多聚赖氨酸黏附载玻片制作工艺的比较

多聚赖氨酸黏附载玻片制作工艺的比较

本研究采用传统浸泡法、棉纺法、一次压片法和二次压片法，比较分析了两种方法的吸附效果、海防效果、实用性和经济效率。结果表明,多聚赖氨酸与蒸馏水以3∶2比例稀释时,常规浸泡法、一次推片法和两次推片法黏附率均在98%以上,常规浸泡法可用于大批量制作,推片法防尘效果较好且便于操作,两次推片法黏附效果最好,一次推片法最经济。1材料和方法1.1回用社会主义介质,还原组织多聚赖氨酸,棉签,免洗磨砂载玻片,洁净塑料管,玻片架,摊片板,微量移液器,洁净塑料平皿,微波炉,30%双氧水,染缸,抗原修复盒。1.2方法1.2.1载玻片的制备方法1:将多聚赖氨酸与蒸馏水以1∶9比例稀释配成30ml的多聚赖氨酸液,置于一洁净塑料平皿中,取60张载玻片分批次在其液体中浸泡5min,捞出载玻片晾干后备用。方法2:将多聚赖氨酸与蒸馏水以5∶3比例稀释配成30ml的多聚赖氨酸液,与方法1操作相同,制备120张黏附载玻片以备用。方法3:将多聚赖氨酸与蒸馏水以3∶2比例稀释配成30ml的多聚赖氨酸液,与方法1操作相同,制备120张黏附载玻片以备用。1.2.2载玻片的制备将多聚赖氨酸与蒸馏水以3∶2比例稀释,取2000μl多聚赖氨酸和1334μl蒸馏水充分混匀,置于一洁净塑料管中,用棉签将其均匀涂于载玻片磨砂面,晾干备用,按此方法制作120张黏附载玻片。1.2.3多聚赖氨酸液+前载玻片的制备将多聚赖氨酸与蒸馏水以3∶2比例稀释,置于一洁净塑料管中备用。左手持载玻片的磨砂面一端,且磨砂面朝上。右手持微量移液器,取20μl已稀释的多聚赖氨酸液,滴在载玻片磨砂面远端距载玻片边缘1cm处。右手持另一载玻片,且磨砂面朝下,在左手载玻片上由前向后接触多聚赖氨酸液滴,将两玻片平行放置,然后相向匀速推动两载玻片,直至两玻片的非磨砂处重合。将粘合在一起的两张载玻片放在摊片板上,自然晾干后以备用。1.2.4推片加制备法方法1:将多聚赖氨酸与蒸馏水以1∶9比例稀释,充分混匀。用推片法处理玻片1次,晾干,用同样方法将载玻片再处理1遍。自然晾干后收至切片盒以备用。方法2:将多聚赖氨酸与蒸馏水以3∶2比例稀释,充分混匀。与方法1操作相同,制作黏附载玻片以备用。1.2.5载玻片的制备取10头猪的肠系膜淋巴结组织蜡块,5μm厚切片,每个组织蜡块取四种方法制作的载玻片各5张分别进行捞片。切片常规脱蜡水化,3%双氧水室温下浸泡10min,蒸馏水浸洗3次,每次5min。然后在pH6.0的磷酸盐缓冲液中进行微波修复,高火煮沸后,静置3min,低火煮20min,自然冷却后统计脱片情况。取10头猪的心、肝、脾、肺、肾、十二指肠、脑组织蜡块,5μm厚切片,每个组织蜡块取常规浸泡法3、棉签涂布法、一次推片法、两次推片法2制作的载玻片各5张分别进行捞片。使用上述方法进行微波修复,统计脱片情况。2制作多聚赖氨酸黏附片对猪的肠系膜淋巴结组织切片内固定术采用常规浸泡法(方法1～3)、棉签涂布法、一次推片法、两次推片法(方法1、2)制作多聚赖氨酸黏附载玻片用于猪的肠系膜淋巴结组织切片微波修复处理。载玻片黏附率见表1。采用常规浸泡法3、棉签涂布法、一次推片法、两次推片法2制作多聚赖氨酸黏附载玻片用于猪的心、肝、脾、肺、肾、十二指肠、脑组织切片微波修复处理。载玻片黏附率见表2。3讨论3.1结合效果更好3.1.1载玻片黏附率在常规浸泡法中,多聚赖氨酸与蒸馏水分别以1∶9、5∶3、3∶2比例稀释,载玻片黏附率分别是92%、94%、98%。在两次推片法中,多聚赖氨酸与蒸馏水分别以1∶9、3∶2比例稀释,载玻片黏附率分别是96%、100%。由此可以看出,在多聚赖氨酸与蒸馏水稀释从1∶9到3∶2时,载玻片黏附效果呈增强趋势。3.1.2载玻片的制备常规浸泡法3、棉签涂布法、一次推片法和两次推片法2均是多聚赖氨酸与蒸馏水以3∶2比例稀释,制备的载玻片用于猪的心、肝、脾、肺、肾、十二指肠、脑组织切片微波修复。除棉签涂布法脑组织切片黏附率为96%以外,四种方法制作的黏附载玻片的黏附率均在98%以上。特别是两次推片法2,除脑组织切片外,黏附率均是100%,黏附效果好。3.2次推片法和两次推片法在玻片干制备时的性能常规浸泡和棉签涂布法在晾干的过程,空气中会有灰尘等杂质污染载玻片。而一次推片法和两次推片法在玻片晾干时,两张玻片是紧密粘合的,有效降低载玻片在晾干过程中被污染的机率。与棉签涂布法相比,常规浸泡法和推片法制备黏附载玻片时的多聚赖氨酸液涂布更均匀。3.3黏附载玻片的制作常规浸泡法可满足一次性制作大量黏附载玻片。棉签涂布法、一次推片法和两次推片法制作黏附载玻片,操作更机动灵活,可大量制作,也可小批量制作,可以更加有效地利用小段时间进行制片。3.4黏附载玻片的制作常规浸泡法制作多聚赖氨酸黏附载玻片过程中,玻片两面均黏附有多聚赖氨酸,且从浸泡液中取出玻片时明显会带走一部分浸泡液,多聚赖氨酸损耗较大。本试验使用棉签涂布法制备1张黏附载玻片需约10.7μl多聚赖氨酸,由此推算3ml多聚赖氨酸仅能制作280张黏附载玻片。这个结果和李梅等所介绍的3ml多聚赖氨酸可制作450张黏附载玻片不同,这种差别可能是由于盛装多聚赖氨酸液的容器不同导致的。本试验是将棉签直接插入装有多聚赖氨酸液的塑料管中,而李梅等实验中使用的是塑料试剂瓶,处理玻片时先将多聚赖氨酸液涂在棉签上