淫羊藿苷干预关节软骨细胞对NF-κB信号通路表达的影响

淫羊藿苷干预关节软骨细胞对NF-κB信号通路表达的影响南京市中医院骨伤科

钱卫庆

立项依据：国内外研究现状及发展动态分析骨关节炎是一个世界性骨骼健康问题，严重影响老年人寿命和生活质量，目前研究的重心主要基于分析蛋白酶对软骨细胞凋亡及软骨细胞外基质降解的作用方面。其中对于淫羊藿苷抑制软骨破坏，发挥软骨保护的作用已被广泛认可。立项依据：课题组相关研究概况我科前期在江苏省中医药局科技项目及南京市医学科技发展项目的资助下我们就淫羊藿苷促成骨形成机制方面进行了相关的动物及蛋白组学方面的研究，并圆满结题。我科近年来开始就淫羊藿苷对于软骨细胞保护的机理方面开展探索工作。立项依据：前期研究及相关文献查阅1.在呼吸系统方面、心血管疾病方面，已有大量试验发现淫羊藿苷可以抑制NF-κB通路的活化，达到抑制炎性细胞因子表达的作用[1-2]2.在骨科疾病方面，大量研究证实NF-κB信号通路与OA形成与发展具有密切的联系。

NF-κB首先是由于细胞外刺激，通过细胞内的级联反应，最终导致软骨降解和关节损伤[3]3.穿心莲内酯能够通过抑制NF-κB信号通路的激活，显著地下调IL-1β刺激人关节软骨细胞，降低MMP-3/13等多种炎性介质的表达［4］

[1]杜文静；补肾中药组分淫羊蕾昔对哮喘小鼠嗜酸粒细胞凋亡的影响[d];复旦大学;2011年[2]CHENSR，XUXZ，WANGYH，etal．IcariinDerivativeInhibitsInflammationthroughSuppressionofp38Mitogen-ActivatedProteinKinaseandNuclearFactor-BPathways［J］．BiolPharmBull，2010，33(8):1307-1313．[3].周庄，张柳等NF-κB信号通路在骨性关节炎发生发展中作用机制的研究［J］．中国骨质疏松杂志，2012，18(1):78－82．[4].DingQH,JiXW,ChengY,etal.inhibitionofmatruxmetalloprteinasesandinduciblenitricoxidesynthasebyandrographolideinhumanosteoarthriticchondrocytes[J].modRheumatol,2012Dec15.立项依据：前期研究及相关文献查阅4.uPA系统是NF-κB的下游调控因子，NF-KB在炎症过程中被激活后,进入细胞核内发挥转录活性,可上调uPA的表达［5］5.uPA和uPAR（uPA受体）在关节软骨病变的表层表达最为强烈,并且uPA和uPAR的水平与关节软骨破坏的严重程度呈正相关性［6］[5].MarcuKB，OteroM，OlivottoE，NF一kappaBsignaling:multipleanglestotargetOA.CurrDrugTargets，2010,11(5):599一613.

[6].张立智，张先龙，王琦，等．骨关节炎软骨下骨的成骨细胞生物学表型研究［J］．第三军医大学学报，2011，33(10):1003－1007．此次试验推测NF-κB信号传导示意图：立项依据：前期研究及相关文献查阅NF-κB通路uPA系统细胞外基质降解OA假设：淫羊藿苷干预软骨细胞的过程中，淫羊藿苷是否也可以通过抑制NF-κB通路的活化，抑制炎性细胞因子表达，从而达到保护软骨细胞作用？同时，在抑制NF-κB通路的活化后，是否对下游调控因子uPA系统产生影响，而进一步达到抑制蛋白酶对软骨细胞外基质的降解，起到保护关节软骨的作用？立项依据：本课题科研假设立项依据：前期研究工作基础我们之前在淫羊藿苷对大鼠成骨细胞蛋白质组学影响的研究中发现10ng.ml-1

浓度的淫羊藿苷能快速促进SD大鼠成骨细胞的增殖和分化[7]。[7].钱卫庆，尹宏，孙海涛。不同浓度淫羊藿苷对大鼠成骨细胞增殖、分化的影响,《中国医药导报》2011,36:23-25。前期研究：Icariin干预OB后细胞增殖情况研究方案：实验分组及干预原代成骨细胞传代24小时后分为5组:(1)空白组:

10%IMDM正常培养;(2)PDTC组：加入0.5mmol/LNF-κB阻滞剂PDTC(3)淫羊藿低剂量组:加入0.1mg/mL淫羊藿苷(4)淫羊藿中剂量组:加入1mg/mL淫