水中大肠菌群的检测

水中大肠菌群的检测一、 实验目的1、 了解大肠菌群数量与水质状况的关系。2、 了解饮用水和水源水大肠菌群的原理和意义。3、 掌握大肠菌群对人体健康的影响以及作为水体评价的指标和对象。4、 学习检测水中大肠菌群的方法。二、 实验原理1、 大肠菌群大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一种细菌，周身鞭毛，能运动，无芽孢。主要生活在大肠内。在肠道中大量繁殖，几占粪便干重的1/3。大肠杆菌的代谢类型是异养兼性厌氧型。所以在平常外界环境中不能正常存活很长。在环境卫生不良的情况下，常随粪便散布在周围环境中。若在水和食品中检出此菌，可认为是被粪便污染的指标，从而可能有肠道病原菌的存在。因此，大肠菌群数（或大肠菌值）常作为饮水和食物（或药物）的卫生学标准。（国家规定，每升饮用水中大肠杆菌数不应超过3个）2、 初发酵试验发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置杜氏小套管。乳糖能起选择作用，因为很多细菌不能发酵乳糖，而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气。为便于观察细菌的产酸情况，培养基内加有漠甲酚紫作为PH指示剂，细菌产酸后，培养基即由原来的紫色变为黄色。漠甲酚紫还有抑制其他细菌如芽孢菌生长的作用。水样接种于发酵管内，37°C下培养：（1） 24h内小套管中有气体形成，并且培养基混浊，颜色改变，说明水中存在大肠杆菌，疑为阳性结果；（2）在量少的情况下，也可能延迟48h后才产酸产气，此时应视为可疑结果。以上两种结果均需继续做下面两部分实验，才能确定是否是大肠菌群。（3） 48h后仍不产气的为阴性结果。3、MPN-概述最大或然数（mostprobablenumber，MPN）计数又称稀释培养计数，适用于测定在一个混杂的微生物群落中虽不占优势，但却具有特殊生理功能的类群。其特点是利用待测微生物的特殊生理功能的选择性来摆脱其他微生物类群的干扰，并通过该生理功能的表现来判断该类群微生物的存在和丰度。本法特别适合于测定土壤微生物中的特定生理群（如氨化、硝化、纤维素分解、固氮、硫化和反硫化细菌等。）的数量和检测污水、牛奶及其他食品中特殊微生物类群（如大肠菌群）的数量，缺点是只适于进行特殊生理类群的测定，结果也较粗放，只有在因某种原因不能使用平板计数时才采用。三、 实验方法1、 实验流程图采水样一初发酵试验一观察发酵管2、 、实验步骤1） 采水样：水源水2） 初发酵试验取16支发酵管，其中10支用移液管计入10mL一倍的乳酸蛋白胨培养液，5支加入5mL三倍乳酸蛋白胨培养液，1支加入9mL自然水。完成包装后，于121°C高压灭菌中灭菌30min左右。冷却后，在无菌条件下，向装有三倍的乳酸蛋白胨培养液的5支试管中加入10mL水样，向装有一倍的乳酸蛋白胨培养液的5支试管中加入1mL的水样，向装有一倍的乳酸蛋白胨培养液的另5支试管中加入1mL10”（-1）水样。将各试管充分均匀，置于37°C恒温箱中培养24h。3）录阳性管的数量，再根据初发酵试验的阳性管/瓶数查表，即得大肠菌群数。四、 实验结果综合当天实验的几个小组的数据，查得书上的表三得每升水源水样中的大肠

菌群数，得到如下结果:从实验数据及图表可知当天实验的5个小组的数据存在较大的偏差，各个小组的实验结果各不相同，可比性十分低，无法根据实验结果估计出实验水样中最有可能的大肠菌群数。造成误差的原因大概有以下几点：1、 实验取水样加入试管时，没有充分摇匀水样，导致各小组所取的水样中大肠菌群分布不均匀，造成实验结果的误差较大。2、 水样采集与保存过程中，采样组员采样瓶开盖过早、所取水样在空气中暴露时间过长，污染水样；另外水样采集量过满，不利于水样检测前振荡摇匀；水样常温运输存放时间过长，未采取低温保存措施，影响实验数据准确性；除此之外，还有可能是采样组员采样不均匀所致。3、 实验过程中，稀释水样时加入的是未经任何处理的自来水，导致实验结果出现较大的偏差。4、 实验室中也可能存在大肠菌群，没有达到实验的环境要求。在操作过程中，可能空气中的大肠菌群落入到试管中，造成实验结果的误差。五、思考题1、什么是大肠菌群？答：大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一种细菌，周身鞭毛，能运动，无芽孢。主要生活在大肠内。在肠道中大量繁殖，几占粪便干重的1/3。大肠杆菌的代谢类型是异养兼性厌氧型。所以在平常外界环境中不能正常存活很长。在环境卫生不良的情况下，常随粪便散布在周围环境中。若在水和食品中检出此菌，可认为是被粪便污染的指标，从而可能有肠道病原菌的存在。因此，大肠菌群数（或大肠菌值）常作为饮水和食物（或药物）的卫生学标准。（国家规定，每升饮用水中大肠杆菌数不应超过3个）大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。调查研究表明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。粪便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多。 大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的，主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。粪便是人类肠道排泄物，其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者的粪便，所以粪便内除一般正常细菌外，同时也会有一些肠道致病菌存在（如沙门氏菌、志贺氏菌等），因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威胁，必须看作对人体健康具有潜在的危险性。大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，目前已被国内外广泛应用于食品卫生工作中。2、为什么要以大肠菌群作为水体安全评价的指标和对象?答：以大肠杆菌作为水体安全评估的指标和对象的原因有以下几点：（1）大肠杆菌来源的特异性：它仅来源于人和温血动物的肠道，其组成恒定，并存在与粪便当中，能够评估水体被粪便污染的程度。（2） 大肠杆菌在食品卫生和水源检测等检验方法中敏感，易检出，符合指示菌的要求。（3） 大肠杆菌具有足够的抵抗力，在体外能存活一定时间，对化学消毒剂、对热均能存活，且与检测对象关系一致，结果间接可靠。而其他一些治病菌群抗逆性没有大肠菌群强，可能离开寄生体就死亡，导致在检测时检测不到，造成结果的不准确。（4） 大肠杆菌数量较致病菌多，容易被检出。如果是选择其他治病菌群作为评估指标和对象的话，由于致病菌群不常有而且数量少，在检测的过程中容易被漏