第二章植物组织培养(园艺)课件

1第二章植物组织培养实验室和基本技术2.1组培实验室及基本设备

2.1.1组培实验室的组成及其功能

2.1.1.1准备室（基本操作实验室）基本功能常用仪器和设备

22.1.1.2无菌操作室⒈功能⒉组成缓冲室（间）：接种室（间）：⒊无菌操作室的消毒⒋主要设备超净工作台金属器械消毒器32.1.1.3培养室功能主要设备环境条件

2.1.1.4温室功能452.1.2组培实验室的布局

2.1.2.1布局基本要求便于隔离，便于操作，便于灭菌和便于观察。

2.1.2.2基本布局规律根据实验操作程序排列实验室；接种室和培养室设在与外界环境隔离性好的区域；灭菌室与接种室相邻；其他实验室的布局可根据条件，以方便使用为宜。6培养室准备室灭菌室储藏室接种室缓冲室植物组织培养实验室布局示意图72.1.2.3设计组培实验室时的注意事项为了减少污染，实验室最好设一走廊且走廊上方最好安装紫外灯；培养室最好设在南面，设大玻璃窗，以双层玻璃窗为最好。如果培养室是设在房屋的边侧，其东边或西边的墙上也可设置大玻璃窗；培养室房间及门要小，而且密闭性要好，最好装移门；无菌操作室要小，要设缓冲间，也最好装移门，且门要稍大一些。82.1.3组培实验室的基本设备

2.1.3.1器皿和器械类⒈玻璃器皿⒉器械镊子类解剖刀剪刀接种针细菌过滤器

2.1.2.2仪器设备⒈无菌操作设备超净工作台9高压蒸汽灭菌器10电热烘箱接种器具消毒器1112⒉培养设备空调加湿器和去湿机定时器培养架摇床或旋转床培养箱⒊药品贮存和配制仪器设备冰箱天平酸度计⒋观察分析仪器设备体视显微镜普通光学显微镜倒置显微镜⒌其它仪器设备离心机恒温水浴锅13142.2培养基组培中培养基的重要性：基本培养基：指只含有维持离体植物细胞基本生命活动所需的营养成分的培养基。通常包括水分、无机营养成分和有机营养成分，不包括激素和天然有机附加物。完全培养基：指在基本培养基的基础上另外附加激素或天然有机附加物所组成的培养基。152.2.1培养基的构成

2.2.1.1水

2.2.1.2无机盐类大量元素化合物微量元素化合物

2.2.1.3有机营养成分糖类维生素类氨基酸类162.2.1.4植物生长调节剂1、生长素类常用类型：NAA,2,4-D,IBA,IAA功能培养基中常用浓度：10-7～10-5mol/L或0.1～10mg/L2、细胞分裂素类常用类型：6-BA,KT.TDZ,2-ip功能培养基中常用浓度：10-7～10-5mol/L或0.1～10mg/L17183、组织培养时，植物激素的使用规律在生长素存在的条件下，细胞分裂素的作用有加强的趋势，但二者在使用上有一定的顺序关系，处理顺序不同，培养物的分化状态也不同。规律如下：

⑴先用生长素处理，后用细胞分裂素处理，有利于细胞分裂，但细胞不容易分化,容易产生多倍体细胞。

⑵先用细胞分裂素处理，后用生长素处理，细胞分裂也分化。⑶用生长素和细胞分裂素同时处理，细胞脱分化后分化频率提高。但二者的使用浓度比值可以决定器官分化方向：生长素/细胞分裂素比值高时，有利于根分化，抑制芽形成。反之，有利于芽分化，抑制根形成。比值适中时，促进愈伤组织的形成和生长。19202.2.1.5天然有机添加物质椰汁：CM100～150ml/L酵母提取液：YE0.01%～0.5%番茄汁：5%～10%马铃薯汁：100g/L～200g/L香蕉泥（汁）：150mg/L～200mg/L2.2.1.6培养基的pH值灭菌前pH值调控范围：pH=5.7～5.8pH对培养基凝固的影响pH调节剂2.2.1.7凝固剂⒈琼脂：用量范围：3～10g/L影响琼脂凝固的因素⒉Gelrite：植物凝胶2.2.1.8其他添加物活性炭（AC）、维生素C、抗生素等21222.2.2基本培养基的选择

2.2.2.1基本培养基的类型⒈高无机盐含量的培养基代表类型：MS，LS，BL，ER⒉硝酸钾含量较高的培养基代表类型：B5，N6，SH⒊中等无机盐含量的培养基代表类型：Nitsch，Miller，H⒋低无机盐含量的培养基代表类型：White，WS，HE

2.2.2.2基本培养基的选择MS培养基B5培养基N6培养基改良的White培养基WPM培养基★培养基是否适合所培养的植物，必须通过试验进行筛选。23242.2.3培养基的配制

母液稀释法2.2.3.1培养基母液的配制和保存

1、基本培养基母液的配制

⑴单配法⑵混配法①按照避免难溶性沉淀形成的原则和物质种类的不同，将基本培养基配方所包括的物质进行分组；25

②基本培养基配方中物质划分组数的多少，即配制母液数的多少可根据实际情况而定，如MS培养基可以配制三液式、四液式、五液式等；例如：MS培养基五液式大量元素母液钙盐母液微量元素母液铁盐母液有机营养成分母液

26

2、激素母液的配制⑴激素母液的浓度1～10mmol/L或0.1～1mg/L⑵配制方法生长素类细胞分裂素类⑶培养基的保存27

2.2.3.2培养基的配制水准备母液混合定容调pH加入琼脂糖加热溶解

培养器皿清洗干燥分装封口高压蒸汽灭菌冷却凝固接种培养基具体配制操作过程：P21培养基配制程序282.3组培实验基本操作技术

2.3.1器皿和器具的洗涤P191.洗涤剂：无磷中性的肥皂粉、洗衣粉和洗洁精2.常用清洗方法洗涤剂清洗法超声波清洗法

3.玻璃器皿的清洗新购置的玻璃器皿的清洗用过的培养器皿的清洗已经污染的玻璃器皿的清洗29302.3.2灭菌

2.3.2.1器具的灭菌方法干热灭菌法高压蒸汽灭菌法（湿热灭菌法）火焰灼烧灭菌法

2.3.2.2培养基的灭菌方法高温蒸汽灭菌法过滤除菌法31培养基灭菌方法

-------湿热灭菌法培养基湿热灭菌最少时间

液体容积（ml）121℃所需时间（min）

20---5015