临床医学专业 山楂的降血脂有效部位提取及其滴丸制备工艺研究

PAGE\*romanPAGE\*romanii山楂的降血脂有效部位提取及其滴丸制备工艺研究中文摘要工作包括：条件的优选，对确定的工艺进行了验证。以上研究有效利用了山楂资源，提高了山楂类制剂的技术水平。关键词：山楂；制备工艺ABSTRACTInthispaper,thetridecidacidcomponentsandflavonoidsinhawthornleaveswereextractedbymeansofmacroporousresintreatmentandacid-basetreatment.Atthesametime,theeffectivepartsofhawthorntotalflavonoidsandhawthorntotaltriterpeneacidswereusedasrawmaterialstoprepareChinesemedicinedroppills.Themainresearchworkincludes:Solubilityandbasicpropertiesofpowderwerestudiedintheextractionoftotalflavonoidsfromhawthornandtotaltriterpenateacidfromhawthorn.Preliminarystabilitystudieswerecarriedout,andtheinteractionbetweenthetwoeffectivepartsandtheauxiliarymaterialsforthepreparationofdroppillswasstudied.Thepossibledispersionofthedruginthedroppillmatrixwasinvestigated.Finally,thetypeofpolyethyleneglycolfordroppingpillswasselected,andthecompositionofthewholeprescriptionwasstudied.Optimizationofthepreparationconditionsofdrippreparationwascarriedout,andthedeterminationprocesswasverified.Theaboveresearchhasmadeeffectiveuseofhawthornresourcesandimprovedthetechnicallevelofhawthornpreparations.KeyresinPAGE\*romanPAGE\*romanv目 录前 言 1第一章综 述 2山楂的研究概述 2山楂来源 2山楂的化学成分 3山楂的药理作用 4山楂总黄酮类研究 7滴丸研究的概述 8高脂血症的药物研究概述和研究展望 10高脂血症概述 10目前临床上常用的药物简述如下： 10中药的研究展望： 12本文主要研究工作和创新点 12第二章指标性成分测定方法的研究 14山楂叶黄酮的薄层色谱法鉴别 14试验仪器和药品 14溶液的制备 14薄层层析 14比色法测定山楂叶总黄酮的含量 15实验仪器和药品 16实验方法 16实验条件的优选 162.2.4结论 21反相高效液相色谱法测定山楂叶黄酮中的有效成分含量 21仪器与试药 21色谱条件 21对照品溶液的制备 23线性关系的考察 23供试品溶液的制备 24方法学考察 242.3.7讨论 26比色法测定山楂果中总三萜酸提取物的含量 27实验仪器和药品 27对照品溶液的配制 27供试品溶液的配制 27测定波长选择 27显色剂用量及条件优选 27样品的测定方法 29线性关系的考察 29精密度试验： 29重复性试验： 30稳定性考察 30回收率试验 312.4.12结论 32薄层色谱扫描法测定山楂三萜酸提取部位中熊果酸的含量 32试验仪器与药品 32对照品溶液的制备 32展开剂的选择 32提取条件的优选 32扫描条件的选择 33供试品的测定方法 33方法学的考察 342.5.8讨论 37本章结论 37第三章有效部位的提取精制工艺研究 39山楂叶中总黄酮的提取精制工艺研究 39试验仪器和药品 39山楂叶药材中总黄酮含量的测定。 