临床微生物学检验：7-不发酵革兰阴性杆菌

不发酵革兰阴性杆菌

Nonfermenters概念：是一大群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧的无芽胞革兰阴性杆菌.一、概述二、铜绿假单胞菌三、嗜麦芽窄食单胞菌、不动杆菌属、产碱杆菌属、黄杆菌属、莫拉菌属和军团菌属一、概述科、属、种繁多。大多是条件致病菌。感染日益增多。一般不发酵葡萄糖，即使发酵，仅产生弱酸,或以氧化形式利用葡萄糖。生化特征相似。初步分群试验为：O/F试验、氧化酶和动力观察（在半固体中不显，多用悬滴法）。在10+个菌属中，最常见是假单胞菌属，在该菌属中以铜绿假单胞菌多见。常见不发酵革兰阴性杆菌的初步分群鉴定二、铜绿假单胞菌

Pseudomonasaeruginosa

（一）生物学性状1、形态与染色：G-b，一端有单鞭毛，运动活泼。有荚膜、无芽胞，临床分离菌株有菌毛。2、培养特性：专性需氧，在普通培养基、血平板、MAC、SS上均可生长，最适温度为35℃，可产生铜绿色水溶性色素与带荧光的水溶性荧光素，β溶血。生姜味。3、是医院感染的常见病源，对多种抗生素耐药。

4、生化反应：分解糖的能力很弱，仅在O/F培养基氧化利用葡萄糖；氧化酶阳性，大多分解尿素。5、抗原构造与分型：O抗原、H抗原、S抗原(粘液Ag)和菌毛抗原等。

6、抵抗力：对理化因素的耐受性较强，耐干燥、紫外线，但不耐热，56℃30min可灭活，1﹪石碳酸，5min即杀灭。O抗原可分为外膜蛋白和脂多糖，前者为保护型抗原，免疫性强，有属的特异性；后者有型的特异性，可有用于分型。（二）临床意义1、分布广泛：自然界和人体2、致病物质：粘附素、多糖荚膜、内外毒素和多种侵袭酶。3、临床感染类型：继发感染为主，条件致病菌。也是医院感染的主要病原菌。人类非发酵菌感染中，假单胞菌占70-80%。（三）微生物检查1、标本采集：常见伤口和烧伤感染的脓液、败血症的血液2、检验程序：脓液，痰液，尿液，血液，粪便血平板，可疑菌落MAC、SS直接涂片G染色涂片G染色生化反应（）3、检查方法：（1）标本直接检查

显微镜检：G-b，绿脓色素鉴别。抗原检测：血清学，噬菌体分型。核酸检测：指纹图谱，PFGE，芯片，PCR等（2）分离培养

血平板：金属光泽，特殊气味，蓝绿色素。MAC：微小无光泽半透明。48h后中心棕绿色。SS:微小无色半透明。类似沙门菌。O/F实验，氧化酶，精氨酸水解、酰胺酶、葡萄糖酸氧化、42℃生长、明胶液化、鞭毛检测等（3）生化鉴定：4.结果分析应结合临床，标本检出率，耐药性等进行分析。其他假单胞菌也可从患者血，尿，痰液等标本及医院环境中分离出来：荧光假单胞菌，恶臭假单胞菌，斯氏假单胞菌。三、嗜麦芽窄食单胞菌P142Stenotrophmomasmaltophilia（一）分类：为窄食单胞菌属。近期发现一个新的菌种。（二）临床意义：临床感染率仅次于铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌，近年有上升趋势，主要引起呼吸道、尿道和伤口感染。（三）微生物特性：革兰阴性短杆菌，一端丛鞭毛，无芽胞，无荚膜。普通培养基上菌落中等大小、光滑湿润、呈黄色。生化反应较特殊，氧化酶阴性，注意与肠杆菌区别。（四）微生物鉴定：1、标本采集：据感染部位采取适当标本，血液标本应先增菌。2、分离培养与鉴定：G-b

