细菌的生长和遗传变异2

考试61.X、γ射线的杀菌机理是什么？2.氧化剂的杀菌机理是什么？3.福尔马林的主要成分是什么？4.乙醇杀菌机理是什么？其最佳杀菌浓度是多少？5.青霉素的抗菌机理是什么？6.直接计数法的特点是什么？有哪些具体方法？4．比浊计数法浊——细菌悬浮液的浊度细菌不完全透光，一定范围内菌溶液的混浊度与菌数量成正比

（1）制标准曲线（OD~No）（2）测菌液浊度，查图表得出细菌数量浊度仪或721分光光度仪（二）间接计数法(活菌计数法)提问：前述方法中计数的不都是活菌，如何分辨菌死活？繁殖提问：细菌繁殖的可见现象是什么？产生菌落（固体培养基培养）、菌液混浊（液体培养基培养）计数原理：一个细菌可繁殖成一个菌落或一群细菌.缺点：慢

分固体培养法和液体培养法无菌水1.

稀释平板计数法—固体培养法第一步：菌样巧妙稀释得到不同稀释度（10-x）菌液菌样被无菌水不同稀释倍率后平板培养图

10-210-3

10-410-5

各取1ml，均匀涂布于冷固体培养基平板上或与温热液态固体培养基混合冷却。第三步：培养稀释度过低，菌落密集无法计数可以计数，但数量过多，费时费力数量合适，统计计算，作为结果数量太少，误差因素太大，不做计数第二步：接种平板每一个细菌会生成一个菌落一般计数平板的细菌生长菌落数以30~300个为宜。第四步：计数细菌数量=？细菌数量=数出的菌落数/稀释度例如：10-5稀释度时菌落数为125个细菌数量=125/10-5=1.25×107个/mL

平板计数法是采用最广的一种活菌计数法如国标法水中细菌总数的测定。注意：作空白及取平行样（2～3组）均值减小误差平均2.稀释液体计数法特点：液体培养、统计学查表计数又称MPN法（或最可能数法）MostProbableNumber例如测定SRB（硫酸盐还原菌，厌氧）的数量提问：能用稀释平板法计数吗？为什么？一般不能，厌氧菌暴露在空气中不能生长（除非厌氧培养箱）对这类菌可以利用它们生长时产生的硫化亚铁黑色特征进行深层隔氧液体培养，按MPN法进行计数。

332010-4

10-5

10-63

10-

10-210-3

10-410-5（1）稀释（2）稀释接种样品在液体表面加一层无菌液体石蜡隔绝氧气，恒温37℃培养14天记录变黑的试管情况（3）培养1ml+9ml培养基提问：为什么有些试管变黑有些没有？稀释程度、取样概率(4)统计－查表－计算

根据不同稀释度变黑试管①统计出数量指标三位数及其中最低稀释度（取变黑的管数最多、稀释度又最低的生长管数，为第一位数字，后面两个稀释度的生长管数后两位数）提问：上例情况而言统计数量是几？②查表表——MPN表32010-4MPN三管法测数统计表水中大肠菌群、铁细菌、硝化菌、亚硝化菌也用这种方法进行数量统计。个菌/毫升细菌最可能数——通过其他精确的计数法，确定的各种数量指标时细菌数量的最可能值上面例子中数量指标“320”对应的细菌最可能数为9.5个菌/毫升，最低稀释度为10-4，折算出样品中菌浓度为

？个菌/毫升。3.薄膜计数法薄膜——微孔滤膜（φ0.45um）（2）滤膜培养膜有菌面冲上原理——膜抽滤（细菌浓缩）+膜平板培养

+

计数（1）抽滤（滤器及膜事先灭菌）（3）统计计数提问：假如测出250个菌落，抽滤了50ml自来水，自来水中菌浓度是多少呢？

250÷50ml=5个/ml自来水样品中的细菌数量=菌落数÷抽滤样品的体积数要求——样品洁净如空气或饮用水。？堵孔、菌太多难以分散提问：如何用活菌计数法测定较脏的水样？减少滤液体积、无菌水稀释(三)重量法提问：已知什么条件通过测定细菌群体重量知道其数量？已知单个细菌的平均重量除法计算细菌的湿重量＝10-15~10-11g/个细胞干重约为湿重的10％~20％。1.干重法方法：含菌水样在105～110℃下进行干燥恒重（本质测水中悬浮物重量MLSS或MLVSS）。悬浮物＝无机物+有机物（包括细菌）提问：如何确定悬浮物中有机物与无机物的量？高温(550℃)灼烧

无机物化学性质稳定，高温下不会分解提问：什么情况下可以直接用悬浮物的重量表示细菌的重量？悬浮物中绝大多数是细菌。（1）悬浮物中绝大多数为细菌时细胞数目=MLSS÷个体细菌的平均干重量离心沉淀滤膜过滤计算105~110℃下进行干燥恒重称重或MLSS悬浮物（2）除细菌外还有大量无机悬浮物时

W无MLVSS挥发性悬浮物＝MLSS

－W无

=细菌群体的干重量细胞数目=

MLVSS÷个体细菌的平均干重量

550℃下灼烧2h称重105~110℃下进行干燥恒重称重MLSS（3）有大量非细菌有机悬浮物时提问：如何测定呢？不能用重量法，应改用其他方法。总体来说重量法方法误差较大，