实验室消毒与杀菌技术

实验室消毒与杀菌技术

消毒和消毒的一般原则和方法对于实验室的生物安全非常重要。因此,实验室和医学废弃物的处理应遵守相关行业部门、国家和国际的规定。根椐卫生部《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》WS233-2002第6.2.2.2条款明确规定,实验室的设计和建造应设置高压灭菌锅、化学消毒装置,实验后的一切废弃物都必须进行灭菌、消毒处理;关于清除污染的特殊要求,要根据实验工作类型以及所操作的感染性物质的特性来决定。《实验室生物安全通用准则》GB19489-2004的相关条款均提出设置高压灭菌锅的要求。如在相关生物安全实验室未设置高压灭菌锅或化学消毒装置或装备了其设备但不符合规定要求的,应该讲是一个不合格的生物安全实验室。当然,正确掌握灭菌和消毒技术亦是实验室生物安全保证的重要方面之一。消毒即通过物理或化学手段去除微生物(不一定杀灭其孢子);而灭菌杀灭和/或去除所有微生物及其孢子的过程;化学消毒灭菌通过液体化学试剂杀灭微生物繁殖体或芽孢。然而,消毒对象包括物体表面、空气和污染物等,方式有擦洗消毒、熏蒸和浸泡等。物理消毒灭菌包括紫外线、高压蒸汽灭菌、焚烧和HEPA过滤除菌等。通常加热是最常用的清除病原污染的物理手段。“干”热没有腐蚀性,可用来处理实验器材中可耐受≥160℃高温的物品,所需时间为2~4h。通常它的适用范围是用于高温下不损坏、不变质、不蒸发物品的灭菌;用于蒸汽或气体不能穿透物品的灭菌,如玻璃、油脂、粉剂和金属等制品的消毒灭菌。但高压灭菌的湿热法却最为有效。煮沸并不一定能杀死所有的微生物或病原体,但如果其他方法(化学杀菌、清除污染、高压灭菌)不可行或没有条件时,也可以作为一种最起码的消毒措施。一旦灭菌后的物品必须小心操作和保存,以保证在使用之前不再被污染。1选择原则对于选择消毒和灭菌方法的原则:1.1消毒指数的测定高度危险的物品,必须选用灭菌法灭菌,其灭菌指数为106;中度危险的物品,可选用中效消毒法或高效消毒法,要求消毒指数达103以上;凡低度危险物品,一般可用低效消毒方法或只作一般性清洁处理即可。1.2消毒、消毒方法和剂量根据污染微生物的类型和数量进行选择2预防消毒和消毒消毒因子大多是对人体有害,因此,在进行消毒时一定要具有自我防护的措施,防止消毒操作中发生的意外事故,同时应防止由于操作方法不当而对人引起的伤害。热力消毒灭菌:干热灭菌防止燃烧,压力蒸气灭菌应防止爆炸等;紫外线、微波消毒时应防止对人的直接照射;气体化学消毒、灭菌剂要防止泄漏;液体化学消毒、灭菌剂要防止过敏和对皮肤粘膜的伤害;处理锐利器械时应避免对人的损伤。3消毒和消毒方法压力蒸汽灭菌器是根据排放冷空气的方式和程度不同,分为下排气式压力蒸汽灭菌器和预真空压力蒸汽灭菌器两大类。3.1下汽式压力蒸汽发生器高压灭菌即压力饱和蒸汽灭菌是对实验材料进行灭菌的最有效和最可靠的方法。通过温度设置和灭菌时间的组合将确保高压灭菌器的灭菌效果。3.1.1手提式压力蒸汽灭菌方法3.1.2湿式压力蒸汽灭菌方法3.2预真空高压灭菌的无菌方法如下3.2.1预真空蒸汽灭菌方法3.2.2动脉真空蒸汽灭菌方法4加载注意事项为了利于蒸汽的渗透和空气排出,高压灭菌物品应松散包装放置在灭菌器内。要使蒸汽能够作用到其内容物。同时应按照下列要求进行装载。1.2.1高效消毒和灭菌法受到致病性芽孢菌、真菌孢子和抗力强、危险程度大的病毒污染的物体,应选用高效消毒法和灭菌法。1.2.2消毒法的选择受到致病性细菌和真菌、亲水病毒、螺旋体、支原体、衣原体应选用中效以上消毒法。1.2.3亲脂病毒污染物品的消毒处理受到一般细菌和亲脂病毒污染的物品,可选用中效或低效消毒法。1.2.4消毒时间的确定物品上污染特别严重时,应加大处理剂量和延长消毒时间。