中药药理学实验

实验一实验动物的捉持和给药方法【目的】观察并掌握实验动物的捉持和给药方法【动物】小白鼠和家兔1小白鼠的捉持和给药方法捉持方法右手提起鼠尾，放在粗糙物（如鼠笼）上面，轻向后拉其尾，此时小鼠前肢抓住粗糙面不动；用左手拇指和食指捏住双耳及头部皮肤，无名指、小指和掌心夹其背部皮肤及尾部，便可将小鼠完全固定。腾出的右手，可以给药。此外，也可单手捉持，难度较大，但速度快。先用拇指和食指抓住小鼠尾巴，用小指、无名指和手掌压住尾根部，再用腾出的拇指、食指及中指抓住鼠双耳及头部皮肤而固定。1.2给药方法（1） 灌胃法。小鼠固定后，使腹部朝上，颈部拉直，右手用带灌胃针头的注射器吸取药液（或事先将药液吸好），将针头从口角插入口腔，再从舌背紧沿上腭进入食道。若遇阻力，应退出后再插，切不可用力过猛，防止损伤或误入气管导致动物死亡。灌胃药一般不超过0.25ml/10g。（2） 腹腔注射法。抓鼠方法同上，右手持注射器（5〜6号针头），从耻骨联合上一侧向头端方向以30°角刺入腹腔（应避开膀胱）。可先刺入皮下2〜3mm，再刺入腹腔，以防药液外漏。针头刺入部位不宜太高太深，以免刺破内脏。注射量一般为0.1〜0.25ml/10g。（3） 皮下注射法。一般两人合作。一人左手抓住小鼠头部皮肤，右手拉住鼠尾；另一人左手提起背部皮肤，右手持注射器（针头号向上），将针头刺入提起的皮下。若一人操作，左手小指和手掌夹住尾巴，拇指和食指提起背部皮肤，右手持注射器给药。一般用量为0.05〜0.25ml/10g。（4）肌肉注射法。两人合作时，一人抓鼠方法同上，另一人左手拉直一侧后肢，右手持注射器，注射部位多选后腿上部外侧（针头号同上）。如一人操作，抓鼠方法类似于腹腔注射，只是药液注射在肌肉内。每腿的注射量不宜超过0.1ml。（5）尾静脉注射法。将小鼠置于特置的固定筒内，使鼠尾外露，并用酒精或二甲苯棉球涂擦，或插入40°C〜50°C温水中浸泡片刻，使尾部血管扩张。左手拉尾，选择扩张最明显的血管；右手持注射器（4〜5号针头），将针头刺入血管，缓慢给药。如推注有阻力而且局部变白，说明针头不在血管内，应重新插入。穿刺时宜从近尾尖部1/3处静脉开始，以便重复向上移位注射。一般用药量为0.1〜0.2ml/10g，不宜超过0.5/10g。2、家兔的捉持和给药方法捉持方法一般用左手抓住兔颈背部皮肤，将其提起，右手托住臀部呈坐位姿态。不要抓两耳，以防兔挣扎。给药方法（1）耳缘静脉注射法。一人操作时，将兔放入固定箱或实验台上，选好耳缘静脉（在耳背的下缘），拔除局部的毛，用酒精棉球涂擦，并用食指轻弹耳壳，使血管扩张。用左手的食指和中指夹住耳根部，拇指和无名指夹住耳尖部拉直；右手将抽好药液的注射器（6〜7号针头）针头刺入血管，用拇指和食指使针头和兔耳固定，将药液推入。如针头在血管内，推注轻松，并可见血液被药液冲走；如不在血管内，则推注有阻力，耳局部变白或肿胀，应立即拔出重新注射。注射完毕，则用手指或棉球压在针眼上，再拔出针头，并继续按压片刻，防止出血。如两人操作，一人夹住兔子，用手暴露血管，压住耳根部使血管充盈，另一人注射给药。（2） 灌胃法。两人合作，一人坐下，两腿夹住兔身，左手固定兔耳，右手抓住前肢；另一人将开口器从嘴角插入口腔，压在舌上，并向后翻转几下，使兔舌伸直。取8号导尿管由开口器中部的小孔插入食道约15cm。如插入气管,兔子则强烈挣扎、呼吸困难。也可将导尿管外端浸入水中，不见气泡则表示插在胃中。插好后，把注射器接在导尿管上，将药液推入。再注入少量空气，使导尿管中所有药液进入胃内。灌完药液后，先慢慢抽出导尿管，再取出开口器。一般用药量为5〜20ml/kg。（3） 腹腔、肌肉、皮下注射法。基本同小白鼠，唯针头可稍大（6〜7号），给药量可稍多，一般腹腔为1.0〜5.0ml/kg，肌肉、皮下为0.5〜1.0ml/kg。（4） 眼结合膜内给药法。将兔固定在兔箱内或夹在掖下，左手拇指和食指拉开兔下眼睑成杯状，中指压住眼内眦，以防药液由鼻泪管流入鼻腔内而被吸收。滴入药液1〜2滴，将下眼睑向上合拢，使眼球充分接触药液。约1min后将手放开，让药液自然流出。

