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医学细胞生物学设计性实验设计报告姓名余囯清班级2011级k―3学号1120150305评分实验项目：动物细胞融合、细胞核的分离与鉴定实验原理：细胞融合又称细胞杂交，他是指细胞彼此接触时，两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的现象。在自然情况下，体内或体外培养细胞间所发生的融合，称为自然融合。而在体外用人工方法（使用融合诱导因子）促使相同或不同细胞间发生融合，称为人工诱导融合。人工诱导融合中常用的诱导因子有：生物的（如灭活的仙台病毒）﹑化学的（如聚乙二醇）和物理的（如电融合）因子。聚乙二醇是一种去垢剂，易得，用法简单﹑融合效果稳定，是目前运用的比较多的一种诱导剂。细胞融合的范围佷广，从种内、种间、属间、科间一直到动植物两界之间都获得了成功。目前，这一技术已成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种的重要手段。实验步骤：（一）50%PEG液的制备称取一定量的PEG（MV=4000）放入试管内在酒精灯火焰上加热，使其熔化，待冷至50℃时，加入等体积并预热的无血清1640液混匀。置之37℃水浴箱种保温待用。（二）融合方法：1.一瓶已长成HeLa细胞或CHO细胞，按常规方法消化制成细胞悬液。如果用鸡血细胞，可取肝素抗凝的弃血清鸡血0.1ml。2.将悬液移入离心管中，以800r/min离心7~8min，倾去上清液，加入8mlHanks，再次悬浮细胞，离心洗涤一次，倾去上清液后将离心管倒置于滤纸上，尽量流尽剩余液体（这一步很重要，因为残留液体会改变PEG的浓度）。3.用手指轻弹离心管底部，使沉淀物松散。然后吸取制备好的50%PEG0.4ml，在37℃水浴中，于90s内逐滴加入离心管中，边加边振摇离心管，使之与细胞混匀，然后加入8~10mlHanks液轻轻吸打混匀，在37℃水浴中静置5min以稀释PEG。离心弃去上清液后，加入2~3ml含小牛血清的1640培养液，在37℃水浴中孵育30min。4.离心弃上清液后，取一滴融合后的细胞悬液滴片，加盖片镜检。注意事项：（1）制备的50%PEG一定要保温在于37℃水浴中，不然冷却后结晶析出。（2）在离心管中加PEG之前，一定要将离心管倒置在滤纸上，流尽剩余液体，否则残留液会改变PEG的浓度。预期结果：在显微镜下可以观察到有细胞或两个以上的细胞膜融合在一起一个异核体细胞。要注意辨别融合细胞。教师：日期：

实验仪器、设备、器具表姓名余囯清班级2011级k-3班学号1120150305实验项目：细胞融合名称规格、型号数量说明显微镜1水浴箱1普通离心机1离心管1载玻片盖玻片酒精灯1试管实验试剂表姓名余囯清班级2011级k-3班学号1120150305实验项目：细胞融合名称规格用量说明聚乙二醇Hanks液0.25%胰蛋白酶RPNI1640培养液PBS0.2%次甲基蓝染液设计性实验要求：*4～6人一组，每组完成一份设计报告并制作一个幻

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