炒酸枣仁生产工艺的验证研究 中药学专业

１前言中药是一类天然药物，来源广泛，自然界的植物、动物和矿物都可以加工为中药，这些药物可能质坚硬粗，可能是混有泥沙等杂质、或者内含有毒成分，因此一般都是要经过炮制加工后才能广泛应用[1]。在中医药科学体系中，中药炮制是重要的制药技术部分，是制药之总称，通常包括炮制和制剂两方面的内容。在中医药理论的指导下，中药炮制按照辨证论治，临床用药的需要和药物本身性质进行的[2]。广义上，炮制是指中药在配方制剂之前的全部加工过程，在狭义上，是指对净药材或饮片进行的加热、加辅料或其他加工处理过程。中药炮制的方法主要有：净制、清炒、鼓炒、醋制、酒制、醋蒸、酒蒸等方法。因为中药炮制的目往往有所不同，通常一种中药可以有多种炮制方法，一种炮制方法也可以同时有几种目的。总而言之，中药炮制的目的主要体现在以下六个方面：1.对药物的毒性或副作用具有降低或消除功能；2.对中药的药性具有缓和作用；3.可以提高或者改变药物作用的部位和趋向；4.使药物的疗效得到增强，便于调剂和制剂；5.对药物洁净程度进行保证，有利于贮藏；6.对药物的服用有利。本论文研究的酸枣仁是鼠李科植物酸枣ZiziphusjujubaMill.var.spinosa（Bunge）HuexH.F.Chou的干燥成熟种子[1]。在初冬或者秋末的时候采收成熟果实，去除掉果皮、果肉和核壳，再把种子收集起来，经太阳晒干。通过研究酸枣仁的炮制历史沿革，发现文献中酸枣仁最早出现在南齊的《刘涓子鬼遗方》一书中，书中写道“白薇散用炒枣仁治疗不眠”[3]。到了南北朝时期《雷公炮製論》有记载“凡使，采得晒干，取叶重拌酸枣仁，蒸半日了，去尖皮了，任研用”[4]。关于酸枣仁炮制去皮尖，我们的祖先最早就已经有所记录了。宋代，出现了大量酸枣仁炒制记载，如《太平圣惠方》中“微炒”、“炒令香熟”，《小儿药证直诀》中要“去皮秤炒”，《太平惠民和剂局方》中“凡使，先以慢火炒令十分香熟，方研破用”[5]。到了元代，《丹溪心法》有记载“酒浸”；《世医得效方》则阐述了“酸枣仁微炒去皮”等。明代除沿用前人炒法，酒浸，蒸製等外，还有出现创新，《普济方》记录了“去皮隔纸炒”、炒令香熟为度，“浸去皮焙”[6]。清代，炮制方法更多样化且应用的辅料种类越来越多，如：《溫熱經緯》有“姜汁炒”，《良朋汇集》有“炒研酒浸”，《幼科释迷》有“蚌粉炒”，《得配本草》有“醋炒醒脾”等等[7]。在炮制時間和程度上，明代《炮炙大法》提出“炒后勿隔宿”，清《本草求真》更进一步地指出了“炒久则油枯不香,碎则气味俱失，便难见功”。“微炒”、“炒黄”、“炒爆”，“炒令香熟”等是对酸枣仁炒制程度的要求，所以在传统炒制酸枣仁的原则上，要求轻炒，微炒至香即可，千万不可以炒得太过，否则则会油枯不香；炒后搁置的时间也不要太长，不然会导致气味的散失，均影响疗效[8]。从上述对酸枣仁的研究历史可以知道，我们的祖先之所以炮制酸枣仁是为了保证睡眠质量，而在众多的炮制方法中，炒制是最早被运用的。虽然在后来的历史中也出现了像蒸制等其它制法，但是都没有炒制运用得广泛，所以在历史上炒制酸枣仁最为深入人心。现今炮制酸枣仁的方法除主流的炒制外，在一些地区还出现了盐制、蜜制、制炭、煨制和朱砂制等。各地各法的特点仍很突出，在炮制工艺、辅料种类、炮制时间等方面都有较大差异。且炮制程度多凭经验掌握，要求不明确[9]。所有这些因素均会影响酸枣仁在临床上应用的疗效。关于炮制程度对酸枣仁疗效的影响，我国历朝历代的祖先在实践中为我们留下了宝贵的理论瑰宝[10]。现代研究结果也表明酸枣仁六炒油枯，失去镇静效力多不同炒制程度（微炒、炒黄、炒焦、炒黑）对酸枣仁的水、乙醇和乙醚提取物都有不同程度的影响微炒或炒黄时酸枣仁有效成分在水和乙醚提取物中会有大的提高[11]。故统一炮制工艺、完善传统质量标准势在必行。本文通过深入探讨炮制机理，改进生产炮制工艺，试验除最佳的工艺参数，为企业大量生产提供参考，以生产处最优饮片，最大程度保证临床用药的安全。2材料与仪器2.1试剂与材料试剂：水合氯醛（分析纯，上海国药集团）；甘油（分析纯，凯诺商贸有限）；甲醇（分析纯AR，深圳天时化工有限公司）；酸枣仁皂苷A对照品，酸枣仁皂苷B对照品；正丁醇；1%香草醛硫酸溶液；石油醚（60-90℃）；斯皮诺素对照品；乙腈；70%乙醇(色谱纯)材料：普通硅胶G预制板（上海一基实业有限公司，批号：20180218，规格：10*10cm）；十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱（北京科益恒达科技有限公司，规格：4.6mm×200mm，5μm）2.2仪器设备检测设备：多功能紫外透射仪（上海光豪分析仪器有限公司，ZF-90B型）；生物显微镜（奥林巴斯BX43）；万分之一天平（SartoriusCPA2235）；高效液相色谱（岛津国际贸易有限公司，LC-20A）三频数控超声波清洗器（KQ-700VDB）；电热恒温水浴锅（齐欣科技仪器有限公司，HWS-26）、超纯水仪（赛多利斯，611D1）。