39山楂叶总黄酮提取精制工艺的初步选择 39山楂总黄酮乙醇提取工艺影响因素的考察 39山楂总黄酮提取工艺优化 41树脂吸附性能的考察 44工艺的验证 503.1.8讨论 50山楂果中总三萜酸部位提取工艺的研究 50提取工艺优选 51提取工艺的验证 543.2.3讨论 54本章结论 55第四章制剂处方前的研究 56材料和仪器 56方法与结果 56山楂黄酮提取物和山楂三萜酸提取物表观溶解度测定 56粉体学基本性质的测定 57指标性成分化学稳定性考察 61药物在基质中的分散程度考察 644.3讨论 65第五章滴丸制备工艺的研究 66试验仪器和药品 66聚乙二醇基质的初步优选 66滴丸的处方设计 67因素水平设计 67数据处理方式 67正交试验结果 68滴制条件的优化 695.5结果 715.6验证 715.7讨论 71第六章结论与展望 726.1结论 726.2展望 73参考文献 74PAGEPAGE1前 言心血管疾病是目前威胁我国人民健康的重大疾病之一降血脂药物需要长期服用，患者对药物的副作用敏感，均有当使用两种有效部位组方时，需要考察为何选择这两种有效部位组方和两3:3：5组方[2]，制成单方制剂。山楂中黄酮类成分和三萜酸类成分均为脂溶性成分，在水中溶解度低。目－中药滴丸。第一章第一章综述第一章综 述山楂的研究概述1000制、药理及临床研究都有较大发展。山楂来源山楂在我国供药用者8种[3]。其名称和分布，见表1-1。表1-1序号 品 种山楂(Crataeguspinnatifids)，山海关以南称山楂，主产东北、河北、内蒙、河南、山东、山西、陕西等省。朝鲜和苏联西伯利亚亦有分布。山里红(C.pinnatifidavarMajor)，产地同山楂。野山楂(C.cuneatasiebetzuse)，产于河南、湖南、湖北、江西等省。云南山楂(C.seabrifolia)，产于云、贵、川等省。湖北山楂(C.hupehensis)，产于湖北、湖南、江苏、浙江、江西、四川、陕西等省。甘肃山楂(C.kansuensis)，产于甘肃、山西、河北、陕西、贵州、四川各地。华中山楂(C.wilsonii)，产地同甘肃山楂.桔红山楂(C.aurantia古也有分布。山楂的化学成分2050关于山楂化学成分有儿茶酚精、胡萝卜素鞣酸，及三萜类成分山楂酸、熊果酸、齐墩果酸21山楂中黄酮类成分主要有金丝桃苷、芦丁等。三萜酸类成分主要有熊果酸、齐墩果酸山楂酸。研究表明山楂果实中总黄酮与果实大小、果肉薄厚呈正相关，山里红及云山楂的药理作用山楂的心血管作用(1)降血脂作用：学者对山楂黄酮调节脂质代谢作用进行了大量研究[3]，LDLRLDLRLDLR山楂叶制剂益心酮有降血清胆固醇作用，酮，使动物廓清速度加快，廓清时间缩短。(2)降压作用：较小剂量注射对麻醉兔、小鼠有降压作用。山楂乙醇浸出物静脉给药，能3h(3)舒张血管作用：山楂总黄酮可增加冠脉流量抗实验性心肌缺氧，抗心率失常等作用，这对冠心病等心血管疾病的防治显然是有益的[30]。(4)抗心率失常作用：山楂浸膏对垂体后叶素引起的心率不齐，有一定的抑制作用。(5)抗氧化作用：山楂叶乙醇提取物对羟自由基和超氧阴离子的生成有清除和抑制作用。三萜酸类的药理作用多数的研究表明山楂黄酮类成分具有降压、增加冠脉血流量、降血脂、强心和抗心律失常的药理作用。助消化作用山楂中脂肪酸可促进脂肪分解，山楂酸等可提高蛋白分解酶的活性，有助消化[18]。抗癌作用山楂提取物对人胚肺细胞及诱癌细胞的抑制作用。这些显示山楂有抗癌作用[2]。提高机体免疫力100%进作用[19～20][34]。抗菌作用山楂煎剂和乙醇提取液对福氏痢疾杆菌、宋内氏痢疾杆菌、变形杆菌、大肠杆菌有抗菌作用[35]。止痛作用山楂能使血管舒张，有助于解除局部瘀血状态，并有收缩子宫、促进子宫复原的作用[3]。山楂总黄酮类研究总黄酮的提取分离其中常用的提取方法概述如下[13]：（1）水煮浸提法：流程为：山楂叶→水浸煮（2次）→滤液浓缩→沉淀→过滤→干燥。（2）溶剂萃取法：流程为：山楂叶→用70%乙醇提取→减压回收乙醇→水分散→用正丁醇萃取→回收正丁醇→总黄酮。（3）聚酰胺分离法：流程为：山楂叶→用70%乙醇提取→回收乙醇→加入聚酰胺粉→用乙醇梯度洗脱→收集各级洗脱液→合并浓缩。（4）树脂吸附法：流程为：山楂叶→浸渍→回收乙醇→过滤→树脂分离→回收乙醇→干燥单成分的分离山楂叶乙醇提取物经聚酰胺柱层析分离即可得到牡荆素[13]。其中丙酮提取物经硅胶柱层析，氯仿—甲醇—水梯度洗脱，薄层层析检控，相同部分合并，分别得到槲皮素、金丝桃苷、牡荆素、牡荆素鼠李糖苷、盐酸二乙胺等化合物。成分的测定研究人员利用高效液相色谱和薄层色谱测定山楂叶黄酮[39]。量的如斯多苷。滴丸研究的概述Nernst－Noyes—Whitney因：dCDS(C