1）分离培养：在血平板与普通培养基上生长良好，菌落中等大小、圆形、光滑、湿润，产生不溶血的黄色色素；2）生化鉴定：氧化酶阴性，液化明胶，水解七叶苷，赖氨酸脱羧酶阳性，氧化分解麦芽糖；3）药物敏感试验：含β-内酰胺酶，临床治疗首选磺胺类（TMP/SMZ）、喹诺酮类、环丙沙星等。对亚胺培南（β-内酰胺酶抑制剂）天然耐药。四、其他常见非发酵菌除外假单胞菌属，临床常分离到的非发酵菌还有不动杆菌属、产碱杆菌属、黄杆菌属、莫拉菌属和军团菌属等。（一）不动杆菌属Acinetobacter是一群不发酵糖类，氧化酶阴性，无动力的革兰阴性杆菌，常见菌种有：醋酸钙不动杆菌、鲍曼不动杆菌等。1、临床意义：发病率仅次于假单胞菌属，为条件致病菌。2、生物学特性：G-b（图9-6），不易脱色。专性需氧菌，常成双排列也可链状。3、微生物学鉴定：分离培养（图9-7）与生化鉴定，注意与肠杆菌科的细菌鉴别（因为氧化酶阴性）。Iso15189认可标准化操作血液，尿液，痰等MAC粉红色菌落或血琼脂平板灰白色菌落氧化酶试验阴性仪器鉴定或手工生化鉴定并做药敏试验不动杆菌科（二）产碱杆菌属

Alcaligemes

医院感染的病原菌之一。为革兰阴性短杆菌，有动力，专性需氧，营养要求不高，普通培养基可以培养。氧化酶阳性，不分解任何糖类，除能利用柠檬酸盐和部分菌株能还原硝酸盐外，多数生化反应阴性。正常菌群。临床分离最常见的是粪产碱杆菌（模式菌）。Iso15189认可标准化操作血液，尿液，痰等MAC无色透明菌落，血琼脂平板灰白色氧化酶试验阳性仪器鉴定或手工生化鉴定并做药敏试验产碱杆菌科无动力，产生黄色色素的革兰阴性杆菌。分布广泛，常从食品中检出，引起食物中毒、败血症等，是一种条件致病菌。引起新生儿化脓性脑膜炎。1、生物学特性:G-b，无特殊构造，需氧，氧化酶+，触酶+，磷酸酶+。2、微生物学鉴定：G-b、分离培养、生化（表9-8）。（三）黄杆菌属FlavobacteriumIso15189认可标准化操作血液，尿液，痰等血琼脂平板呈黄色菌落氧化酶试验阳性仪器鉴定或手工生化鉴定并做药敏试验金黄杆菌科（四）莫拉菌属

Moraxella1.分类：

1994年把莫拉菌属归于奈瑟菌科，莫拉菌属又分为莫拉亚属和布兰汉亚属。医学上重要的莫拉菌有9种。今年来，卡他莫拉菌引起的疾病逐年上升。

2.微生物特征：革兰阴性球杆菌，大多有荚膜，专性需氧，营养要求高，在血平板上生长良好，无色，菌落大，不溶血。氧化酶为阳性，触酶阳性，不分解糖类，吲哚阴性，H2S阴性。3.临床意义：是粘膜表面的正常菌群，致病性较低，一般位于呼吸道，较少位于生殖道，偶尔可致全身化脓性感染。

4.微生物鉴定：革兰阴性球杆菌、分离培养与生化试验。Iso15189认可标准化操作血液，尿液，痰等血琼脂平板灰白色菌落，不溶血氧化酶试验阳性仪器鉴定或手工生化鉴定并做药敏试验报告结果（五）军团菌属Legionella1、命名与分类：军团菌属是1976在美国费城举行退伍军人集会期间爆发的不明原因的流行病，以发热、咳嗽为主的呼吸道感染，与会者149人发病，其他人员72人发病，34人死亡。1978年美国CDC及WHO在亚特兰大正式命名为军团杆菌。1994年定为军团菌科，军团菌属。时有新种发现，现有45种，60多个血清型。

2、临床意义：该菌存在于水和土壤中，常经供水系统、溶洞和雾化吸入而引起肺炎型和非肺炎型感染。肺炎型（重症）主要由嗜肺军团菌引起，潜伏期2~10天，除呼吸道症状外还有明显的多器官损害，头痛、发热、伴消化道及神经系统症状及体征，致死率高。3、微生物特征：军团菌属的细菌为革兰阴性杆菌，有动力，专性需氧，同时环境中还需2.5﹪~5.0﹪CO2，最适pH6.4~7.2，最适生长温度35℃，营养要求苛刻，普通培养基、血平板和巧克力平板均不生长，最适培养基是BCYEa（活性炭-酵母浸液琼脂培养基），生长缓慢。4、微生物检验：1）标本采集：根据临床感染部位采取适当合格的标本，病理组织标本和环境污染标本。

2）检验方法：

直接涂片染色镜检：革兰染色意义不大。

分离培养：营养要求苛刻、生长缓慢。需一定湿度，适温为35~37℃，在BCYEa（活性碳-酵母浸液琼脂）上3~5天可形成1~2mm有光泽菌落。污染标本可用选择培养基进行分离培养。

3）免疫学检