生产设备：QWZL300直线往复式切药机（周口制药机械有限公司）；DWT-2.3-10带式干燥机（常州市一新干燥设备有限公司）；CY-550.900滚桶式炒药机（南京宇盼机械有限公司）；DXDK-620型饮片大剂量全自动包装机（天津滨海立成包装机械制造有限公司）；JJ100Y型中药饮片包装机电子天平（岛津国际贸易有限公司）。2.3药品鉴定药材：酸枣仁鉴定药材（经中国科学院华南植物园华南植物鉴定中心鉴定）。供试品:炒酸枣仁批号：201802021（供试品1）；201802031（供试品2）；201802041（供试品3）；由广东嘉应制药有限公司提供。3方法与结果3.1饮片生产工艺流程根据广东嘉应制药有限公司原有的生产工艺流程，酸枣仁炮制工艺包括粗选、炒制、筛选、包装工序等程序，具体流程见下图1。药材药材检测净制净制杂质含量炒制炒制炮炙温度，炮炙时间筛选筛选选用筛目，杂质含量内包内包外包入库内包材外包材检测图1炒酸枣仁的生产工艺流程3.2饮片生产过程及工艺条件3.2.1净制工序操作：本论文先按批生产指令打印出领料单，然后凭领料单到原料库领取酸枣仁原料，领料员、药材库保管员需要根据领料单的数量领发原料，同时对于出库记录和领料记录要及时填写。领料前，领料员首先要检查原药材包装是否破损、污染，核对下药材品名、批号、等级、数量、质量情况等，一一确认无误后，领料员在领料单上复核签上名，接着将物料领到解包间拆包，装到清洗合格的塑料筐中，先把现场环境清理干净，并将药材原料倾倒置于洁净的工作台上，通过手选挑出杂质后，将粗选的药材推入洁净塑料筐，称重，计算。（见表1）标准：通过以上的操作后，本品含药屑、杂质不得超过2.5%。结果：粗选的杂质含量、收率、物料平衡均符合标准，该工序验证合格。表1粗选检查结果项目指标要求批号201802021201802031201802041药屑、杂质含量不得超过2.5%0.63%0.58%0.62%收率95%以上98.60%99.10%98.80%物料平衡率95%-105%100.00%100.00%100.00%结论合格合格合格合格注：物料平衡率（%）=EQ\F(合格品量+不合格品量+取样量,领料量)×100%收率（%）=EQ\F(合格品量,领料量)×100%不合格品收率（%）=EQ\F(不合格品量,领料量)×100%3.2.2炒制工序操作：取净酸枣仁，按CY-550.900滚桶式炒药机标准操作规程进行操作，将本品以每次约25kg倒入炒药机内，温度105-115℃，锅体旋转翻炒17-23分钟标准：炒至药材微鼓起、有香气，取出，放凉。生糊片含量不过2.0%工艺参数：每次投料约25kg，温度105-115℃，炒药时间17-23分钟。结果：随机取样对其性状进行检查三批药材，均符合标准要求。（见表2）该炒制工序验证合格。表2炒制检查结果项目指标要求批号201802021201802031201802041炒制温度105-115℃110110110炒制时间17-23分钟202020性状微鼓起，表面绿褐色或暗棕色，偶见焦斑，微有香气符合符合符合生、糊片含量不超过2.0%0.5%0.6%0.5%结论合格合格合格合格3.2.3筛选操作：将炒酸枣仁置于洁净工作台上过20目筛筛去药屑，用20目筛筛去药屑，挑去杂质等即可。随机抽取已细选好的中药饮片进行检查，检查炒酸枣仁杂质含量、碎屑情况，并且计算一等品收率、总收率以及物料平衡率。标准：药屑、杂质含量不得超过2.5%。结果：根据筛选结果（见表3），该筛选工序验证合格。表3筛选检查结果项目指标要求批号201802021201802031201802041药屑、杂质含量不得过2.5%0.2%0.2%0.3%收率95%以上97.83%98.38%98.39%物料平衡率95%-105%98.47%99.13%99.60%结论合格合格合格合格3.2.4包装（1）内包装：按照批包装指令领取经检验合格的待包装产品，从包材库领取内包装材料和标签。按照公司规定摆放整齐，操作前首先检查各生产工具及生产设备是否处于正常运行状态，同时要核对包材、批记录及合格证上的批号、生产日期、产地等信息是否与生产指令相符并填写相关复核记录。再将药材倒在工作台上按指定规格使用JJ100Y型电子天平进行称量倒在DXDK-620型饮片大剂量全自动包装机的运输斗上分装成小包装袋。期间，要注意操作环境的整洁，整齐，称量后按连续性封口机标准操作规程对分装好药物的包装袋进行封口，包装袋封口要平整、严密不漏气为合格，最后经QA检查合格后于中包装袋上贴上合格证。（2）工艺参数：封口温度100～125℃，封口速度38～64小袋/分钟；装量：5g*200小袋/包，10g*100小袋/包，15g*67小袋/包。（3）质量要求：印字必须工整、准确、清晰；封口必须密实、无气漏、无皱折。（4）外包装：首先检查内包装封口是否密实，有无出现漏气的情况；标签合格证信息是否正确，符合要求后装进外包装袋，经QA复核无误后进行封口，包装完成，即时送入成品仓库储存。