植物组培试验方案 组培试验设计与分析

模块三岗位提升

项目六组培试验方案设计任务12植物离体快繁技术任务13组培试验设计与分析任务14植物脱毒技术任务15组培工厂化生产【知识点】

了解组培试验方案设计方法【技能点】会简单分析观察结果

素质要求：培养学生无菌意识、创新意识、团队合作意识和生态环保意识；具有任务执行力，规范操作、注意安全；科学严谨、实事求是的工作态度。任务13组培试验设计与分析一、培养基的选择选择合适的培养基是组培快繁成功的基础。选择合适的培养基主要从以下两方面考虑：一是基本培养基；二是各种激素的浓度及相对比例。预备试验→正式试验→最佳组合培养基配方参观咨询文献检索1.组培信息搜索

为了更好地进行组培试验设计，通常在试验设计前需要大量搜集和分析相关组培信息。一般重点搜集的组培信息有以下几方面：1）组培对象的学名、品种名、商品名；

2）外植体的类型与取材时间、部位；

3）培养基配方；

4）培养条件；

5）培养效果；

6）移栽驯化条件与基质配比等。组培信息搜索后，要对所搜集的材料进行鉴别、分类、组合、排列和编目、确保信息的准确性、系统性和信息搜集质量，为下一步试验设计提供重要依据。2.组培试验设计

常用试验方法主要有单因子试验、双因子试验、多因子试验三类方法。实际顺序是从多因子到单因子。1）单因子试验是指在整个试验中保证其他因子不变，只比较一个试验因子不同水平的试验。这是最基本、最简单的试验方法。2）双因子试验是指在整个试验中其他因子不变，只比较两个试验因子不同水平的试验。常用于选择生长素和细胞分裂素的浓度配比。双因子试验多采用拉丁方设计。见表3。表3双因子试验设计单位：mg/LNAABA1.02.05.0合计平均0.10.52.0合计平均3）多因子试验是指在同一试验中同时研究两种以上试验因子的试验。多因子试验设计由该试验所有试验因子的水平组合构成。此方法主要用于对培养基种类、激素种类及其浓度的筛选。多因子试验方案分为完全方案和不完全方案，实际中多采用不完全实施的正交试验设计。

所谓正交试验是指利用正交表来安排与分析多因子试验的一种设计方法。例如采用4因子3水平9次试验的L9（34）正交试验，可以一次选择培养基、生长素、细胞分裂素、赤霉素等众多因子及其水平（见表4），然后查证正交表组合因子及其水平（见表5）。表4L9（34）正交试验设计单位：mg/L水平因子培养基生长素（IBA）细胞分裂素（BA）赤霉素（GA）1MS0.50.51.02B51.01.02.03WPM2.02.04.0

表5L9（34）正交试验方案单位：mg/L编号培养基生长素（IBA）细胞分裂素（BA）赤霉素（GA）1MS0.50.51.02MS1.01.02.03MS2.02.04.04B50.51.04.05B51.02.01.06B52.00.52.07WPM0.52.02.08WPM1.00.54.09WPM2.01.01.04）逐步增加和逐步排除的试验方法在寻找最佳激素配比时，经常用到这种逐步添加与逐步减少的简单方法。

二、试验数据采集与分析1.试验数据采集在组培过程中，一定要充分利用转接、出瓶等时机，直接调查，采集数据。组培主要技术指标的含义及计算方法见表6-4，组培苗观察与计算的主要内容见表6-5。表6-4

组培主要技术指导指标名称含义计算公式出愈率反映无菌材料愈伤组织诱导的效果愈伤组织=（形成愈伤组织的材料数/培养材料总数）×100%分化率反映无菌材料的分化能力与再分化的效果分化率=（分化的材料数/培养材料总数）×100%污染率大致反映杂菌侵染程度和接种质量污染率=（污染的材料数/培养材料总数）×100%增殖率反映中间繁殖体的生长速度和增殖数量的变化Y=mXnY:年生产量；m:每瓶苗数；X:每周期增殖倍数；n:年增殖周期数生根率大致反映无根芽苗根原基发生的快慢和生根效果生根率=（生根总数/生根培养总苗数）×100%成活率反映组培苗的适应性与移栽消费，一定程度上说明组培与快繁成功的高低成活率=（40天时成活植株总数/移栽植株总数）×100%表6-5

组培苗观察的内容与方法观察阶段观察的内容要点观察方法初代培养外植体变化（形态、结构、颜色）愈伤组织、胚状体或芽萌动时间与数量出愈率、分化率、胚状体或原球茎的诱导率污染率、褐变率等异常现象目视观察、照相、计算继代培养中间繁殖体的长势（生长量、健壮程度等）长相（形态、结构、质地、大小、高度、颜色、位置等）增殖率和污染率、褐变率、玻璃化苗发生率、变异率等异常现象目视、照相、显微观察生根培养根发生时间长势（根生长量、根发达程度等）长相（根长、根数、根粗、根色、位置等）生根率和污染率、畸形根发生率等异常现象目视、照相、显微观察、计算驯化移栽试管苗长势（生长量、健壮程度等）长相（株高、根数、根长、根色、叶数等）驯化移栽成活率壮苗指数变异率等目视观察、计算、试验2.编制组培观察表

观察表在设计上要合理全面，因根据实际情况而定。下表6-6只是做参考。学生可以自己设计。表6-6

组织培养试验观察表（参考）项目名称：

项目组：

观察日期：基础数据CK

接种瓶数

每瓶接种量

处理1

接种瓶数

每瓶接种量

处理2

接种瓶数

每瓶接种量

处理3

接种瓶数

每瓶接种量

试验观察项目与内容试验处理技术指标调查定性观察处理意见污染率出愈率分化率增生率生根率成活率生长与分化情况异常现象1（CK）

2

3

组长签字：

指导教师签字：

3.组培苗观察注意事项（1）准备观察用具。（2）认真观察苗组培苗。要求尊重事实，调查全面、记录完整。（3）最好不要手握封口膜处，以防二次污染。（4）培养瓶最好不要带出培养室。（