樱花的花粉培养

樱花的花粉培养

班级：园艺1102小组：第八组成员：宁鑫、杨兴、严吉、宋明昶、张智伟、李俊华一·研究的目的与意义1.选材的依据

樱花（Prunusserrulata）原产北半球温带环喜马拉雅山地区，在世界各地都有栽培。花每支三五朵，成伞状花序，花瓣先端有缺刻，花色多为白色、红色。花于3月与叶同放或叶后开花。樱花花色幽香艳丽，樱花花朵极其美丽，盛开时节，满树烂漫，如云似霞。

樱花可以做寿司，也具有药用、护肤和观赏等作用。樱花寿司2、采用植物细胞工程方法的依据樱花以嫁接繁殖为主，播种、扦插也可。嫁接一般选用樱桃、山樱桃实生苗作砧木，以优良品种樱花作接穗。主要采用切接，芽接则很少采用。切接在3月进行。选生长健壮的1年生樱花枝条作接穗，剪成长8厘米左右的小段，每段带2-3个饱满的芽。砧木多取山樱花、杏树、樱桃树的实生苗。枝接在春季进行，芽按在秋季进行。嫁接苗约经3-4年，即可移栽、定植。樱花繁殖，以往一般在春季用樱桃作砧木，此法繁殖较费工料费，不适合迅速发展的园林绿化对种苗的大量需求。植物繁殖分二种，一种是营养繁殖，又叫无性繁殖，包括了扦插、压枝、嫁接和分株等四类，其优点是能保持原品种的优良品质，生长快、开花结果早。缺点是数量有限，需一定技术。另一种是种子繁殖，又叫有性繁殖，就是用植物的种子播种。其优点是数量大，繁殖简单。其缺点是易发生变异、生长时间长、开花结果时间慢。而且有的品种不易甚至不会产生种子。当然，科学的发展，使植物的繁殖又有了第三种方法----细胞工程(也分有性与无性二种)，即利用植物的细胞或花粉，用科技手段促使其分裂、生长成苗。3、国内外研究进展自从Guha和Maheshwari(1964)首次报道毛蔓陀罗（DaturaMetelL）花药培养获得单倍体植株以来，花粉培养已成为获得单倍体及纯合体的有效途径。花粉培养是在花药培养基的基础上发展起来的技术。它无论对遗传基础理论的研究，还是对单细胞育种实践以及植物遗传工程，都有重要意义。植物花药/花粉培养历史Guha和Maheshwari（1964）曼陀罗花药培养Nitsch和Norreel(1973)烟草花粉培养（游离小孢子培养）Chu（1973）小麦花粉培养（早期花药培养主要依靠小孢子的自然胚胎发生产生单倍体，能自发形成胚胎发生的基因频率较低，效率极低）80年代后期到90年代期间，花培技术迅速发展。许多作物小孢子培养已经成功。十字花科、麦类、水稻、玉米等。90年代，一些先前被认为是不易进行小孢子培养的基因型也相续成功Konzak(1999)。材料与方法1

材料:植物花药2方法：

1、通过镜检确定花粉发育时期；2、取材、在保湿条件下低温预处理

3、消毒灭菌：在取穗前先将旗叶鞘用70%酒精擦洗一遍。在超净工作台内剥去叶鞘，取出花穗放入10%漂白粉溶液中消毒10分钟，换无菌水洗两次，从颖壳中取出花药，接种到培养基上。培养5天后，花药逐渐变为黑褐色，20天左右花药裂开，从中长出淡黄色的花粉愈伤组织，以后先形成芽后形成根，形成幼苗。材料与方法3、消毒4、接种和诱导培养：将花药接种到的花药培养基上，在适宜的温度下培养。有时需要对花药进行短时间的预培养，然后再转入花药培养基5、分化培养6、加倍7、移栽花药和花粉培养基本流程：预处理花药（物理或生理逆境）收集具胚性小孢子的花药，或离心收集胚性小孢子培养（充足的营养、合适的温光、或条件培养）形成胚状体胚状体转移至固化培养基上”萌发”形成小植株。选择合适的供体植株（F1？）倍性鉴定或染色体加倍花粉培养(一)花粉的分离与纯化

1、自然散落法(漂浮培养散落小孢子收集法) 将花药接种在预处理液或液体培养基上，待花粉自动散落后，收集培养。2、挤压法在烧杯或研钵中挤压花药，将花粉挤出后收集培养。3、机械游离（1）磁搅拌法用磁力搅拌器搅拌培养液中的花药，使花粉游离出来；（2）超速旋切法通过搅拌器中的高速旋转刀具破碎花蕾、穗子、花药，使小孢子游离出来（此法应用最广）。4、小孢子纯化对上述方法获得的小孢子混合物进行分级过筛、梯度离心处理纯化小孢子(二)花粉培养方式1、平板培养花粉置琼脂固化培养基上培养。2、液体培养花粉悬浮在液体培养基中培养，需震荡，以利通气。3、双层培养花粉置固体-液体双层培养基上培养。培养基制作方法：先铺一层琼脂固体培养基，凝固后，在表面加入少量液体培养基。4、看护培养利用花药或花药愈伤组织释放出的活性物质促进花粉小孢子发育。5、微室培养利用小的盖玻片和凹穴载玻片形成微室进行花粉培养6、条件培养基培养利用培养过花药的液体培养基或含失活花药提取物的培养基上培养。花药条件培养基、子房条件培养等。用体积分数1％的12-KI镜检花粉发育时期，用体积分数70％酒精和0．1％升汞消毒后，将不同发育时期的花蕾在4～7℃的低温下处理3～11d后,在超净台上剥离出花药，置于加有少许经细菌过滤器(O．22"m)过虑灭菌的0．3tool·L_1甘露醇溶液的50mI。三角瓶中，用无菌注射器内径轻轻挤压出花粉粒，5000×g离心收集花粉粒后，根据试验要求将收集的花粉粒在0．3mol·L_1的甘露醇中饥饿处理1～3d，用血球计数板调整花粉粒密度到1×104～5×104·mL-1后移入MS+1mg·L一2，4一D+2mg·L一1NAA+0．5mg·L一1KT+i00mg·L-1丝氨酸+800mg·L叫谷胺酰胺+5g·L-1肌醇-+-100mg·L-1马铃薯提取液+3％蔗糖的液体培养基中，(25±1)℃，光照．<300Ix弱光下培养Olympus(AH-2型)显微镜下观察花粉发育动态并做统计和显微照相，每处理设3次重复．所用器皿和培养液均需高压灭菌，试验在无菌操作台上进行．具体操作影响花药诱导频率的因素1．花粉发育时期是影响培养效果的重要因素；2．花