（5）随机抽取封口后的炒酸枣仁内包装袋检查其外观质量、密封性能、重量差异等。检查结果见表8、表9、表10。外观质量：随机抽取包酸枣仁小包装检查其包装封口的密闭性和平整性。密封性能：随机抽检封口后的炒酸枣仁无毒复合膜包装袋检是否漏气。（检查方法：手捏紧3秒无气体泄漏及爆口现象）。检查重量差异、生产现场规范情况、包装材料发放情况、合格证发放情况，并且物料总收率以及包装收率。表4炒酸枣仁包装检查汇总表项目指标要求批号备注201802021201802031201802041外观质量打码内容及标签清晰、平整、准确，封口严密符合符合符合-密封性能密封、不漏气符合符合符合-重量差异符合企业内控标准符合符合符合-物料平衡率95%～105%100.41%100.39%100.43%-包装收率95%以上100.41%100.39%100.43%-生产现场规范合格合格合格-包装材料发放使用规范合格合格合格-合格证发放使用规范合格合格合格-注：包装收率=包装后重量/包装前重量×100%物料平衡率=（合格品重量+废品重量+取样量）/领料量×100%表5炒酸枣仁装量差异限度表标准装量5g10g15g1kg2kg2kg以上装量差异限度±4%±3%±2%±1%±0.5%±0.5%表6炒酸枣仁包装袋规格包装规格小包装袋名称、规格中包装名称、规格1kg——薄绿色6号袋22*19cm5g*200包膜5g14*7.5cm薄绿色4号袋42*29cm10g*100包膜10g14*7.5cm蓝色4号袋42*29cm15g*100包膜15g（3号袋）14*8.8cm薄花色4号袋42*29㎝3.3性状鉴别酸枣仁，又名枣仁、酸枣核、山枣仁，其为鼠李科植物酸枣ZiziphusjujubaMill.var.spinosa（Bunge）HuexH.F.Chou的干燥成熟种子[1]。其成熟果实晚秋至初冬方可采收，去掉果皮果肉和核壳，收集种子，晒干。酸枣树，落叶灌木或小乔木，1～3m高度，有直的和弯曲的刺长在枝节上。酸枣叶互生，形成长椭圆形至蔟状披针形，长度在2～3.5cm之间，宽度在6～12mm之间，钝先端，细锯齿形状的边缘，叶基出三脉[12]。花的颜色为黄绿色，在叶腋下簇生，常成2～3朵；花瓣、花萼及雄蕊均为5出数；子房上位，2室。小核果，近圆形或长圆形，棕红色，味涩，果核两端通常情况下为钝头。花期在4～5月之间，果期有9月。通常在向阳或路旁平原、干燥山坡这些地方生长[13]。道地产区在河北、辽宁和陕西、河南四省。瞢荚果的形状为卵形，长度在2.5～3cm之间，顶端具喙。（见图1-2）图1酸枣植物图图2酸枣果实图经产地加工后的酸枣仁饮片显现为扁椭圆形或扁圆形，5～9mm长，5～7mm宽，厚约3mm。外表颜色为暗红色，表面光滑，其中一些还会出现裂纹。有的一边较平，中央有1条凸起的纵纹；有的两面均呈圆鼓状突起；有的另一面稍突起，一端凹陷，可见线形肚脐。酸枣仁的种皮质地较脆，具有的胚乳，2子叶，浅黄色，富含油性。气微，味淡。炮制后，炒酸枣仁表面微微鼓起，并且有生成少许焦斑。闻之有些许香气，味淡。（见图3-5）图3药材样品（批号201802021）图4药材样品（批号201802031）图5药材样品（批号201802041）表7炒酸枣仁的样品序号品名批号来源1炒酸枣仁201802021嘉应2炒酸枣仁201802031嘉应3炒酸枣仁201802041嘉应3.4显微鉴别拿收集到的3批样品进行实验，并用采集酸枣仁对照药材进行比对于实验。根据收集到的样品3批进行横切面的显微鉴别特征进行描述。把样品粉末用4号筛滤过，再挑取一点于载玻片上，再滴加1～2滴水合氯醛试液，悬空在酒精灯上加热透化，再滴加甘油乙醇试液，盖上盖玻片。挑取一点粉末放载玻片上，滴加甘油醋酸试液1～2滴，盖上盖玻片。置显微镜下观察[1]。本品粉末棕红色，通过检测，三批样品均含有以下显微结构：1.颜色红褐色，多角形形状的种皮栅状细胞，15μm的直径大小，木化，厚壁，但胞腔小；从侧面看，它的外形是长条形，外壁比较厚，而其侧壁，下面偏薄，上面和中间则比较厚；从底面看形状为类多角形或圆多角形。2.种皮内表皮细胞，长方形或类方形，黄棕色，垂周壁连珠状增厚，木化。3.细小草酸钙簇晶和方晶存在于子叶表皮细胞。（见图6-14酸枣仁显微特征）图6种皮栅状细胞表面观（10×40）图7种皮栅状细胞底面观（10×40）图8种皮内表皮细胞（10×40）图9种皮内表皮细胞断面观（10×40）图14子叶表皮细胞（10×40）3.5薄层鉴别3.5.1薄层鉴别方法供试品溶液的制备：取1g本品粉末，加30ml甲醇，进行1h的加热回流，过滤之后收集滤液并将其蒸干，残渣加入甲醇0.5ml，使其溶解，得到供试品溶液；对照药材溶液的制备：以酸枣仁皂苷A对照品、酸枣仁皂苷B对照品，加甲醇，制成混合溶液，规格为每1ml各含1mg，得到对照品溶液；薄层板：普通硅胶G预制板；点样：供试品溶液与材溶液分别点样5μl；展开剂：水饱和的正丁醇；展开方式：上行展开，展距8cm；显色剂：喷以1％香草醛硫酸溶液；检视:置日光下；色谱识别：供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，具有颜色相同的斑点。