a)134℃、3min;b)126℃、10min;c)121℃、15min;d)115℃、25min其灭菌方法为:3...13..2.1在主体腔内加入适量的清水,将灭菌物品放入灭菌器内;3.1.1.2将顶盖上的排气软管插入内壁的方管中,盖好后必须拧紧顶盖;.1.1.3打开灭菌器的热源,开启排气阀排完空气后(约在水沸腾后10min~15min关闭排气阀;3.1.1.温度设定要求将压力升至102.9kPa(1.05kg/m2),温度要求达121℃,维持到规定时间(根据物品性质以及有关情况确定,一般20min~30min);3.1.1.5、五需要干燥的物品,打开排气阀,慢慢放汽,待压力恢复到零位后开盖取物。3.2..13.2.2.1将待灭菌物品放入灭菌柜室内,关闭柜门并扣紧;3.1..2打开进气阀,将蒸汽通入夹层预热;.1.2.调整控制阀回至菌落夹层压力达102.9kPa(1.05kg/m2)时,调整控制阀到“灭菌”位置,蒸汽通入灭菌室内,此时柜内冷空气和冷凝水经柜室阻气器自动排出;3.1.2.4当柜内压力达102.9kPa(1.05kg/m2),需维持20min~30min;3.1.2.5、五需要干燥的物品,灭菌后调整控制阀至“干燥”位置,蒸汽被抽出,柜室内呈负压,维持一定时间物品即达干燥要求;3.1.2.物的加入对液体类物品,应待自然冷却到60℃以下,再开门取物,不得使用快速排出蒸汽法,以防突然减压,液体剧烈沸腾或容器爆炸。将待灭菌的物品放入灭菌柜内,关好柜门,预真空压力蒸汽灭菌整个过程约需25min。3..1.2将蒸汽通入夹层,使压力达107.8kPa(1.1kg/m2),预热4min;.2.1.3启动真空泵,抽除柜室内空气使压力达2.0kPa-2.7kPa(排除柜室内空气98%左右);3.2.1.4停止抽气,向柜室内输入饱和蒸汽,使柜内压力达205.8kPa(2.1kg/m2),温度达134℃,维持灭菌时间3min;3.2.1.6，六通入过滤后的洁净空气,使灭菌室压力蒸汽回复为零,温度降至60℃以下,即可开门取出物品。3.2.1.使灭菌物品迅速干燥停止输入蒸气,再次抽真空使压力达8.0kPa,使灭菌物品迅速干燥;将待灭菌的物品放入灭菌柜内,关好柜门,脉动预真空压力蒸汽灭菌整个过程需29min~36min。3...2将蒸汽通入夹层,使压力达107.8kPa(1.1kg/m2),预热4min;.2.2.3启动真空泵,抽除柜室内空气使压力达8.0kPa;3.2.2.4停止抽气,向柜室内榆入饱和蒸汽,使柜室内压力达49kPa(0.5kg/m2),温度达106℃~115℃,关闭蒸汽阀;3.2.2.5、五抽气,再次输入蒸汽,再次抽气,如此反复3次~4次;3.2.2.6，六最后一次输入蒸汽,使压力达205.8kPa(2.1kg/m2),温度达132℃,维持灭菌时间4min;3.2.2.7、七停止输入蒸汽,抽气,当压力降到8.0kPa,打开进气阀,使空气经高效滤器进入柜室内,使内外压力平衡;3.2.2.8重复上述抽气进气操作2次~3次;3.2.2.9待柜内外压力平衡(恢复到零位),温度降至60℃以下,即可开门取出物品。4.1灭菌器的装载与装置设计下排气灭菌器的装载量不得超过柜室内容量的80%;预真空灭菌器的装载量不得超过柜室容积90%,同时预真空和脉动真空压力蒸汽灭菌器的装置量又分别不得小于柜室容积的10%和5%,以防止“小装量效应”,残留空气影响灭菌效果。4.2菌种的种数和时间应尽量将同类物品放在一起灭菌,若必须将不同类物品装放在一起,则以最难达到灭菌物品所需的温度和时间为基准。4.3空气污染物排放物品装放时,上下左右相互间均隔一定距离以利蒸汽置换空气;大型灭菌器,物品应放于柜室或推车上的载物架上;无载物架的中小型灭菌器,可将物品放于网篮中。4.4菌的麻黄用于灭菌的大包放在上层,较易灭菌的小包放在下层;金属物品放下层,织物包放上层,物品装放不能贴靠门和四壁,以防吸入较多的冷凝水。4.5垂直位置原则金属包应平放,盘、碟、碗等应处于竖立的位置;纤维织物应使折叠的方向与水平面成垂直状态;玻璃瓶等应开口向下或侧放以利蒸汽进入和空