不同产地余甘子果汁中多酚、黄酮和多糖含量分析

不同产地余甘子果汁中多酚、黄酮和多糖含量分析

于甘子是蔷薇科植物科的一种杏仁属。截止2002年,我国余甘子野生及栽培林面积大约在60000hm2以上,野生余甘子在福建、云南、贵州、广西等省每年合计产量为10万t。研究表明,余甘果中含有丰富的超氧化歧化酶(SOD)、Vc、多酚类物质及多糖等活性物质,具有抗炎、抗肿瘤、抗突变、抗高血压、降血脂、降血压、保肝等功效,并且已证实,余甘子强烈的抗氧化活性是其生理功能的基础。本文测定了广东和海南产地的余甘子果汁的总多酚、粗黄酮和多糖的含量,并测定了其还原力和自由基的清除能力,分析其活性成分含量与抗氧化活性之间的关系,为余甘子的深度开发提供依据。1材料和方法1.1试剂和试药试样分别购自广东省惠州市及海南省海口市。DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)、氮蓝四唑(NBT)、芦丁(Rutin)购于Sigma公司,其他试剂均为分析纯。1.2实验方法1.2.1余甘果汁的制备称取余甘果样各200g加入50g水打浆,过滤得到余甘果汁。余甘果汁冷冻干燥,并于-4℃下保存备用。干燥粉用体积分数70%乙醇稀释并定溶到10mg/mL。1.2.2活性物质含量的测定总多酚采用Folin-Ciocalteu法测定;总黄酮采用硝酸铝-亚硝酸钠比色法;多糖含量采用硫酸-苯酚法进行测定。1.2.3三氯乙酸分光光度法取1mL样品液,加pH6.6的磷酸缓冲液2.5mL和质量分数1%铁氰化钾溶液2.5mL,混合后在50℃放置20min,加入质量分数10%三氯乙酸溶液2.5mL,4800×g离心10min,取上清液2.5mL,加入2.5mL蒸馏水和质量分数0.1%氯化铁2.5mL,混匀,静置10min,在700nm处测定吸光度。吸光度越高,抗氧化性越好,还原力越强。1.2.4空白吸光值测定样品吸光值(A样品):取1mL样品液,加入1mmol/LDPPH甲醇溶液1mL,室温放置30min,测定520nm处吸光值。以1mL体积分数70%乙醇替代提取液测定空白吸光值(A空白)。DPPH清除率/%=(1-A样品/A空白)×1001.2.5空白吸光值试验样品吸光值(A样品):取0.005mol/L邻二氮菲溶液0.6mL,加0.4mLpH7.4的磷酸盐,0.01mol/L硫酸亚铁溶液0.3mL,0.02mol/LEDTA溶液0.3mL,蒸馏水0.6mL,样品液1mL,体积分数0.1%双氧水0.8mL,37℃保温1h,测定536nm处吸光值。以1mL70%乙醇和0.8mL蒸馏水替代提取液和双氧水测定空白吸光值(A空白),以1mL体积分数70%乙醇替代样品测定损伤吸光值(A损伤)。羟基自由基清除率/%=(A样品-A损伤)/(A空白-A损伤)×1001.2.6样品溶液和吸光值a样品采用核黄素-光-氮蓝四唑体系测定。空白吸光值(A空白):取0.5mLpH7.5的磷酸盐缓冲液,加入0.3mL5×10-5mol/L核黄素,0.25mL0.02mol/L甲硫氨酸,5.1×10-4mol/L氮蓝四唑和1.0mL样品溶剂,再加去离子水定容至5.0mL,40W日光灯照射20min,于560nm处比色。样品吸光值(A样品):取0.5mLpH7.5的磷酸盐缓冲液,加入0.3mL5×10-5mol/L核黄素,0.25mL0.02mol/L甲硫氨酸,5.1×10-4mol/L氮蓝四唑和1.0mL样品溶液,再加去离子水定容至5.0mL,40W日光灯照射20min,于560nm处比色。超氧阴离子自由基清除率/%=(A空白-A样品)/A空白×1002结果与讨论2.1海南栽培品种的得率及总黄酮含量表1为广东和海南两产地的余甘果汁粉得率和活性物质含量的测定结果。从表1可知,不同产地的余甘果汁的活性物质含量差异显著。广东野生品种果粉得率最高,为48.1mg/g,广东栽培品种的得率为40.2mg/g,海南栽培品种的得率最低,仅为39.5mg/g。广东野生果汁的总多酚含量最高,达到(204.15±6.85)mg/g(干物质);海南产地的余甘子果汁总多酚含量最低,仅为(130.60±3.31)mg/g(干物质)(P<0.01)。海南野生品种余甘子果汁的总黄酮含量也最高,达到(81.11±8.67)mg/g(干物质)。广东栽培品种的总黄酮含量最低,为(38.69±0.49)mg/g(干物质)(P<0.05)。多糖含量最高的是广东野生果汁(19.78±1.22)mg/g干物质,最低的是广东栽培果汁(11.03±2.01)mg/g(干物质)(P<0.05)。