木豆叶提取物安全性评价

木豆叶提取物安全性评价

木豆是蔷薇科植物的一种，也被称为柳豆、豆荣和扭曲豆。这是世界上第六种食用鱼类，也是唯一的木材食品。主要分布于东南亚、印度、缅甸以及我国的云南、四川、江苏、广东、广西、海南等地,在海南岛各地有野生和栽培种,具有广泛的药用价值。木豆叶是木豆的干燥叶及嫩枝,中医认为木豆叶性甘、平,归肝、脾及肾经,能活血化瘀、消肿止痛、补肾健骨、祛腐生肌,可用于瘀血肿痛,股骨头缺血性坏死治疗;外治水痘、痈肿及各种创面感染。木豆叶提取物的成分较多,田润等曾经从木豆叶中提取得到12种化合物,其主要活性成分是芪类提取物,其中含量较高、活性较强的是木豆素。近年来的研究发现,木豆叶提取物具有多种药理活性,如抗骨质疏松、治疗高血脂、抗脑缺血缺氧损伤等。因此木豆叶提取物在人类医学及兽类医学的临床应用也越来越广泛。为了评价木豆叶提取物的安全性,为今后系统地研究其药理作用、临床安全用药提供试验依据,特进行了木豆叶提取物对小白鼠的急性毒性试验。1材料和方法1.1试验材料1.1.1小鼠临床健康试验昆明系清洁级小白鼠90只,购自兰州大学试验动物中心,体重18～22g,雌性小鼠未产未孕,自由饮水采食,连续观察1周,临床健康即可用于试验,试验期间按常规饲养。1.1.2药品、试药木豆叶提取物,为淡黄色粉末状物质,含量10%,批号为110801,由浙江海正药业股份有限公司提供。试验前称取适量药物,用纯化水配制成浓度为1g/mL的混悬液。1.2测试方法1.2.1预试验在预试验中将24只小白鼠随机分成4组,每组6只,雌雄各半。各组以等浓度木豆叶提取物灌胃给药,确定LD0、LD100。1.2.2给药剂量及给药次数在正式试验中将60只小白鼠随机分成6组(5个试验组+1个对照组),每组各10只,雌、雄各半。试验前禁食12h,自由饮水。按照小白鼠的体重计算给药量,低剂量组1次给药,高剂量组由于给药体积较大,在24h内分2～3次给药。给药后的前3h每隔20min观察1次小白鼠的采食、饮水、被毛、活动、精神、症状起始时间和持续时间、死亡情况;之后每隔2h观察1次;2d后,每天观察3次。对死亡小鼠及时解剖记录病变情况,在第8天将所有存活的小白鼠处死并解剖,观察腹腔内的液体状况和实质性器官的病理变化。2试验结果2.1计算ld50及其65%可信限预试验结果(表1)表明:木豆叶提取物的致死剂量范围占体重的28～109g/kg,根据公式r=n−1a/b−−−√(rr=n-1a/b(r为相邻2组剂量的比值;a为最大剂量,109.00g/kg;b为最小剂量,28.00g/kg;n为预分组数),计算得r=1.4046。根据预试验的结果,由r=1.4046确定分别以体重的28.00、39.33、55.24、77.59、109.00g/kg给药,按照改良寇氏法计算LD50及其95%可信限。LD50=Lg-1[Xm-i(∑p-0.5)]式中:Xm为最大剂量组剂量的对数值;i为剂量间比值的对数值;∑p为各组死亡率之和。可以算出LD50的95%可信限=lg-1[lgLD50±1.96Sx50]。2.2ld50的可信限正式试验结果如表2所示。根据试验所得数据,计算得LD50=62.647g/kg,LD50的95%可信限是53.488～73.528g/kg。判定木豆叶提取物对小鼠的经口LD50大于体重的15g/kg,根据外源化学物急性毒性分级标准,木豆叶提取物属于无毒物质。2.3小鼠灌胃后的临床表现灌胃后,低剂量组小鼠呼吸急促,闭眼,活动量减少,偶有轻微腹泻,3h后恢复采食,精神正常。高剂量组小鼠灌胃后喜卧,懒动,精神不济,喜转木屑,有明显的腹泻,并有恶臭味;第2次灌胃后被毛凌乱,给药40min后开始死亡,解剖可见皮下、胸腔、肠系膜出血,肺脏呈粉白色,肠道臌气,肠壁变薄,十二指肠内出血,肝脏有出血点,尾静脉发黑。胃部膨大,有气体,内部有黑色物质。脾、肾脏未见明显可眼观的病变。3木豆叶提取物木豆是一种药理作用很广泛的中药材,其种子、根、茎、叶均可入药。木豆叶在抗骨质疏松、抗心脑血管疾病、抗肿瘤、抗炎、抗病毒等方面均有一定的作用。但是其成分复杂。郑元元等的研究表明,木豆叶中抗骨质疏松的活性成分主要是芪类提取物,而其中又以木豆素最为重要。陈迪华等发明了一种抗骨质疏松的药物组合,从主要活性成分重量比可看出,木豆叶芪类提取物尤其是木豆素对抗骨质疏松药的药效是不可或缺的成分。但是在此次急性毒性试验中发现,给予高剂量的木豆叶提取物,小白鼠有明显腹泻现象,而低