20种杀菌剂对蛀球孢菌褐斑病的抑制作用

20种杀菌剂对蛀球孢菌褐斑病的抑制作用

棕榈树是中国冷季草坪最常见、最严重的疾病之一。它也是茎叶属植物科最严重的夏季疾病之一。褐斑病爆发时会引起果岭草坪大面积死亡,是高尔夫球场草坪质量管理中最大的难题之一。草坪褐斑病是一种土传真菌病害,主要由立枯丝核菌Rhizoctoniasolani引起。迄今为止,立枯丝核菌已鉴定出12个菌丝融合群,Blazier和Conway的研究发现感染褐斑病的不同草种其立枯丝核菌融合群有明显的差异,Kataria等的研究指出不同的立枯丝核菌融合群对杀菌剂的敏感性也不同。致病菌的这些差异给草坪褐斑病的有效防治带来了一定的困难。早在1917年国外就开始对草坪褐斑病进行防治研究,在生态防治、化学防治及生物防治等方面均有过一些报道[5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15]。国内有关草坪褐斑病的研究相对较少,尚缺乏能够显著控制褐斑病危害的有效药剂,仅有的几篇褐斑病药剂筛选研究也都是针对高羊茅Festucaarundinacea、草地早熟禾Poapratensis等园林绿化草种,针对匍匐翦股颖草坪褐斑病的药剂筛选还未见报道。从感染褐斑病的匍匐翦股颖果岭草坪上分离出立枯丝核菌,采用生长速率法比较了20种不同类型杀菌剂对该致病菌菌丝生长的抑制效果,旨在筛选出抑菌效果显著的杀菌剂,为我国匍匐翦股颖草坪褐斑病的有效防治提供理论依据。1材料和方法1.1试验材料1.1.1试验剂采用的20种杀菌剂情况见表1。1.1.2黄瓜片的制备2005年9月从上海交通大学实验农场沙坪果岭已感染褐斑病的匍匐翦股颖植株上分离出立枯丝核菌。具体分离方法:从匍匐翦股颖上采集感病严重的病叶,冲洗净表面沙土后,于病健交界处剪取5mm长的小段,用75%酒精表面消毒3次,无菌水冲洗3遍,洗净。移植到无菌的黄瓜片上,置于培养皿中25℃下保湿培养。24h后将新长出的菌丝尖段转接到CMA培养基(玉米粒60g煮沸1h后,定容到1000mL;琼脂18~20g溶化,121℃下常规高压灭菌20min)上纯化。再将纯化后的真菌转接到PDA培养基上,25℃恒温培养,经柯赫氏证病律证实后,备用。1.2试验计划和方法1.2.1含药培养基平板的制备将表1中的20种供试药剂按照各自的推荐的质量浓度(见表2)配好后,加入熔融状态的水琼脂培养基制成含药培养基平板(1mL药剂∶20mL培养基)。切取PDA平板上的菌落边缘菌饼(直径为4.62mm),移接至含药培养基(直径为96.10mm)中央。每处理重复3次,设无药培养基(直径为96.10mm)为对照。25℃下恒温培养,观察。1.2.2质量浓度筛选将药剂筛选中抑菌效果显著的杀菌剂分别设4个质量浓度梯度,比较不同质量浓度下的抑菌效果以确定适宜的用药质量浓度。具体操作同上。1.3药剂相对抑菌率测定接种后将各处理在25℃条件下恒温培养7d,待对照培养皿中的菌丝长满时,采用十字交叉法测定各处理的菌落直径,计算菌落的净生长量及药剂的相对抑菌率。净生长量=培养后菌落直径-接种菌饼直径相对抑菌率=对照菌落直径−处理菌落直径对照菌落净生长量×100%=对照菌落直径-处理菌落直径对照菌落净生长量×100%运用SAS6.12统计分析软件对试验数据进行方差分析,并采用邓肯氏新复极差法检测各处理间的差异显著性。2结果与分析2.1抑菌率:100%以上,抑菌率共产生2.推荐质量浓度下,参试的20种杀菌剂对立枯丝核菌的抑制效果间存在不同程度差异。