2.2不同浓度vd不同产地余甘子果汁粉,VC的抗氧化能力比较见表2。表2结果表明,各种余甘子果汁都有较强的抗氧化活性和清除自由基的能力。广东野生余甘子果汁抗氧化活性较高,在浓度为10mg/mL时,其还原力最高,达到1.344±0.14;VC还原力最低,为1.205±0.05;广东栽培余甘子果汁和海南栽培余甘子果汁还原力分别为1.291±0.01、1.210±0.09,均高于同浓度的VC。广东栽培余甘子果汁的DPPH自由基清除力最高,浓度为10mg/mL时,清除率达到(92.09±1.52)%,高于同浓度的VC的清除率(90.67±2.53)%;广东野生余甘子果汁DPPH清除力相对较弱,其清除率为(86.84±11.02)%;海南栽培余甘子果汁DPPH自由基清除力最弱,其清除率为(72.35±13.33)%。广东野生余甘子果汁对羟基自由基的清除力最高,其清除率为(91.50±3.53)%;VC在同浓度下的羟基自由基清除率为(88.32±2.59)%,海南栽培余甘子果汁的羟基自由基清除力最低,其清除率为(84.32±0.77)%;广东栽培余甘子果汁与海南栽培余甘子果汁相近,其清除率为(84.40±4.01)%。对超氧阴离子自由基的清除力最高的是VC,浓度在10mg/mL时清除率为(94.03±9.95)%;广东野生余甘子果汁的超氧阴离子自由基的清除力较VC稍低,其清除率为(92.31±1.30)%;广东栽培余甘子果汁超氧自由基清除力最低,其清除率为(86.00±10.33)%。海南栽培余甘子果汁的超氧自由基清除力稍高于广东栽培余甘子果汁,其清除率为(88.46±10.41%)。2.3黄酮类物质与抗氧化活性的相关性余甘子果汁中总多酚含量与其抗氧化活性之间的相关性分析见图1～图4。从图1～图4可以看出,余甘子果汁中的总多酚含量与其抗氧化活性之间有显著线性相关性,相关系数在P<0.01水平上都>0.9。总多酚含量越高的样品,其还原力值越高,清除自由基的能力也越强。广东野生余甘果汁的总多酚含量最高(204.15±6.85)mg/g,其抗氧化活性相对较高,浓度为10mg/mL时,其还原力为1.344±0.14,羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除率分别为(91.50±3.53)%、(92.31±1.30)%。采用总多酚含量与其抗氧化活性相关性分析的方法,对余甘子果汁中黄酮类物质的含量与其还原力、超氧阴离子自由基、羟基自由基及DPPH自由基清除率的相关性进行分析,结果表明,黄酮物质的含量与抗氧化活性之间的相关性稍差。黄酮物质的含量与还原力、羟基自由基清除力、DPPH清除力及超氧阴离子自由基的清除力的相关系数分别为:R2=0.8248(P<0.05)、R2=0.6696(P<0.05)、R2=0.7542(P<0.05)及R2=0.8304(P<0.05)。虽然在很多植物中黄酮类物质起主要的抗氧化作用,但在余甘子果汁中除了黄酮类还有其他的酚类物质一起组成一个抗氧化体系,协同发挥抗氧化作用。Goshal等人曾报道,从余甘子果实中分离出的2种水解单宁油柑酸A和B有较强的的抗氧化活性。余甘果汁中抗氧化酚类物质的提取、分离及各成分间的协同作用需进一步研究。采用相同的方法对余甘子果汁中多糖物质的含量与还原力、超氧阴离子自由基、羟基自由基及DPPH自由基清除率的相关性分析表明,多糖含量与抗氧化活性之间没有显著的相关性,说明多糖对余甘子果汁的抗氧化能力没有显著的贡献,这与肖湘等人的实验结果不相吻合,原因可能是原料来源不同导致的。余甘子果汁起抗氧化作用的主要是酚类物质,它能够提供活泼的氢质子,有效的清除氧自由基;酚类还能够与过氧化自由基结合成稳定的化合物,阻止了氧化过程中的链锁反应的传播;另外,酚类通过对金属离子络合作用清除自由基。不同余甘子果汁有不同的酚类物质组成,就有不同的抗氧化活性。体现在不同的样品对不同的自由基的清除能力不同。比如,广东野生余甘果汁的总多酚含量最高,其还原力、羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除力都是最强的,广东栽培果汁虽然多酚含量稍低,但其DPPH自由基清除力最高。3广东余甘果汁抗氧化活性分析2.余甘子果汁中含有丰富的生物活性物质。在实验所用的原料中,广东野生余甘果汁的总多酚含量、总黄酮含量和水溶性多糖含量最高,分别为(204.15±6.85)mg