C)

公式（1-1）dt V s tdC/dt面积，Cs，Ctt对难溶性药物Ct较小，Cs>>Ct，且对某一药物来说，D/Vδ＝k所dC/dt＝kSCs 公式（1-2）Csk这些亚稳态分子扩散能量高，溶出快。由于滴丸剂具有溶出快、生物利用度高、疗效好、药物稳定性好及制备简便、质量易控等优点，因此受到医药界广泛的重视。高脂血症的药物研究概述和研究展望高脂血症概述心血管疾病是目前威胁我国人民健康的重大疾病之一，而由脂质代谢紊乱所致的高脂血症是动脉粥样硬化及冠心病调脂治疗是心血管病药物防治的重要内容之一。临床上常用的药物，有如下几种：他汀类HGM-CoAHGM-CoA活性而导致机体内源性胆固醇合成减少贝丁酸类临床常用的有非诺贝特、苯扎贝特、吉非罗齐等。其他常用药物(1)多烯脂肪酸类[45]常用的有月见草油胶丸、鱼油烯康丸等，为不饱和脂肪酸制剂。(2)烟酸类[45](3)在降脂治疗中可配合使用抗氧化维生素等[45]。常用降血脂中药降胆固醇的中药有生姜、人参、大黄、短毛五加、葛根、麻仁、徐长卿等；降甘油三酯的中药有赤阳子、银杏叶中药的研究展望：随着近年来深入的研究,认为中药制剂具有疗效肯定,毒副作用少,药物食研究表明有降脂作用的中草药有几十种，其中山楂是其中研究较多，效果（LDL本文主要研究工作和创新点料、工艺过程和制剂的质量。主要创新点如下：确保了山楂黄酮提取部位的质量。3.减少了有机溶剂对药品的污染，提高了有效部位的含量。本文进行的其它研究工作如下：建立了山楂中黄酮类成分的薄层色谱鉴别方法选择乙醇提取的工艺条件。及对药物在基质中的分散状态的初步研究。优选滴丸的处方组成和制剂过程中的工艺条件。第二章第二章指标性成分测定方法的研究第二章指标性成分测定方法的研究山楂叶黄酮的薄层色谱法鉴别中芦丁、金丝桃苷的TLC鉴别方法。试验仪器和药品硅胶G薄层板，烟台化工研究所；甲醇、甲酸，丁酮，乙酸乙酯均为分析纯溶液的制备对照品溶液的制备：精密称取芦丁对照品，制取芦丁对照品溶液。精密称取金丝桃苷对照品，制取金丝桃苷对照品溶液。供试品溶液的制备：取山楂总黄酮提取物，制取作为供试液。阴性对照溶液制备：按山楂滴丸制备方法，除山楂总黄酮外，制取阴性对照溶液。薄层层析G365nm2－1图2－1山楂叶黄酮薄层色谱图比色法测定山楂叶总黄酮的含量实验仪器和药品岛津2401紫外分光光度计；容量瓶；秒表芦丁标准品：购自中国药品生物制品检定所，批号：0080-9705；乙醇、氢氧化钠、亚硝酸钠、硝酸铝等均为分析纯；聚酰胺，100目实验方法聚酰胺的处理取适量聚酰胺，装柱，使用适量乙醇冲洗后，改用60％乙醇处理，即以60％乙醇充分洗涤后，烘干，备用。对照品溶液的配制105℃60％60％50mL，25mL60％（1mL0.4mg。供试品溶液的制备精密称取山楂总黄酮提取物0.02g，加入10mL60％乙醇分散溶解，加入0.3g0.3g100mL60％50mL瓶中，定容，作为供试品溶液。实验条件的优选测定波长选择吸取芦丁标准品溶液，按下述的标准曲线制备方法显色，用紫外-可见分300～600nm510nm2－2。0.350.3吸收度A吸收度A0.20.150.10.050400 450 500 550 600波长（nm）2－2显色剂用量的选择0.412mg/mL5mL，5％NaNO210％Al（NO3）30.4、0.4mL；0.8、0.8mL；1.2、1.2mL；1.6、1.6mL；2.0、2.0mL显色测定。其它按下述的标准曲线制备方法显色。结果见表2-1表2-1加入量（mL）0.40.81.21.62.0吸收度0.3410.6220.76507640.768显色后时间的选择1mol/LNaOH2min、5min、10min15min、20min、25min、40min、60min、90min2-2表2-2时间（min）2510152025406090芦丁0.3400.3190.3080.3030.3030.3020.3020.3010.301样品0.3760.3530.3410.3380.3370.3370.3370.3360.335供试品的测定工艺10mL60％乙0.3g0.3g100mL60％乙醇溶解50mL25mL60％5mL，5％NaNO21.2mL，6min，10％Al（NO3）31.2mL，6min，1mol/LNaOH16mL，1.6mL，15min，510nm线性关系的考察精密吸取芦丁对照品液(0.412mg/mL)0mL1mL2mL3mL4mL25mL60％5％NaNO26min，10％Al（NO3）31.2mL，6min，1mol/LNaOH16mL，1.6mL，15min，510nm3853x-0.0022(r=0.9999)0～2.06mg2－3。1吸收度0.8吸收度0.60.40.200 0.5 1 1.5 2 2.5标准品量（mg）图2－3精密度试验6，RSD％0.505％2－3。表2－3序号吸收度平均值RSD（％）10.35320.352340.3530.3540.3540.50550.35760.355重复性试验6RSD％0.86％2－4。序号含量（％）平均值（％）RSD（％）序号含量（％）平均值（％）RSD（％）173.5272.13473.172.673.00.86573.8672.7加样回收率试验915mg、20mg、25mg32－5。序号样品含黄酮量标准品加入量测得量回收率序号样品含黄酮量标准品加入量测得量回收率平均回收率RSD（mg）（mg）（mg）（％）（％）（％）114.7115.6030.1098.63214.9315.6030.4999.74315.0415.6030.3197.88420.1915.6035.7299.57520.5915.6036.23100.2598.771.03621.6215.6036.7897.16725.1715.6040.5298.39824.8615.6040.1497.94924.3915.6039.8999.35结论反相高效液相色谱法测定山楂叶黄酮中的有效成分含量-2仪器与试药实验仪器和药品日本岛津LC－10AVP高效液相色谱仪；Metler十万分之一电子分析天平；超声清洗仪。