供试品溶液的制备：取1g本品粉末，加30ml60～90℃的石油醚，接着进行时间为2小时的加热回流，并把石油醚液过滤掉，加30ml甲醇溶液至药渣中，继续加热回流1小时，再次过滤，残渣加甲醇2ml，使其溶解，作为供试品溶液。对照药材溶液的制备：准确称取1g酸枣仁作为对照药材，按照上面的方法制成对照药材溶液。然后再用斯皮诺素对照品，添加甲醇，制成每1ml含0.5mg的溶液，这样就可以为对照品溶液；薄层板：普通硅胶G预制板；点样：供试品溶液与对照药材溶液分别点样2μl；展开剂：水饱和的正丁醇；展开方式：在上行展开，展距为8cm；显色剂：用1％香草醛硫酸溶液喷即可；检视:在紫外光灯（365nm）下检视；色谱识别：在供试品的色谱中，通过观察，结果显示具有一样的蓝色荧光斑点在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上。3.5.2薄层鉴别结果5678910123456789101234图15炒酸枣仁薄层色谱图（日光下）图16炒酸枣仁薄层色谱图（紫外灯光下）注：此为批号201802021的炒酸枣仁薄层鉴别结果：1、2为酸枣仁皂苷对照品；3、4为供试品；5、6为酸枣仁对照药材；7、8为供试品；9、10为斯皮诺素对照品。普通硅胶G预制板（上海一基实业有限公司，批号：20180218，规格：10*10cm）5678910123456789101234图17炒酸枣仁薄层色谱图（日光下）图18炒酸枣仁薄层色谱图（紫外灯光下）注：此为批号201802031的炒酸枣仁薄层鉴别结果：1、2为酸枣仁皂苷对照品；3、4为供试品；5、6为酸枣仁对照药材；7、8为供试品；9、10为斯皮诺素对照品。普通硅胶G预制板（上海一基实业有限公司，批号：20180218，规格：10*10cm）1234567891012345678910图19炒酸枣仁薄层色谱图（日光下）图20炒酸枣仁薄层色谱图（紫外灯光下）注：此为批号201802041的炒酸枣仁薄层鉴别结果：1、2为酸枣仁皂苷对照品；3、4为供试品；5、6为酸枣仁对照药材；7、8为供试品；9、10为斯皮诺素对照品。普通硅胶G预制板（上海一基实业有限公司，批号：20180218，规格：10*10cm）结果：三种批号的药材薄层检测斑点清晰度良好，便于观察，而且样品与对照药材或对照品在对应位置所显示的斑点颜色大体相同，所以检测结果合格。3.6检查水分照水分测定法（中国药典2015年版四部通则8032第一法）测定。结果：实测样品3批，结果为3.86%～5.35%，平均值4.77%（见表9）。根据《中国药典》2015年版四部通则0212要求饮片水分规定不能超过7.0%，所以规定本品水分不得过。表8酸枣仁水分测定数据比较序号批号来源取样（g）水分平均1201802021嘉应10.22333.86%4.09%10.17384.32%2201802031嘉应10.13205.25%5.30%10.22675.35%3201802041嘉应10.12765.04%4.93%10.24214.82%平均值（%）4.77%总灰分照灰分测定法（中国药典2015年版四部通则2302）测定。先将供试样品粉碎，经二号筛过滤后，搅匀之后，在已经经过炽灼之后而达到恒定质量的坩埚中，放入精密称取好的3g样品，慢慢灼烧，在实验过程中应该提高注意，避免操作失误而导致出现燃烧的情况，当炭化完全时，慢慢将温度升高至500〜600℃，使样品灰化完全并至恒重。最后根据残渣的重量就可以计算出样品中总灰分的含量（%)。若样品灰化比较困难，则应该先把坩埚放凉，加热水或者10%硝酸铵溶液2ml，把残渣润湿，然后水浴蒸干，依照前法炽灼残渣，等到坩埚内容物完全灰化。结果：实测样品3批，结果为5.92～6.12%，平均值6.01%（见表10）。根据中国药典2015年版四部通则最大值上浮20%，规定本品的总灰分不能比7.0%高。表9酸枣仁总灰分测定数据比较序号批号来源取样（g）总灰分平均1201802021嘉应10.51086.00%6.00%10.51786.01%2201802031嘉应10.50605.92%5.95%10.51065.98%3201802041嘉应10.49826.12%6.10%10.51456.03%平均值（%）6.01%二氧化硫残留量照二氧化硫残留量测定法（中国药典2015年版第四部通则2331）测定。结果：实测样品3批。结果为0mg/kg，（见表11）根据《中国药典》2015年版第四部通则0212要求，规定本酸枣仁的二氧化硫残留量不能超过400mg/kg。根据药材的来源及长期采集、加工、使用的习惯，并不需要进行硫磺熏蒸处理，而且3批样品检测结果平均值均低于标准规定的百分之十。