实验二五苓散对小白鼠尿量的影响【目的】观察五苓散的利尿作用。【材料】器材：灌胃器、玻璃漏斗（或烧杯）、玻璃板、粗天平、棉花、注射器、小白鼠。药品：100%五苓散水煎醇沉液、生理盐水。动物：小白鼠。【方法】取小白鼠12只，各用1ml自来水灌胃后，随机分成两级。第1组腹腔注射100%五苓散水煎醇沉液0.5ml，第2组腹腔注射生理盐水0.5ml。分别将两组小白鼠罩在玻璃漏斗内，漏斗下垫有玻璃板。3h后各组用约2g棉花团吸取尿液，并称重。用吸取尿液后棉花团的重量减去棉花自身的重量即为各组小白鼠3h内尿液的重量。比较两组尿量。【结果】组 别小鼠数组 别小鼠数（只）药物腹腔注药量（只）16100%五苓散水煎醇沉液0.5ml26生理盐水0.5ml3h内尿量（g）【注意点】本实验不能在高温干燥的情况下进行，因尿液挥发量过大会影响实验效果用棉花团吸取尿液时，棉花团上不能沾上大便，以免影响重量。观察时间不得少于2.5h。实验三秦艽对动物急性关节肿胀的影响【目的】观察秦艽煎剂的抗炎症渗出作用。【材料】器材：lml注射器、台秤、软皮尺。药品：100%秦艽水煎醇沉液、新鲜蛋清、生理盐水。动物：大白鼠2只。【方法】1、 皮尺测量法选用体重约150g的大白鼠，称重，标记。用软皮尺测量踝关节的周长，以一踝关节周长为正常值，以量踝关节周长的差为关节肿胀的程度指标。然后，分别腹腔注射100%秦艽水煎醇沉液3ml/kg和生理盐水3ml/kg。30min后再分别给各鼠左踝关节附近皮下注射新鲜的鸡蛋清0.1ml,此后每20min分别测量各鼠关节的周长，再计算肿胀百分率。2、 容积测量法（略）。【结果】取一定量的中药饮片，先用适量清水浸泡24h,然后煎煮1〜2h，滤纸过滤，再加5倍量的95%或无水乙醇，在4°C的冰箱中静置48h,滤纸过滤，自然挥发或水浴蒸发去乙醇，用蒸馏水调成所需浓度，即为水煎醇沉液。实验四溶血性检查试验溶血系指血液中红细胞破裂、溶解的一种现象。许多中草药如：人参、桔梗、远志和甘草等含有其相应的皂苷，可引起溶血。为了保证用药安全，以中草药制成的注射剂（特别是供静脉注射者）通常要做溶血性检查。［目的］学习溶血性实验的基本操作方法［材料］器材：小烧杯竹签（去纤维蛋白用）,试管，试管架，吸管，恒温水浴锅，离心机。药品：柴胡注射液、4%的桔梗煎液、生理盐水动物：家兔1只（供采血用）。［方法］取7支试管，编号，按下表加入各种溶液。第6管不加入供试品，作为空白对照。第7管不加供试品并以蒸馏水代替生理盐水，作为完全溶血对照。轻轻摇匀后置37°C的水浴中保温，1h后观察结果，再离心5min后观察结果。试管123456782%兔血混悬液（ml）2.52.52.52.52.52.52.52.5生理盐水（ml）2.42.32.22.12.02.5蒸馏水2.54%桔梗煎液（ml）0.10.20.30.40.5柴胡注射液（ml）2.537C保温1h后的结果注：1）、2%兔血生理盐水混悬液的配制：取新鲜兔血10-20ml。用竹签搅拌以除去纤维蛋白，然后吸取没有发生凝血和溶血现象的全血2ml，加生理盐水稀释至100ml摇匀即得。2）、4%的桔梗煎液：取桔梗4g，按普通煎煮法制成4%的溶液。结果判断依据：完全溶血：溶液澄明，红色，管底无红细胞残留。部分溶血：溶液澄明，红色或棕色，管底尚有少量红细胞残留。不溶血：红细胞全部沉淀，上层液体物色澄明。凝集：虽不溶血，但出现红细胞凝集，经振瑶后不易分散，或出现药物沉淀。实验五药物半数致死量（LD50）测定【目的】了解测定方法药物半数致死量（ld50）的方法【材料】动物：大白鼠（用前禁食24h）药物：桔梗总皂苷（200%的水溶液）器材：注射器、针头、鼠罐【实验方法】综合计算法目前测定药物半数致死量的方法有多种，如Bliss法、改进寇氏法、简化机率单位法、累积插值法等。其中孙氏综合计算法（改进寇氏法）简化和发展了寇氏法，该法在精确度方面较原法有提高，计算步骤也较简单，经常应用。本法要求下述实验设计条件。1、 每个实验组的动物数目相等。2、 各组剂量要按等比级数安排，组距不宜太大，一般相邻两组的剂量比可取1：0.7~1：0.9。3、 反应情况大致符合常态分布，即0%~50%及50%~100%反应各组的动物数大致相等。4、 反应率包括100%及0%，至少应当有80%以上及20%以下的反应率。5、 按上述剂量给各组大白鼠腔注射。观察每组死亡只数，并当场记录（2h后死亡的动物）。【结果记录】剂量剂量对数每组鼠数死亡数死亡率死亡率平方(ml/kg)XnrPP29.011.3414.1417.6422.04合计Er=EP=EP2=6、计算方法（1） LD50的计算：LD50=log-i[Xm—i（工p—0.5）]（2）LD50的95%可信限（FL）的计算：FL=bg-i（bgLD“±1.96i）工P一"P2）50 50 \n-1式中：Xm:最大剂量的对数；i：