医学实验室评审员持续培训

基因扩增检验专业现场评审方法和技巧医学实验室评审员继续培训/评审组长同级转换培训班上海2021-4-25~26.现场评审的根本思绪基因扩增检验实验室均经过卫生部临床检验中心的技术验收，验收规范又根本参照了ISO15189认可准那么的要求，所以，在评审预备要实验室提供验收合格证书日程安排上不能因经过了技术验收而忽视了PCR实验室的认可重点关注恳求的工程能否都有批文、各项记录能否完善等内容.常见不符合项举例及分析HBV-DNA可报告范围为103－108，HCV-RNA可报告范围为103－107，规范曲线和室内质控的浓度设定都在104以上，建议察看103低浓度值。有一位从事临床基因扩增检验任务人员未获得培训合格证书.分区.现场评审的重要环节检验前程序〔PCR技术验收表6－－标本管理〕－－验收表比较简单，应留意RNA、分泌物等标本的采集、运输和保管检验程序〔见后〕检验后程序〔留意TAT能否满足质量目的的要求；报告单所必需包含的内容〕座谈会〔要了解临床对定量HBV-DNA；性病检测〕.DNA、RNA的保管DNA标本无菌条件2-8℃保管不超越3天，超越3天-20℃。标本长期保管应在-70℃。防止多次反复冻融。DNA在TE缓冲液中〔10mmol/LTris-Hcl，1mmol/LEDTA，PH8.0〕，4℃储存6个月以上，其中EDTA还可抑制微生物生长。RNA容易降解，操作和储存中要防止RNA酶的污染。所用器皿高压灭菌后用，重蒸水配制或用焦碳酸二乙酯〔DEPC〕处置过的蒸馏水溶解RNA，RNA溶液中参与RNA酶抑制剂〔RNasin〕，终浓度为2U/10μl，置-20℃保管备用。冰块上操作为宜。.其他标本棉拭子－－生理盐水充分振荡洗涤、静置5～10min、取上清、离心、沉淀物提DNA。如不立刻提取，存－70℃脓液－－沉淀标本的保管同样为－70℃体液－－沉淀标本的保管同上.

检测系统

校准〔加样器、温湿度计、扩增仪〕－查看文件与实践校准的情况频度：初次〔新安装〕；后续〔主要部件维修，强迫周期如每年，不定期〕PCR仪：温度准确度及升降速率；荧光本底；激发及吸收波长的准确度、杂闪光、反复性、线性.检测系统比对－－没有开展室间质评的工程；比对的结果性能验证－－新启用的设备维护保养－－保养程序、操作手册严厉按照仪器运用手册编写，包括日、周、月、季、半年、年－－标识〔时间、称号〕－－记录.现场评审的关注点检测系统室内质控室间质评溯源及丈量不确定度现场实验人员才干检验前程序察看检验报告生物平安座谈会.室内质控

采用一系列统计学的方法延续地评价检测任务的可靠程度，判别检验报告能否可以发出的过程目的是控制本实验室测定任务的精细度，监测其准确度的改动，提高常规检验任务的批间、批内标本检测结果的一致性室内质控规那么的制定能否合理〔质控图、质控程度、质控频率〕－－每次现场验收问题最多的地方.室内质控质控目的：假阴性、假阳性，准确性、精细度质控点：样本质量、模板提取、扩增效率质控物安排：空白、阴对、弱阳对、规范品控制范围：空白、阴对-------阴性弱阳对-------阳性〔上下一次方〕规范品-------r值〔-0.998〕斜率〔-3.1----3.5〕截距〔﹥40左右；达安﹥30〕点间CT值〔3.3左右〕.如何确定阈值基线的作用〔Baselinecycles〕消除检测中背景荧光信号的影响，确定阈值基线的范围：仪器普通默许的范围〔应根据试剂合要求〕PE-5700、PE-70003-15iCycle2-10LightCycle3-12基线需根据实验结果进展适当调整：延伸基线以包括最高浓度样本扩增曲线起跳前尽能够多的循环，可以使扩增曲线更平滑、数据也得到一定改善。

..阈值线荧光阈值线的调整需根据实验结果进展适当调整1、落在阴性对照线最高点上方2、外规范扩增曲线的均一位置〔点间CT3.3左右〕3、尽量接近扩增曲线刚真正进入指数扩增期的位置〔防止弱阳性漏检以及一些扩增反响影响要素在指数期的放大〕.ThresholdCycleCalculation:BaselinecyclesThroughThresholdPosition21420.8.规范曲线

经过基线和荧光域值线的调整应到达：

相关系数〔r值〕≥0.998斜率-3.0----3.5截距-40±4

〔这些参数根据仪器和试剂有所不同〕.....

室间质评

参与卫生部及省内质评方案原始记录及结果报告室间质评结果分析报告〔假设没有分析报告，应该开察看项还是不符合项？开在哪一条？〕不符合项〔缘由分析及整改措施有效性〕.溯源及丈量不确定度检测系统配置的根本情况溯源性确认的根本原那么不能溯源时，结果可靠性确实认原那么丈量不确定度〔评审把握的尺度、详细举例〕.现场实验现场实验选择的原那么现场实验的方式〔人员比对〕现场实验结果分析和断定盲样实验的根本要求.人员才干评审方式〔查看技术人员档案、提问、现场实验、现场操作〕实际知识〔防污染知识、生物平安知识〕技术才干问题处置〔发现问题、分析问题和处理问题的才干〕

.座谈会座谈的原那么与技巧〔了解、关注临床新技术新进展〕关注的关键问题〔明确几个必问的与专业相关的问题〕.≥100,00010,000-99,999HBVDNA

与肝细胞癌和肝硬化发生危险升高相关REVEAL:长期随访台湾未治疗的HBsAg阳性个体基线HBVDNA(拷贝/mL)患者(%)随访13年累积肝细胞癌的发生率[1](N=3653)504030201001.31.43.612.214.9随访13年累积肝硬化发生率[2](N=3582)4.55.99.823.536.2<300300-9991000-9999<300300-999910,000-99,999100,000-999,999≥1million1.ChenCJ,etal.JAMA.2006;295:65-73.

2.IloejeUH,etal.Gastroenterology.2006;130:678-686..1.000.960.920.880.840.800123456789101112SurvivaldistributionfunctionSurvivaltime(years)HBVDNAHigh(+)RR=9.9(3.2–31.0)HBVDNALow(+)RR=1.8(0.5–5.8)HBVDNA(-)ChenGetal.55thAASLDBoston,Nov2004;Poster2HCC病死率与基线HBV病毒载量的关系.HBVDNALow(+)RR=1.5(0.2–11.8)HBVDNA(-)HBVDNAHigh(+)RR=13.4(1.9–97.1)ChenGetal.55thAASLDBoston,Nov2004;Poster21.000.960