表10酸枣仁二氧化硫残留量数据比较序号批号来源取样（g）二氧化硫残留量（mg/kg）平均（mg/kg）1201802021嘉应10.01980010.017702201802031嘉应10.02110010.023703201802041嘉应10.02460010.02160平均值（mg/kg）03.7高效液相色谱法测定酸枣仁皂苷A含量测定制备供试品溶液：先对本品粉末进行一个4号筛的筛选，然后进行称重，取约一克，固定好之后放入索氏提取器中，接着添加适量60～90℃的石油醚，进行长达4个小时的回流加热，与石油醚液分离，将药渣挥去溶剂之后转移至锥形瓶中，加入20ml70%的酒精，继续进行2小时的回流加热，滤过之后，用5ml70%乙醇洗涤滤渣，合并并收集所有试液，而残渣则继续添加甲醇至5毫升，过滤之后收集其续滤液就可以得到。制备对照药材溶液：取酸枣仁皂苷A对照品，进行称重，称取适量，接着加甲醇，制成每1ml含0.1mg的溶液，就可以得到；色谱条件：填充剂选择18烷基硅烷键合硅胶；流动相A选择乙腈，流动相B则用水；根据下表中的相关规定进行梯度洗脱；利用蒸发光散射检测器检测。通过对板数按酸枣仁皂苷A峰的计算，板数值应不该要比2000高在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液5μl、20μl，供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定。结果见图21-24。通过对图中数据的分析，可以知道供试品中酸枣仁皂苷A与酸枣仁皂苷A对照品峰保留时间一致，并且与样品中其它组分的分离十分明显。表11流动相比例表时间（分钟）流动相A（%）流动相B（%）0-1520→4080→6015-28406028-3040→7060→3030-3270→10030→0图21酸枣仁皂苷A对照品图22酸枣仁供试品201802021图23酸枣仁供试品201802031图24酸枣仁供试品201802041斯皮诺素含量测定制备供试品溶液：在含量的测定下，选取酸枣仁皂苷A的续滤液作为供试品溶液就可以。制备对照药材溶液：称取适量的斯匹诺素对照品，往其中加入甲醇，制成规格为每1ml含0.2mg的溶液，就能得到；色谱条件：填充剂选取18烷基硅烷键合硅胶；乙腈作为流动相A，水作为流动相B，根据下表中的相关规定进行梯度洗脱；检测波长为335nm。按斯皮诺素峰计算，理论的板数应该比2000要高。分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各10μl，然后注入液相色谱仪，接着进行测定，结果见图21-24。通过对图进行分析，供试品中斯皮诺素与斯皮诺素对照品峰保留时间一致，并且与样品中其它组分的分离也是十分明显。表12流动相比例表时间（分钟）流动相A（%）流动相B（%）0-1012→1988→8110-1619→2081→8016-2220→10080→022-301000图25斯皮诺素对照品图26酸枣仁供试品201802021图27酸枣仁供试品201802031图28酸枣仁供试品201802041根据药典标准：原材料标准：本品依据干燥品来计算，其中含有酸枣仁皂苷A（C15H10O4）的量必须比0.20%高，含有斯皮诺素（C17H14O7）的量必须高于0.080%。炮制品标准：本品依据干燥品来计算，其中含有酸枣仁皂苷A（C15H10O4）的量必须比0.030%高，含有斯皮诺素（C17H14O7）的量必须高于0.080%。含量计算公式(%)=（A样×C对×V）/（A对×m样）×100%含量测定结果见表13：表13炒酸枣仁的含量测定检查表类别成品成品成品成品标准值结论批号201802021201802031201802041——含量测定酸枣仁皂苷0.0386%0.376%0.396%≥0.030%合格斯皮诺素0.092%0.088%0.096%≥0.080%合格结果：酸枣仁皂苷A、斯皮诺素的含量测定结果符合中国药典要求。4结论按《炒酸枣仁生产工艺验证方案》实施后，各项指标均符合验证准。验证的工艺中，炒制温度105℃-115℃，炒制时间17-23min等工艺参数合格，每道工序都符合工艺研究产品质量稳定、可靠，收率也符合工艺标准。5讨论5.1酸枣仁生产工艺验证讨论操作程序、工艺条件和设备使用这三个方面是炒制酸枣仁生产工艺的核心内容，根据炒酸枣仁生产工艺的相关规程、维护保养SOP、相关设备操作、岗位操作SOP、清洁SOP、企业内控质量标准、批生产记录、检验操作规程及记录来制定文件执行的标准。为了证明上述文件方案的工艺条件、设备、操作程序、原药材等是否合格，以及能够生产出符合药典要求的产品，并具有良好的重现性及可行性而进行工艺验证。5.2关于显微鉴别方法讨论在制片的时侯，滴加水合氯醛，同时要盖上盖玻片，盖玻片从一侧轻轻放下，再加热透化，如此可以减少气泡，防止了气泡的干扰，方便观察。涂片时，不宜用太多粉末，否则片太厚，组织重叠，无法辨别观察。应该取米粒大小分量的粉末，制片观察。