间接竞争ELISA方法检测水产和鸡肉等组织样本中的AOZ，在微孔条上预包被上偶联抗原，利用抗原与抗体的特异性免疫化学反响的原理来进展的，样本中的AOZ和微孔条上预包被偶联抗原竞争抗呋喃唑酮代谢物的衍生物抗体，TMBAOZ含量与样品的吸光度值呈反比，与标准曲线比较即可得出呋喃唑酮代谢物含量。二、试剂盒技术指标：试剂盒灵敏度：0.05ppb样本检测下限：组织〔鸡/鸭/猪/牛/羊/鱼/虾肉〕—---——0.1ppb肝脏〔鸡/鸭/猪/牛/羊肝脏〕 ———0.1ppb蜂蜜、牛奶、肠衣 -—0.1ppb

7、终止液 7ml 黄色帽8、20X浓缩洗涤液40ml 白色帽9、2X浓缩复溶液50ml 透亮帽10、衍生化试剂 10ml 白色帽四、所用仪器、试剂具备的仪器：微孔酶标仪、打印机、均质器、氮气吹干装置、振荡器、离心机、〔0.01g〕微量移液器：单道20µl-200µl，100µl-1000µl、多250µl试 剂：氢氧化钠、乙酸乙酯、正己烷、浓HCl、磷酸氢二钾〔全部样本使用〕亚硝基铁氰化钾KF〔C〕NO·3HO、2 5 2ZnSO·7HO〔奶样专用〕4 2鱼/虾等水产品组织因存在肯定的干扰，0.2ppb穿插反响率：呋喃唑酮代谢物————————————100%呋喃它酮代谢物———————————﹤0.1%呋喃妥因代谢物———————————﹤0.1%呋喃西林代谢物———————————﹤0.1%回收率：组织、肝脏… 90%±10%蜂蜜、牛奶、肠衣… 75%±15%三、试剂盒组成1812条2、标准液X6〔1ml/瓶〕0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35ppb、4.05ppb3、酶标记物 12ml 红色帽4、抗体工作液7ml 蓝色帽5、底物A液 7ml 白色帽6、底物B液 7ml 黑色帽

五、样本前处理步骤样本处理前须知处理任何样本时，都必需留意：本试剂盒所检测的组织样本包括：动物组织、禽类和水产组织。eg:鸡、鸭、牛、兔、鱼、虾等。试验中必需使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。要时可对试验器具进展清洁，以避开污染干扰试验结果。样本前处理需配制：配液1: 用去离子水将2×浓缩复溶液按1：1稀释，用于提取后的样本复溶配液: C液〔供奶样用称12.5g亚硝基铁氰钾用去离子水定溶至100ml。D〔供奶样用〕称29.8g100ml。配液3: 0.1MKHPO 称22.8gKHPO·3HO

2-8℃。2 4 2 4 21L4:1MHCl取8.6ml浓HCl加水定溶至100ml。配液51MNaOH称取4gNaOH加水定溶至100m样本的处理方法：奶样1、取出5ml的奶样本到玻璃离心管中,分别参加CD250µl。2、用振荡器充分混合样本,用恒温离心机4000r/min以上离心10min(4-12℃).假设没有恒温离心机,则先将样本降温至大约8℃,然后离心。3、接(b)的描述方法组织、蜂蜜、肠衣、肝脏1、取1±0.05g1.1ml〔相当1ml奶样，分别参加4ml0.5ml1MHCl100µl237〔16h〕56℃水浴中孵育(2h)；35ml0.1MKHPO0.4ml1M2 4，NaOH5ml5min；4、在室温下〔20-25℃〕4000r/min10min。52.5ml50℃氮气/空气吹干。61ml1ml好的复溶液充分混合30s；在室温下〔20-25℃〕4000r/min10min。750µl样本稀释倍数：2六、酶标免疫分析程序1、从4℃冷藏环境中取出所需试剂，置室温〔20-25℃〕平衡30min以上，留意每种液体试剂使用前均须摇匀。2、取出需要数量的微孔及框架，将不用的微孔放

3、配液：将40ml浓缩洗涤液〔20倍浓缩〕用去离子水依据1：19稀释〔1份浓缩洗涤液+19份去离子水，或按所需用量配制洗涤液。4、编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。5、加标准品/样本50µl/孔到各自的微孔中，然后加抗体50µl/6250µl/4-515-30秒，用吸水纸拍干〔拍干后未被去除的气泡可用干净的枪头刺破。7、每孔参加酶标记物10µ环境中反响30min。将孔内液体甩干，用洗涤4-5遍〔同上〔拍干后未被去除的气泡可用干净的枪头刺破。8A液50µl，再加底物B50µl，轻轻振荡混匀，25℃环境中避光显色30min。950µl，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处〔建议用双波长450/630nm检测，在5min内读完数据，测定每孔OD值。七、结果判定结果判定有两种方法，粗略判定可用第1种方2AOZ的含量成负相关。1、粗略判定：用样品的平均吸光度值与标准值比较即可得出样本所含AOZ浓度范围〔ng/ml〕。假设样品10.268，样品21.230，标准液吸光度值分别是：0ppb为1.671；0.05ppb1.425；0.15ppb1.103；0.45ppb0.567；1.35ppb0.205；4.05ppb0.104。则样品10.45ppb-1.35ppb20.05ppb-0.15ppb。乘以其对应的稀释倍数即AOZ2、定量判定：所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值〔B〕除以第一个标准〔0〕的吸光度值〔B〕100%，即百分吸光度值。0 B

11、显色液假设有任何颜色说明变质，应当弃之。00.5质。12、25℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。百分吸光度值〔%〕＝

×100%B0

九、贮存条件和保质期B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值B—0ng/ml0

贮存条件：试剂盒于2-8℃保存，不要冷冻。保质期：该产品有效期为1AOZ浓度〔ng/ml〕的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释AOZ假设利用试剂盒专业分析软件进展计算，更便于大量样品的准确、快速分析。八、留意事项120-25℃。22-8℃冰箱。3、在ELISA洗板的全都性，认真依据推举的洗板挨次操作ELISA4、全部恒温孵育过程中，避开光线照耀，用盖板膜封住微孔板。520℃或试剂及标本没有回到室温〔20-25℃〕会导致全部标准的OD6、在洗板过程中假设消灭板孔枯燥的状况，则会伴随着消灭标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应马上进展下一步操作。7、混合要均匀，