其他试剂为分析纯色谱条件色谱柱为 intersil ODS－3 C18柱（5μm， 250×4.6mm）（（；1.0mL/min255nm；柱温：25℃。abc时间t/min对照品溶液的制备25mL0.45μm线性关系的考察25mL1、2、3、4、5mL10mL，混匀。再经微见图2－5。峰面积积分值峰面积积分值00 0.2 0.4 0.6 0.8金丝桃苷标准品量（μg）图2－5精密称取牡荆素-2”-O-6.85mg25mL容量瓶中，加12345mL10mL，2－6。峰面积积分值2000000峰面积积分值150000000 0.5 1 1.5标准品量（μg）图2－6供试品溶液的制备7030mL10min70％丙酮溶液反复洗3～450mL，摇匀。方法学考察精密度试验取同一份山楂黄酮提取物的供试液连续重复进样，测定金丝桃苷的峰面－6表2－6序号123456金丝桃苷峰面积206866320614862076218208759020861472091575牡荆素峰面积351672235045293529571354889835464453555673重复性试验精密称取9份同一批山楂黄酮提取物，其中15mg、20mg、25mg各3份，按3.5所述方法制备供试品溶液，采用HPLC分别检测。数据见表2－7。序号取样量金丝桃苷峰面积牡荆素峰面积金丝桃苷含量序号取样量金丝桃苷峰面积牡荆素峰面积金丝桃苷含量牡荆素含量10.01592260765443300.55.15%11.39%20.01588261076443829.25.17%11.43%30.015772543804324465.08%11.23%40.01952325092552656.45.16%11.42%50.01997332945566006.55.16%11.42%60.01997336427571925.95.21%11.53%70.02399402808684773.65.15%11.39%80.02398408101693771.75.21%11.54%90.02398402415684105.55.14%11.39%稳定性试验HPLC-2”-O-鼠李糖苷峰面2－8。时间（h）金丝桃苷峰面积牡荆素峰面积0322375时间（h）金丝桃苷峰面积牡荆素峰面积0322375548037.11318424541325.82327101556061.74321900545221.28326140554438.814324190552137.524322612548340.3回收率试验0.01g2－9。序 取样量金丝桃苷含量牡荆素含量金丝桃苷加入量序 取样量金丝桃苷含量牡荆素含量金丝桃苷加入量牡荆素加入量金丝桃苷测得量牡荆素测得量金丝桃苷牡荆素回号 /g回收率/%收率/%/mg/mg/mg/mg/mg/mg1 0.010420.53771.19000.44240.97440.45040.9929101.8101.92 0.010410.53711.18870.44240.97440.44460.9793100.5100.53 0.010320.53231.17810.55301.2180.56791.2485102.7102.54 0.010390.53601.18630.55301.2180.56021.2326101.3101.25 0.010490.54121.19780.66361.46160.67491.4704101.7100.66 0.010540.54371.20330.66361.46160.67951.4981102.4102.5讨论对于山楂叶总黄酮提取物中金丝桃苷和牡荆素-2”-O-鼠李糖苷的含量比色法测定山楂果中总三萜酸提取物的含量实验仪器和药品岛津2401紫外分光光度计；容量瓶；水浴锅；温度计；对照品溶液的配制1.5mg10mL容量瓶中加无水乙醇溶解，并定10mL，作为对照品溶液。供试品溶液的配制50mL容量瓶中加无水乙醇溶解，50mL，滤过，续滤液作为供试品溶液。测定波长选择经紫外扫描在548nm有最大吸收，空白无干扰。显色剂用量及条件优选香草醛—冰醋酸液用量的优选取熊果酸对照品(0.15mg/mL)2.0mL5份，805%香草0.25mL0.50mL0.75mL1.00mL2.0mL，60155.0mL摇匀，补加冰醋酸至25mL定容，在548nm处测定吸收值，结果见表2-10。表2-105％香草醛－冰醋酸用量（mL）0.250.500.751.001.25吸收值0.4370.4660.4690.4840.478结果表明5%香草醛-冰醋酸用量为1.00mL最佳。高氯酸的用量的优选取熊果酸对照品(0.15mg/mL)2.0mL5805%香1.00mL1.0mL1.5mL2.0mL2.5mL3.0mL60155.0mL25mL定容，在548nm处测定吸收值，结果见表2－11。表2－11 高氯酸用量（mL）1.01.52.02.53.0吸收值0.3300.3910.4640.4880.485结果表明，高氯酸用量为2.5mL时最佳。显色后水浴的温度的考察2－12。表2－12 显色水浴温度（℃）5060708090100吸收值0.4580.4750.4950.5420.5630.6526060℃。样品的测定方法最终的实验工艺为：精密吸取供试样品液5%2.5mL，60155.0mL25mL定548nm处测定吸收值。按标准曲线法计算。线性关系的考察精密吸取熊果酸对照品无水乙醇液(0.15mg/mL)0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL2.5mL5%1.0mL，2.5mL，60155.0mL25mL548nm2-6。吸收度吸收度