5.3关于薄层色谱讨论影响色谱结果的一个重要原因在于薄层板制备的好或坏。因此，应该让薄层尽可能地均匀且保持厚度一致，不然展开的时候前沿不整齐，导致色谱的结果不容易出现重复。点样要轻，千万不可以把薄层刺破。混合均匀是配置展开剂的要求，层析的完全失败的一个主要原因就是展开剂混合得不够均匀。展开剂倒入展开缸的量要合适，不能让展开剂前沿上升到底线。否则的话，就不能计算出展开剂上升的高度，也就不能计算出Rf值和不能清楚确定粗产物中各组分在薄层板上的一个相对位置。操作中，喷板后，加热温度不宜过高，也不能加热太久，否则背景色会变深，影响观察。应该看到板上显现出点就停止加热，仔细查看鉴定药材色谱和供试品色谱相应位置有没有颜色相同的点。参考文献[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京：中国医药科技出版社，2015.[2]龚千峰.中药炮制学[M].北京：中国中医药出版社，2016：109.[3]王和平，李艳凤，张晓燕.酸枣仁炮制的历史沿革及现代研究[J].中医药信息，2004(02)：21-23.[4]王朝顺.酸枣仁炮制的历史沿革与现代药理的研究[J].中医药研究，1997，12(04)：57-59.[5]隋利强，马嘉琪，李娜，吴声扬.固相微萃取气质联用分析探讨炮制对酸枣仁挥发性成分影响[J].辽宁中医药大学学报，2017，19(09)：51-54.[6]朱晓钗，刘晓，汪小莉，祝婷婷，等.基于“生效熟增”论探讨酸枣仁炮制方法历史沿革及其镇静催眠作用物质基础[J].中药材，2017,40(08):1991-1995.[7]商利娜，房蕴歌，赵清，田雷，郝丽静.酸枣仁、酸枣叶化学成分与药理作用研究进展[J].医学研究与教育，2017，34(02)：62-69.[8]王文凯.生、炒酸枣仁相伍抗抑郁作用机制及相伍后化学成分变化研究[D].黑龙江中医药大学,2014.[9]高宾，郭淑珍.酸枣仁的炮制加工[J].首都医药，2012,19(09):48.[10]吕锦芳，张正，宁康健.生、炒酸枣仁镇静催眠作用的比较研究[J].中兽医医药杂志，2004(06)：3-5.[11]李晓东，杨培民，齐立红.酸枣仁炮制前后有效成分的比较分析[J].山东中医杂志，1999(05)：33-34.[12]姜传理.酸枣仁加工炮制理论的初步探讨[J].现代应用药学，1996(02)：22-24.[13]孙守祥，胡成俊.酸枣仁药用历史沿革及炮制研究[J].中药材，1993(09)：25-28.[14]YuWang,BoDing,DanLuo,Liu-YuanChen,Yun-LongHou,YiDai,Xin-ShengYao.NewtriterpeneglycosidesfromZiziphiSpinosaeSemen[J].Fitoterapia,2013,90(6):19-22.[15]MingchunZhang,YanqingZhang,JunboXie.SimultaneousdeterminationofjujubosideA,BandbetulinicacidinsemenZiziphispinosaebyhighperformanceliquidchromatography-evaporativelightscatteringdetection[J].JournalofPharmaceuticalandBiomedicalAnalysis,2008,48(5):15-18.[16]Feng-xiangZhang,MinLi,Li-ruiQiao,Zhi-hongYao,ChangLi,Xiu-yuShen,YuWang,KateYu,Xin-shengYao,YiDai.RapidcharacterizationofZiziphiSpinosaeSemenbyUPLC/QtofMSwithnovelinformaticsplatformanditsapplicationinevaluationoftwoseedsfromZiziphusspecies[J].JournalofPharmaceuticalandBiomedicalAnalysis,2016,12(2):23-25.[17]刘世军，唐志书，崔春利，刘红波，梁艳妮，张娱，王梅，古川.酸枣仁化学成分的研究进展[J].西部中医药，2016，29(09)：143-146.[18]谭云龙，孙晖，孙文军，张爱华，王喜军.酸枣仁化学成分及其药理作用研究进展[J].时珍国医国药，2014，25(01)：186-188.[19]武毅，梁敬钰，王德云，刘家国，胡元亮，闵知大.酸枣仁化学成分的研究[A].中国畜牧兽医学会中兽医学分会.中国畜牧兽医学会中兽医学分会2013年学术年会论文集[C].中国畜牧兽医学会中兽医学分会，2013：8-9.[20]李晓东，杨培民，齐立红.酸枣仁炮制前后有效成分的比较分析[J].山东中医杂志，1999(05)：33-34.[21]耿欣，李廷利.