穗花杉树皮中紫杉醇提取工艺的优化

穗花杉树皮中紫杉醇提取工艺的优化

2.4穗花杉醇含量测定根据扫描结果，样品在min.228nm处有一个峰值，表明紫杉醇含有在实践中的海水。用SPSS17.0软件分析得回归方程为:A=0.015C+0.024,相关系数r为0.9998。由HPLC法可见供试品溶液与标准品溶液在相同位置有色谱峰,进一步证明穗花杉树皮中有紫杉醇成分的存在,根据1.2.6.4中的公式可计算出供试品中紫杉醇的百分含量为0.0034%。穗花杉在《中国珍稀濒危保护植物名录》中列为濒危物种。因其形态结构和化学成分特殊,一直受到国内外学者的广泛关注。癌症,已成为严重威胁人类健康的主要病症之一,仅次于心血管疾病。紫杉醇最初是从太平洋短叶红豆杉树皮中提取出来的,是红豆杉属植物特有的次生代谢产物,它是最具抗癌活性的天然化合物之一,也是目前国际市场上最热门的新型抗癌药物,被广泛用于临床治疗癌症,取到良好效果,被认为是最近二十年来天然抗癌领域的重大发现。1材料和方法1.1对照品、色谱检定所U—2800型紫外分光光度扫描仪(日立公司);紫杉醇对照品(批号:100382-200301,中国药品生物制品检定所);穗花杉树皮(采自广东梅州);甲醇(色谱纯,西陇化工股份有限公司);其它试剂皆为分析纯。1.2实验方法1.2.1-碱液洗涤法穗花杉→干燥→粉碎→有机溶剂提取→非极性杂质的去除→碱液洗涤法除杂→活性炭脱色→硅胶柱层析→紫外扫描定性分的→高效液相色谱法测定含量。1.2.2水含量测定参照《中国药典》(2010版)的干燥失重测定法。1.2.3kco3-溶出液制备将穗花杉树皮用微波炉干燥,粉碎成粗粉,称取8g粉末,用冷浸法提取,提取液用正己烷萃取,浓缩,用氯仿溶解,加入等体积1mol/L的K2CO3溶液,搅拌,有机相用K2CO3溶液和蒸馏水分别洗涤,加入活性炭脱色,经无水硫酸钠脱水后浓缩至干,备用。1.2.4供试品溶液配制将干燥提取物用硅胶柱色谱进行分离,以甲醇∶氯仿(3∶97)洗脱液进行洗脱,收集馏分共10份,每份10mL,作为供试品溶液。1.2.5hplc法测定了紫杉醇的含量1.2.5.1.铬条件色谱柱为岛津SHIMPACKVP-ODS250L*4.6,流动相∶甲醇-水(58∶42),检测波长:228nm。1.2.5.2.对照溶液的制备配制0.1mg/mL对照品甲醇溶液,备用。1.2.5.3.试溶液的制备将供试品洗脱馏分装在10mL容量瓶中,干燥,用甲醇定容,即得。1.2.5.4-紫冷醇含量计算公式含量%=(AT×f×n供)/m×100%,f=WS/(n对×AS)。1.3单因素试验1.3.1供试品溶液的制备精确称取穗花杉树皮粉末,每份8g,共四份,分别加入乙酸乙酯∶丙酮(1∶1)、95%乙醇、75%丙酮、95%二氯甲烷这4种提取溶剂,提取时间为10h,料液比为1∶10,提取次数为2次,得供试品溶液。1.3.2提取时间的选择提取次数分别为1、2、3、4次,其它条件同1.3.1。1.3.3材料和溶液比的选择料液比分别为1∶4、1∶7、1∶10、1∶13,其它条件同1.3.1。1.3.4提取时间的选择提取时间分别为2h、6h、10h、14h,其它条件同1.3.1。1.4紫杉醇提取量的测定根据单因素实验结果,采用正交试验进一步考察提取次数、提取溶剂、提取时间、料液比四个因素对紫杉醇提取量的影响,每个因素考查四个水平。因此采用L16(44)正交表进行试验。2结果与分析2.1水含量测定穗花杉树皮的平均水分含量为0.26%。2.2单因素试验2.2.1溶剂提取的选择从测定数据表明95%乙醇的提取率最高,故应选择95%乙醇作为提取溶剂。2.2.2提取时间的选择由测定数据表明提取次数宜选2次。2.2.3材料和溶液比的选择料液比为1∶10时,紫杉醇的提取量最高。2.2.4提取时间的选择最佳的提取时间为10h,随着提取时间的延长,提取量的反而减少。2.3料液比对提取量的影响最佳的实验条件为:提取次数为3,提取剂为75%丙酮,提取时间为2h,料液比为1∶7;影响提