0.145

0.282

0.425

0.562

0.697

0.8380 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5熊果酸的取样量（mg）图2-7精密度试验：52－13。表2－13序号吸收度平均值RSD％10.40720.41030.4050.4101.2240.41250.418重复性试验：6RSD1.932－14。表2－14序号 总三萜酸含量

（％）

RSD％160.32160.3262.2359.8461.9561.2663.0稳定性考察0.15mg/mL2.0mL按标准曲线的方法操作。结果见表2-15。表2-15时间(min)吸收度平均值标准偏差RSD(%)00.59810.52620.4730.4930.06914.130.43940.43150.429100.425200.4210.4230.00410.98400.423600.418800.4061000.4031200.3910.3830.0256.51500.3621800.351回收率试验9769%2-16。序号样品中相当于熊加入熊果酸的测定熊果酸的量回收率序号样品中相当于熊加入熊果酸的测定熊果酸的量回收率平均回收RSD果酸含量（μg）量（μg）（μg）（％）率（％）（％）131373125619997.98230023125603997.183428673204312531255973631299.3999.4698.570.91530023125609098.82630853125618399.14结论测定方法。薄层色谱扫描法测定山楂三萜酸提取部位中熊果酸的含量描法测定熊果酸含量。试验仪器与药品日本岛津CS－9301型双波长薄层扫描仪G甲酸等均为分析纯。对照品溶液的制备精密称取熊果酸对照品适量2.5mg，制作为对照品溶液。展开剂的选择正丁醇—氯仿—醋酸乙酯等展开优选，环已烷—氯仿—醋酸乙酯—甲酸效果最佳，显色清晰，附近没有干扰。提取条件的优选342－17表2－17Tab.2-17thecontentsofursolicacidoffiveextractiontimes提取时间（h）12345熊果酸含量（％）35777扫描条件的选择经对显色后分别在熊果酸对照品及供试品色谱斑点处和空白处扫描紫外吸收光谱，熊果酸显色后色谱斑点最大吸收峰在530～540nm之间。比较后确定使用双波长扫描，扫描方法为反射式锯齿扫描，波长为λs＝535nm，λr＝700nm，狭缝1.2×1.2mm，SX=3，灵敏度中等。见图2－7。图2－8熊果酸的薄层扫描图Fig2-8TheTLCchromatogramofursolicacid供试品的测定方法4小时，提取液回收乙醚至干，残渣用石油醚（30～60℃）浸泡15l（2分钟，倾去石油醚。残渣加适量无水乙醇―氯仿（3：2）25ml匀，作为供试品溶液。（200010ul，2ulG10％硫1055～7（附录ⅥB薄层扫描法方法学的考察线性关系的考察2.04.06.08.010.0μL对照品溶液(0.54mg/ml)，点于同一Gy=-477.31+1546.6x，r=0.9997(y为吸收度积分值；x为对照品量)，线性范围为：1.08～5.40μg2－8。色谱峰面积色谱峰面积00 2 4 6熊果酸的量（μg）图2－9熊果酸的线性关系稳定性试验4μLG0.511.5234662－18。表2－18稳定性试验结果Tab.2-18stability时间（h）吸收度积分值平均值RSD（％）0.52875.2412935.381.52918.0422865.322909.371.6632861.7942912.0762997.73精密度试验G52－19。52－19。序号（吸收度积分值）同板精密度不同板精密度179069.8379069.83278274.8880374.583序号（吸收度积分值）同板精密度不同板精密度179069.8379069.83278274.8880374.58375222.5774954.92477639.2575028.33574592.9074997.80平均值76959.8976885.09RSD％2.5383.422重现性试验52－20。序号熊果酸含量（％）平均含量（％）RSD％17.24序号熊果酸含量（％）平均含量（％）RSD％17.2427.35347.117.037.231.9257.3967.28加样回收率试验(，9份，精密加入熊果酸对照品溶液(0.494mg/mL)适量，按样品含量测定方法制备供试品溶液并测定熊果酸的含量，计算回收率，测得熊果酸的平均100.32%，RSD=2.14%2－21。已知量加入量测得量回收率平均回收率已知量加入量测得量回收率平均回收率序号（mg）（mg）（mg）（％）（％）13.5202.7176.19998.6023.4272.7176.176101.2033.4942.7176.277102.4043.5073.4586.85596.8053.5363.4587.004100.30100.322.1463.4403.4586.83698.2073.4274.1997.62099.8783.4664.1997.774102.6093.5074.1997.827102.87讨论条件，均未能使熊果酸和齐墩果酸成功分离，包括甲醇－水(88：12)、甲醇－磷酸盐缓冲液（9：1、24－乙腈(30：70)、甲醇－水－冰醋酸(33：67：0.2)等。本章结论的指标性成分测定方法。3.C18为流255nm、柱温：25℃的色谱条件，同时测定了山楂黄酮提取部位中的金丝桃苷和牡荆素-2”-O-第三章第三章有效部位的提取精制工艺研究第三章有效部位的提取精制工艺研究山楂叶中总黄酮的提取精制工艺研究试验仪器和药品CrataeguspinnatifidaBgemajorN.E.Br的析纯山楂叶药材中总黄酮含量的测定。1000.5g，加入40mL60％乙醇，6030min3次，合并10mL600.3g0.3g100mL60％50mL2.2的测定。山楂叶总黄酮提取精制工艺的初步选择少了有机溶剂的污染，并在此基础上进一步开展了工艺优选研究。山楂总黄酮乙醇提取工艺影响因素的考察乙醇浓度对山楂总黄酮提取率的影响精密称取山楂叶粗粉（20目）25g共4份，分别加0，30，60，95％乙醇500mL1.5h中含有量相比，按公式（－－1提取率％＝提取物中黄酮量100％药材中黄酮量

