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文档简介

选修三重要知识点整理第一章基因工程1.限制性核酸内切酶(限制酶)主要从原核生物(用于切割外源DNA,保护自身)中分离纯化出来,识别序列由6个核苷酸(或4、5、8个)组成。末端种类:平末端和黏性末端2.DNA连接酶效率低3.运载体(1)作用:①作为运载工具,将目的基因转移到宿主细胞内。②利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。(2)种类:质粒、λ噬菌体的衍生物和动植物病毒等。(3)条件:①有一个或多个限制酶切位点②能自我复制③有标记基因(4)一般来说,天然载体往往不能满足人类的所有要求,因此在基因工程中,对某些天然的载体进行人工改造。4.基因工程中形成的重组DNA是DNA分子片段的连接,而不是合成DNA分子或转录合成mRNA的过程5.DNA连接酶:不需要模板DNA聚合酶:需要模板DNA复制时都形成磷酸二脂键6.基因操作程序:Ⅰ获取目的基因Ⅱ构建表达载体(核心)Ⅲ导入受体细胞Ⅳ目的基因的检测与鉴定Ⅰ获得目的基因(1)基因组文库(所有的)部分基因文库(部分的),如cDNA文库(2)PCR技术扩增目的基因原理:DNA复制指数方式增加需要:模板DNA,原料(游离的四种脱氧核苷酸),引物,DNA聚合酶(3)人工合成(基因较小)化学合成:DNA合成仪(已知序列)反转录法:未知序列Ⅱ构建表达载体(核心):目的基因、启动子、终止子、标记基因Ⅲ导入受体细胞(1)植物细胞农杆菌转化法:双子叶植物、裸子植物的体细胞或受精卵基因枪法花粉管通道法(2)动物细胞:显微注射技术受体细胞:受精卵(a含有目的基因表达所需的物质;b具有全能性)(3)微生物细胞:原核生物(繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少)作为受体细胞大肠杆菌:Ca2+处理细胞(感受态细胞)Ⅳ目的基因的检测与鉴定1)检测:DNA分子杂交技术(原理:碱基互补配对)①目的基因作探针②转录出mRNA③翻译成蛋白质:抗原抗体杂交2)鉴定:个体生物学水平7.逆转录形成的目的基因不含内含子原因:mRNA形成时切掉了内含子转录的RNA内含子:能转录不能翻译外显子:能转录能翻译真核生物基因编码区:内含子和外显子原核和真核生物的非编码区:对遗传起调控作用(启动子和终止子)8.植物基因工程技术①提高农作物的抗逆能力②改良农作物的品质③利用植物生产药物9.杀虫的基因:Bt毒蛋白基因(我国转基因抗虫棉)、蛋白酶抑制剂基因、淀粉酶抑制剂基因、植物凝集素基因10.病原微生物:病毒、真菌、细菌等。11.转基因玉米:赖氨酸含量比对照提高30%12.动物基因工程:导入生长素基因---提高生长速度导入肠乳糖酶基因---改善畜产品品质生产药物---乳腺生物反应器或乳房生物反应器优点:易提取、产量高、质量好、成本低转基因动物作器官移植的供体优点:抑制抗原基因的表达、或除去抗原决定的基因、无免疫排斥反应13.工程菌第一种基因工程药物---重组人胰岛素细胞因子、抗体、疫苗、激素等。我国生产:白细胞介素-2、干扰素(糖蛋白,为我国第一个批量生产的药物)、乙肝疫苗14.体外基因治疗和体内基因治疗:都处于初期临床试验阶段15.基因工程是在两个物种间转移基因,克服了两个物种间由于生殖隔离不能进行基因交流的障碍,能定向培育生物新品种。16.基因重组:1)有性生殖时:非等位基因的重新组合2)DNA的拼接技术---基因工程17.基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质18.蛋白质工程:第二代基因工程基因修饰或基因合成第二章细胞工程1.植物的组织培养离体的组织、器官或细胞愈伤组织植物体2.植物体细胞杂交技术生殖方式:无性生殖脱分化再分化外植体固体培养基营养:蔗糖、矿质元素(无机盐)激素:生长素、细胞分裂素(也有赤霉素)注:愈伤组织之后需要给予光照条件原理:植物细胞的全能性去除细胞壁的方法:酶解法(纤维素酶和果胶酶)诱导原生质体融合的方法:物理法:离心、振动和电激化学法:聚乙二醇(PEG)生长素含量>细胞分裂素:诱导脱分化和根原基形成生长素含量<细胞分裂素:诱导再分化和芽原基形成

一、植物细胞工程杂种细胞形成的标志:生成新的细胞壁植物体细胞杂交的原理:细胞膜的流动性、植物细胞的全能性意义:克服不同物种远缘杂交的障碍3植物细胞工程的应用(1)微型繁殖意义:保持亲本优良性状、快速繁殖(2)作物脱毒取材部位:茎尖、根尖(分生区)(3)人工种子:由胚状体和人工种皮(营养物质、杀菌剂)(4)单倍体育种(5)细胞产物的工厂化生产例如:从愈伤组织中提取紫草素二、动物细胞工程(一)动物细胞培养1、过程:原代培养幼龄动物的组织块分散成单个细胞细胞悬液细胞贴壁接触抑制胰蛋白酶或胶原蛋白酶胰蛋白酶或胶原蛋白酶传

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