酸枣仁主要化学成分及药理作用研究进展[J].中医药学报，2016，44(05)：84-86.[22]陈雯，黄世敬.酸枣仁化学成分及药理作用研究进展[J].时珍国医国药，2011，22(07)：1726-1728.[23]郑晔，钱苏瑜，游自立.酸枣仁药理作用研究进展[J].四川生理科学杂志，2006(01)：35-37.[24]刘魁，陈向民，戎欣玉，李勇，程彦超，梁晓丽.酸枣仁药材的质量标准研究[J].河北科技大学学报，2009，30(02)：103-108.[25]张晓燕.生、炒酸枣仁饮片的质量标准研究[D].黑龙江中医药大学，2004.综述炒酸枣仁炮制工艺的相关研究酸枣仁为鼠李科植物酸枣ZiziphusjujubaMill.var.spinosa（Bunge）HuexH.F.Chou的干燥成熟种子[1]。秋末冬初采收成熟果实，除去果肉和核壳，收集种子，晒干。别名枣仁、酸枣核、山枣仁。其性味甘、酸,平，归肝、胆、心经。具有养心补肝，宁心安神，敛汗，生津等功效[2]。近些年来,随着中药的不断被重视，与中药分析技术的不断发展,国内外众多学者都对酸枣仁的炮制工艺和药理作用开展了极为广泛和深入的研究。本文从酸枣仁的炮制工艺出发,对它的现代研究以及药理作用的进展情况综述。1酸枣仁炮制工艺的研究酸枣仁炮制最早见于南齐刘涓子鬼遗方,其中白薇散用炒枣仁治疗不眠。南北朝刘宋时期雷公炮炙论中有凡使,采得晒干,取叶重拌酸枣仁,蒸半日了,去尖皮了,任研用[2]。这是迄今见到最早关于酸枣仁净制要求去皮尖的记载。到了宋代小儿药证直诀中要去皮秤炒,并且出现了大量炒制要求的记载,如太平圣惠方中微炒、炒令香熟,太平惠民和剂局方中凡使,先以慢火炒令十分香熟,方研破用,女科百问酒浸去壳研等法。元代丹溪心法有酒浸;世医得效方酸枣仁微炒去皮等,出现了用辅料炮制的方法[3]。明本草纲目有用仁,以叶拌蒸半日,去皮、尖,炒仁研汤服的方法。除沿用前人炒法,酒浸,蒸制等法外,明代还有普济方去皮隔纸炒、炒令香熟为度，浸去皮焙[3]。在炮制时间和程度上,明代炮炙大法提出炒后勿隔宿,清得配本草有临时炒用,本草求真则进一步说明炒久则油枯不香,碎则气味俱失,便难见功。炒制程度要求微炒、炒黄、炒爆,炒令香熟等,可见酸枣仁的传统炒制,要求轻炒,微炒至香即可,不可炒过,过则油枯不香;炒后搁置时间也不宜过长,否则气味散失,均影响疗效[4]。以上历史沿革说明酸枣仁最早的炮制方法是炒制,炮制的原始意图是治疗不眠,后人逐渐在炒制的基础上增加了蒸制，加辅料炒，但是沿用得较少,还是以炒制法为主流一直沿用至今。2酸枣仁化学成分的研究2.1酸枣仁的现代炮制研究生、妙酸枣仁都具有镇静催眠作用：有人在制剂中发现，炒枣仁在捣碎和制成煎剂过程中，均具有芳香气味[6]。药理实验证实，酸枣仁对大白鼠无论白天或夜间，正常状态或病理状态下，均可抑制中枢神经系统，呈现镇静催眠现象，经大鼠与小鼠试验无毒性发生，久炒油枯后失去镇静效能，生酸枣仁对大鼠无兴奋作用[7]。用小鼠药理实验分别观察生、妙酸枣仁水煎剂对动物产生的镇静催眠作用，实验结果表明：生、炒酸枣仁对中枢神经系统均呈现镇静安眠和抗惊厥作用，两者之间无显著性差异。作者认为，有关生、炒酸枣仁作用不同，生用醒睡的记载，可能为误传。2.2镇静催眠有效成分的研究据报道，酸枣仁甲醉提取部位分离出六个化合物：三个中性皂贰，二个黄酮及一个酚性化合物阿魏酸[10]。动物实验证明，酸枣仁中镇静催眠作用成分，不仅是皂贰成分，黄酮也是主要成分。将生、炒两种酸枣仁进行热回流提取和冷浸提取，观察每种酸枣仁的两种提取液的薄层层析结果，生酸枣仁和炒酸枣仁无论用热回流提取还是冷浸提取，都含有酸枣皂贰a和b及黄酮贰c和d，也说明生酸枣仁在清炒过程中和热回流提取过程中，有效成分基本没有发生变化[11]。这就为生、炒酸枣仁都具有镇静催眠作用提供了理论根据。2.3酸枣仁妙制程度的研究鉴于生、炒酸枣仁都具有镇静催眠作用，有人曾提出可省去炒制手续，并认为炒后香气挥发，成分损失，不利保管等，建议酸枣仁生用为宜[12]。为了探讨酸枣仁炒制的意义，有人将净酸枣仁分别采用小火微炒，文火炒黄，武火炒焦，武火炒黑与生品等五个样品，研究炒捌程度对酸枣仁乙醚、乙醇、水提取物的影响，结果表明微炒或妙黄时，酸枣仁在水或乙醚中提取物百分含量高，生品水提物较低而乙醚提取物较高，炒焦炒黑水及乙醚提取物均低[]3]。本实验支持酸枣仁炒制的一贯做法，微炒或炒黄后质脆易碎，便于煎出有效成分，增弧疗效。而做为口服散剂，生酸枣仁的功效则不会降低。这与药典中同时收载生、炒两种规格相一致。3酸枣仁主要化学成分与药理作用的研究酸枣仁成分复杂，迄今为止，从酸枣仁中先后分离得到皂苷类、黄酮类、生物碱类、三萜类、甾体类、脂肪酸类、挥发油等化学成分[14]。多样性成分和广泛的药理作用使得科研人员把酸枣仁作为研究的热点，现将酸枣仁的化学成份简要综述如下，为酸枣仁的深入研究提供一些参考，并对以后的研究方向提供思路。酸枣仁总皂苷是其镇静催眠作用的主要活性物质[14]。