公式（3－1）表3－1乙醇浓度(%) 0 30 60 95提取率(%) 25.1 49.9 73.1 63.6提取时间对山楂总黄酮提取率的影响精密称取山楂叶粗粉（20目）25g560500mL，1h5，20，30，40，60min，滤过，残渣用少量溶媒洗涤，合量，与药材中含有量相比，按公式(3－1)3－2。表3－2时间(min) 5 20 30 40 提取率(%) 5.1 48.7 62.1 63.9 71.4。溶剂用量对山楂总黄酮提取率的影响（20目60500mL1h60min，滤过，残渣用少量溶媒洗涤，合并滤液，减压干燥，得粗粉。按上述总黄酮测定方法操作，测定山楂总黄酮含量，与药材中含有量相比，按公式（－－。表3－3溶剂用量(mL) 125 250 375 500提取率(%) 34.1 49.9 57.1 73.1提取温度对山楂总黄酮提取率的影响（20目6040、60、80、10090min，滤过，残渣用少量溶3－4。表3－4温度(℃)406080100提取率(%)32.562.768.775.3山楂总黄酮提取工艺优化3－5U10（10×53）均匀设计表安排3－6。g（0目2得粗粉。按上述总黄酮测定方法操作，测定山楂总黄酮含量，用公式计算提取率。水平溶剂用量*乙醇浓度(%)水平溶剂用量*乙醇浓度(%)温度(℃)加热时间(min)1560404027655560397070804117585100513801001206157178199211023表3－6因素序号溶剂用量(倍)乙醇浓度(%)温度(℃)加热时间(min)提取率(%327708512055.839804010026.3411607010055513651008067.761575408039.171780706050.9819601006093.392170554069.5102375854090.6表3－6中数据用spss10.0y(选入变量的影响后)对y考虑剔除。最终确定方程如下：Y=9.022+4.659x1-0.868x2+0.181x3+0.700x4+0.0184x1x3-0.0427x1x4式中：y：提取率，x1：溶剂用量，x2：乙醇浓度，x3：提取温度，x4：加热时间，x1x3、x1x4：因素的交互作用。R＝0.9975，S＝2.585，F＝98.953，P<0.00155，方程有显著意义。（转换公式如下：

i）的liilbliil

公式（3－2）i iliixilyy3－7表3－7因素x1x2x3x4x1x3x1x4标准偏回归系数1.340-0.3070.1930.9910.521-0.360有提取率高、生产成本低的优点，更适合工业生产。图3－1树脂吸附性能的考察树脂的预处理大孔吸附树脂（40～60目）48h，装柱。254nm再用蒸馏水洗至无醇味，备用。装柱0.2g馏水浸泡，备用。D101型大孔吸附树脂吸附率和解吸率的比较（72.4％）200mL，放入恒温（30℃）18h，充分吸附后，滤过。测定溶液中剩余山楂总黄酮含量，按公式（3-3）计算：吸附量＝溶液体积吸附前溶液浓度－吸附后溶液浓度树脂重量（干）