杀毒矾、腈菌唑、丙环唑的抑菌效果最好,抑菌率均达到100%。退菌特、三唑酮、百菌清、腐霉利、克露、金雷多米尔等药剂也表现出较好的抑菌效果,抑菌率都在92%以上。甲基托布津、农用链霉素、嘧菌酯、安克、普力克、毒克、井岗霉素、多菌灵、菌立停、敌克松的抑菌效果相对较差,抑菌率显著低于杀毒矾、腈菌唑、丙环唑等杀菌剂(表2)。2.2克露、转变及其他双溶剂对枯丝核菌的抑菌效果除百菌清外,其他参试药剂的抑菌效果均随药剂处理质量浓度增加而提高。丙环唑在最低处理质量浓度(6mg/L)时抑菌率仍高达100%,表现出极强的抑菌效果。杀毒矾质量浓度在38mg/L、腈菌唑在7mg/L以上时的抑菌率也都达到100%,但低于这2个质量浓度时,抑菌率均下降至96%左右。因此,丙环唑、杀毒矾、腈菌唑对立枯丝核菌的最佳抑制临界质量浓度可分别暂定为6、38和7mg/L。克露和金雷多米尔这2种药剂在最高质量浓度处理下(克露86mg/L、金雷多米尔81mg/L),抑菌率也可达到了100%。但随着药剂质量浓度的下降,抑菌效果也显著下降。克露29mg/L、金雷多米尔27mg/L时的抑菌率分别只有76.3%和58.9%。在本测试质量浓度范围内,其他杀菌剂的抑菌率都未达到100%(表3)。3药剂的筛选和最佳质量浓度的确定国内对草坪褐斑病的防治报道较多来源于绿化草坪管理中的一些经验总结,也曾在高羊茅、草地早熟禾等绿化草种上做了一些褐斑病的药剂筛选和防治试验,但是尚缺乏完整、系统的研究报道。钱振官等通过室内与田间药效试验,认为百菌清、多菌灵对高羊茅褐斑病有较好防效,严巍等通过田间药剂防治,认为宝草津、力克菌、敌力脱、甲基托布津等是防治高羊茅草坪褐斑病的较好药剂,但晁龙军的研究认为百菌清对褐斑病的防效较差,季延平、周庆椿则认为多菌灵对草坪褐斑病的防治效果极差;蒋家珍、赵美琦等用14种杀菌剂对立枯丝核菌进行了毒力测定,结果认为甲基托布津和金雷多米尔对致病菌具有很强的毒力,但季延平的研究则认为甲基托布津对立枯丝核菌的毒力极差,只有7.6%。这些相互矛盾的研究结果可能是由不同研究中立枯丝核菌融合群的差异引起的,文献记录不同草坪草种感染的立枯丝核菌融合群有明显的差异,不同的立枯丝核菌融合群对杀菌剂的敏感性也不同。因此,必须针对特定草坪草种的致病菌进行广泛的药剂筛选,才能有效地控制我国草坪褐斑病的严重危害。本研究综合比较了20种杀菌剂的室内抑菌效果后发现,在杀菌剂的推荐质量浓度下,杀毒矾、腈菌唑、丙环唑、退菌特、三唑酮、百菌清、腐霉利、克露、金雷多米尔9种杀菌剂对立枯丝核菌菌丝的生长有较强的抑制作用,抑菌率均在92%以上,显著高于其他参试药剂。其中,杀毒矾、腈菌唑和丙环唑的抑菌效果最好。腈菌唑对立枯丝核菌菌丝生长的抑制研究尚属初次报道,通过进一步的田间药效验证后,可能会成为防治匍匐翦股颖褐斑病的有效药剂。随着杀菌剂质量浓度的下降,几乎所有药剂对立枯丝核菌的毒力都有所下降。通过本试验的有效质量浓度筛选,可以初步确定丙环唑、杀毒矾、腈菌唑3种杀菌剂为防治匍匐翦股颖褐斑病的高效药剂,室内抑菌最佳临界质量浓度分别为6、38和7mg/L。研究中三唑类药剂(丙环唑、腈菌唑、三唑酮)对立枯丝核菌均表现出很强的毒力。另外,杀毒矾(恶霜灵和代森锰锌)、退菌特(福美双、福美锌、福美甲胂)、克露(霜脲氰和代森锰锌)、金雷多米尔(精甲霜灵和代森锰锌)等复配药也表现出很好的抑菌效果。本研究结果为大田验证提供了用药依据。传统的药剂防治采用的是化学药剂,其极高