其对神经细胞、神经递质、受体和睡眠参数均有作用。Zhang等运用微透析技术研究酸枣仁皂苷A对大鼠海马谷氨酸水平的影响。结果显示大剂量的酸枣仁皂苷A可显著拮抗由青霉素钠诱导的海马谷氨酸水平上升，说明酸枣仁皂苷A可影响由谷氨酸(Glu)介导的海马区兴奋性信号通路[15]。Chen等报道酸枣仁皂苷A水解后生成了酸枣仁皂苷元，它可以透过血脑屏障，从而与γ－氨基丁酸(GABA)受体结合位点上的关键残基结合形成氢键从而发挥镇静催眠的作用。Cao等通过脑电图来测定大鼠的睡眠参数，结果显示酸枣仁总皂苷在白天可显著延长总睡眠时间和快动眼睡眠时间(ＲEM)，对非快动眼睡眠时间(NＲEM)没有显著影响，而在夜间可显著延长总睡眠时间和NＲEM，而对慢波睡眠(SWS)和ＲEM无显著影响[18]。酸枣仁总皂苷有多种药理作用，其对循环系统的作用主要包括心肌细胞的保护作用、抗心律失常、改善血液流变学、抑制动脉粥样硬化、降低血压等。黄宜生报道酸枣仁皂苷A通过抑制线粒体信号通路中caspase－3及caspase－9的活性，从而抑制过氧化氢诱导的心肌细胞损伤。张玮等预防性给予急性心肌缺血大鼠酸枣仁总皂苷，发现大鼠心电图S－T段、T波在急性心肌缺血期的抬高的趋势有所改善，同时大鼠心率减慢、心肌梗死面积显著缩小[19]。胡明亚报道腹腔注射酸枣仁皂苷能够降低血清中胆固醇含量以及调理血脂蛋白的构成，从而抑制动脉粥样硬化的形成和发展。张典等研究酸枣仁总皂苷对原发性高血压大鼠血压的影响，其结果表明不同剂量的酸枣仁总皂苷均有明显的降压作用，但差异不显著，与硝苯地平相比起效较慢[20]。酸枣仁黄酮的药理作用酸枣仁黄酮是酸枣仁药理作用的主要活性成分[21]。经研究证实其可明显减少小鼠自发活动，协同戊巴比妥钠的中枢抑制作用，拮抗苯丙胺的中枢兴奋作用，且成一定的剂量依懒性。郭胜民等给小鼠腹腔注射酸枣仁黄酮可减少小鼠的自发活动，增加阈下剂量戊巴比妥钠睡眠动物数和小鼠睡眠时间，显著延长阈上剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间，并能对抗由苯丙胺所引起的小鼠兴奋，验证了黄酮是酸枣仁中枢抑制作用的有效部位。Wang等报道斯皮诺素可显著增强戊巴比妥诱导的睡眠，缩短睡眠潜伏期，并成剂量依赖性。酸枣仁总黄酮有较好的抗焦虑、抗抑郁作用[22]。贺一新等研究结果酸枣仁醇提物中黄酮类成分是抗焦虑的活性成分。杨奕等采用均匀设计法，通过利血平拮抗实验和小鼠强迫游泳实验，筛选出酸枣仁抗抑郁活性组分总皂苷和总黄酮的最佳配伍为:总黄酮17.8mg/kg，总皂苷113.4mg/kg。其他成分的药理作用近年研究表明，酸枣仁催眠、镇静作用的活性成分还包括酸枣仁油，并且不同工艺提取的酸枣仁油的镇静催眠作用均具有等效性。酸枣仁油还有抗炎作用，Al－ＲezaSM等报道，酸枣仁油可使炎症小鼠耳含水量降低，耳肿胀程度减小，可明显抑制由TPA引起的小鼠皮肤炎症反应。酸枣仁生物碱类成分具有抗惊厥作用，可以明显延长小鼠出现惊厥的时间及死亡时间。酸枣仁多糖可促进小鼠淋巴细胞转化，同时明显增加小鼠溶血素抗体水平。此外，酸枣仁中氨基酸与中枢抑制作用有关。小结与展望综上所述，随着新技术和新方法的应用酸枣仁的主要化学成分已较为明确，其镇静催眠、抗焦虑抗抑郁、抗炎、抗惊厥、保护心肌细胞、抗心律失常、改善血液流变学、抑制动脉粥样硬化和降低血压等现代药理学作用也已被证实，并且对一些药理作用的研究已经达到了细胞和分子水平，笔者相信随着技术手段的成熟，临床实验的深入，酸枣仁药理作用的物质基础及作用机制将更加明晰，酸枣仁的临床应用前景会愈加广阔。4酸枣仁质量标准的研究刘魁，陈向民，戎欣玉，李勇，程彦超，梁晓丽等人，通过研究建立了酸枣仁药材的质量标准[24]。对酸枣仁进行性状和理化鉴别,建立了酸枣仁主要成分酸枣仁皂苷A的HPLC含量测定方法，并进行了方法学研究。HPLC测定酸枣仁皂苷A含量的方法具有简便、准确、重复性好的特点。使用“相似度评价软件”进行数据处理,对不同产地的酸枣仁药材进行指纹图谱研究。本标准可有效控制酸枣仁药材的内在质量[25]。参考文献[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京：中国医药科技出版社，2015.[2]龚千峰.中药炮制学[M].北京：中国中医药出版社，2016：109.[3]王和平，李艳凤，张晓燕.酸枣仁炮制的历史沿革及现代研究[J].中医药信息，2004(02)：21-23.[4]王朝顺.酸枣仁炮制的历史沿革与现代药理的研究[J].中医药研究，1997，12(04)：57-59.[5]隋利强，马嘉琪，李娜，等.固相微萃取气质联用分析探讨炮制对酸枣仁挥发性成分影响[J].辽宁中医药大学学报，2017，19(09)：51-54.[6]朱晓钗，刘晓，汪小莉，等.基于“生效熟增”论探讨酸枣仁炮制方法历史沿革及其镇静催眠作用物质基础[J].中药材，2017，40(08)：1991-1995.[7]商利娜,房蕴歌,赵清