公式（3-3）9mm70测定解吸液中总黄酮含量。按公式（3-4）3－8。解吸百分率＝洗脱液的平衡浓度洗脱液的体积吸附量树脂重量（干）

公式（3-4）表3－8不同型号大孔树脂的吸附量和解吸率Tab.3-8Absorptionanddesorptionofdifferenttypemacroporeousresins型号 D-101 D-101A D-101C吸附量(mg/g) 256.5 231.4 280.2解吸率(%) 95.4 98.7 94.8由表3－8D-101CD-101A浓度对吸附的影响（吸附等温线）0.5g40mL不同浓度的0.8mL，在表面皿上水浴蒸去溶剂，按山楂总黄酮含量测定方法测定含量。按公式（3-3）计算吸附量。以平衡浓度为横坐标，吸附量为纵坐标，得到吸附等温线，见图3－2。吸附量(mg/g)吸附量(mg/g)00 5 10 15平衡浓度(mg/ml)图3－23－2Brunauer－5）表示：qqbc1bc

公式（3－5）q（/b为吸附平衡常数；q（/；C为山楂总黄酮的平衡浓度。上式可改成：c1q

1q

公式（3－6）c~c以q 作图，可得一直线，由直线的斜率可得饱和吸附量q为687mg/g。温度对吸附的影响0.5g540mL浓度5mg/mL24h，（3－3）计算吸附量。结果见图3－3。300吸附量(mg/g)吸附量(mg/g)2001501005000

20 40 60 80温度(℃)图3－33.1.6.6盐离子对吸附的影响0.5g105mg/mL40mLNaClKCl0.5，1.0，1.5，2.0，2.5mol/L（30℃）24h1.6.43－4吸附量(mg/g)400吸附量(mg/g)NaClKCl300NaClKCl20010000 1 2 3盐浓度(mol/L)图3－43.1.6.7山楂总黄酮的吸附曲线6BV/h2mg/mL的山楂总5mL3－5。浓度(mg/mL)2浓度(mg/mL)100 100 200 300 400体积(mL)图3－53.1.6.8洗脱液的考察0.5g5mg/mL20mL30％、50％、70％、95洗脱，作图3－6。浓度(μ浓度(μg/mL)30% 50%30% 50%70%90%00 10 20 30体积(ml)图3－63.1.6.9洗脱剂流速的考察0.5g5mg/mL20mL7，14，21，35BV/h的流速洗脱，以洗脱液的体积为横坐标，洗脱液的浓度为纵坐标作图3－7。7BV/h 14BV/h21BV/h35BV/h7BV/h 14BV/h21BV/h35BV/h浓度(μg/mL)100050000 5 10 15 20洗脱液体积(mL)图3－73.1.6.10大孔吸附树脂吸附纯化山楂总黄酮的工艺1.0g处理过的树脂1mL1g10mL，将上述水溶液6BV/h12BV14BV/h的流速洗去杂15BV70％乙醇用同一流速洗脱。工艺的验证g701mL1g6BV/h12BV的水14BV/h15BV7065％以上。讨论60。山楂果中总三萜酸部位提取工艺的研究50提取工艺优选醇提取条件的确定3－9。表3－9乙醇浓度（％）提取时间（h）乙醇用量（倍）16041527062038082550g，加入设定浓度乙醇回流提取设定时量取适量稠膏真空干燥，精密称定，按含量测定方法测定计算提取率作为指标。3－10。三萜酸类提取率＝干膏出膏率×总三萜酸含量表3－10序号ABCD结果111112.65212222.58313331.71421232.08522312.80623122.44731322.61832131.62933212.16Ⅰ6.947.346.717.61Ⅱ7.327.006.827.63Ⅲ6.396.317.125.41R0.310.340.140.74平方和142.58142.69142.23145.40s0.14580.18360.03001.0854变差来源离差平方和自由度均方F值P变差来源离差平方和自由度均方F值P值A0.145820.07294.855p<0.01B0.183620.09186.116p<0.01C0.030020.01501D1.085420.542736.154p<0.01误差0.030020.0150总和1.444880.7224酸浓度的确定200g，2873222NaOH2最后用适量水冲洗，真空干燥，即得总三萜酸提取物，见表3－12。表3－12编号硫酸浓度（％）收率（％）总三萜酸含量（％）三萜酸量提取率(%)138.1342.754266.6483.168394.3572.451碱浓度的确定200g，87322，2NaOH2最后用适量水冲洗，3－13。表3－13编号碱液浓度（％）收率（％）总三萜酸含量（％）三萜酸量提取率(%)115.4462.484234.5582.61353.9592.301提取工艺的验证28722，2NaOH23－14。表3－14批次收率（％）总三萜酸含量（％）三萜酸量提取率(%)熊果酸含量（％）14.6572.6227.1524.5582.617.0934.8542.5927.21讨论提取率高、成本低、无有机溶剂污染等的优点。本章结论通过以上试验确定了山楂叶中黄酮类的提取精制工艺和山楂果中三萜酸类的提取精制工艺。具体工艺如下：g0L70℃40min，11.5L60%40min，合并过滤1mL6BV/h12BV14BV/h15BV70％乙醇用同一流速洗脱。洗脱液真空干燥，得黄褐色粉末，即得总黄酮提取部位。70％2871.1g/mL26％90℃2，30mL23％NaOH2第四章第四章制剂处方前的研究第四章制剂处方前的研究中药剂型的研究是一项系统工程，就制剂学而言，制剂处方前研究是在中药经过提取、精制等工艺后，对半成品的物理化学性质、与辅料的配伍变化以及体外溶出特性等方面的研究，是中药剂型研究前一个非常重要的环节具有重要意义。材料和仪器s－40：南4000600010000、单硬脂酸酯：北京化学试剂公司方法与结果山楂黄酮提取物和山楂三萜酸提取物表观溶解度测定930.1mol/LpH6.810mL，置水浴0.8µm减4介质时间(h)黄酮（µg/mL介质时间(h)黄酮（µg/mL）三萜酸（µg/mL）24501.7192.3水48527.9207.572537.8212.324432.762.70.1mol/L盐酸48490.275.772485.374.724508.7201.1pH6.8缓冲溶液48530.6212.872529.9209.8粉体学基本性质的测定粒子形态取样品显微镜照相，见图4－1。abcd图4-1粒子形态图粒度分布取样品适量，均匀分散在载玻片上，滴少量石蜡，使没有重叠粒子，加盖玻片，驱除气泡，测定其定向径，见图4-2。0.4分布频率(%)分布频率(%)0.20.105~10 11~16 17~22 23~27 28~31 >32粒径范围(µm)0.35分布频率(%)分布频率(%)0.250.20.150.10.0506~1213~1920~2627~3334~4041~47 >48粒度范围(µm)图4-2堆密度的测定10mL10cm1054－2。休止角的测定采用固定圆锥底法测定。取样品适量，使其通过玻璃漏斗中流下，倾入培rH，由公式测定6次，取平均值，见表4－2。tgaHr表4－2Tab.4-2Micrometiticpropertiesofsamples性质黄酮三萜酸n平均粒径(µm)(g/cm3)16.081.825±0.2126.331.581±0.285休止角56.5±2.1363.2±1.946指标性成分化学稳定性考察光照试验3600Lx计算相对4－3。表4－3时间(d) 黄酮（%） 三萜酸0 100.0 100.01 99.4 99.93 99.4 100.25 98.9 98.710 99.2 99.5温度影响试验恒温干燥箱中4－4表4－4温度温度(℃)Time(d)黄酮（%）三萜酸(%)0100.0100.0199.499.1403102.499.3598.899.81097.2101.2199.4100.26035100.498.999.899.11098.298.0199.799.3803598.698.199.498.41099.098.7湿度影响试验0.3～0.4mm75（NaCl、25℃计算相对百分含量，4－5。表4－5时间时间(d)75%黄酮（%）90%70%三萜酸(%)90%0100.0100.0100.0100.01101.298.498.799.5399.799.298.4101.2598.9100.199.999.61099.298.899.298.9提取物吸湿平衡曲线的测定d0.90.80.7总黄酮吸湿量总黄酮吸湿量(%)0.50.40.30.20.100.3 0.45 0.6 0.75 0.9 1相对湿度(%)图4－34.2.3.5提取物与辅料的相互作用peg4000、peg6000、peg10000、泊洛沙姆、s40Rf药物在基质中的分散程度考察本文采用差示扫描量热法考察药物的分散状态。测定条件：参比物，样品约，空气，升温速率，纸速，扫描温度自室温，结果见图4－4。图4－435％以内比较合适，能够形成分散较好的分散体，起提高生物利用度。4.3讨论0.1mol/LHCl显微照片显示，总黄酮提取物、总三萜酸提取物粒子均为不规则形状，其中黄酮提取物粒子形状规则，休止角较小，粉体流动性较好。化学稳定性初步考察结果表明，总黄酮提取物、总三萜酸提取物对光、热、湿稳定。可以进一步进行制剂工作。第五章第五章滴丸制备工艺的研究第五章滴丸制备工艺的研究2000定的方法测定试验样品的溶散时限；并任取20粒称重，求出变异系数。试验仪器和药品山楂叶总黄酮提取物，山楂总三萜酸提取物：自制；泊洛沙姆，s－40聚乙二醇基质的初步优选13400060001000010％2％10～12℃，10/分的滴速滴制，滤除冷却剂，-15℃～-20℃24h5－1。基质丸重变异系数（％）溶散时限（min）基质丸重变异系数（％）溶散时限（min）外观质量Peg40004.325.21外观不圆Peg60003.455.64圆整度较好Peg100004.636.63外观不圆滴丸的处方设计因素水平设计50.6mm，10～12℃，进行滴丸的5－2。表5－2 水平提取物比例（％）硬脂酸（％）泊洛沙姆18812025225510330815数据处理方式采用多指标全概率评分法，对结果进行处理，用于正交表的计算。因本试验中丸重差异和溶散时限重要程度相同，为方便起见，可按下式计算。P(Bi)=P(Bi|A1)+PBi|A2) （i=1，2，…，n）正交试验结