诊断课件：溶血性贫血检查完整版

贫血检查

(Anemia)贫血的概念

贫血是指循环血液的血红蛋白量、红细胞数和红细胞压积低于正常的病理状态。正常人的各项血液正常值:Hbg/LRBC×1012/LHCT成年男性120~1604.0~5.50.40~0.50L/L成年女性110~1503.5~5.50.37~0.48L/L新生儿170~2006.0~7.0贫血的分类1.形态学的分类2.病生学的分类正常细胞性80~10027~3432~36再障,急性失血性,溶贫血血性,骨髓病性贫血大细胞性贫血>100>3432~36巨幼细胞性,恶性贫血小细胞低色素<80<27<32缺铁性,铁粒幼细胞性性贫血单纯小细胞性<80<2732~36慢性感染,炎症,肝病,贫血贫血分类MCVMCHMCHC病因

(fl)(pg)(%)贫血的形态学分类红细胞产生的减少

再障、MDS、缺铁性贫血、巨幼贫、慢性病贫血等红细胞破坏或丢失增加

（溶血性贫血）贫血的病生学分类溶血性贫血检查

(HemolyticAnemia)

本课重点１.溶血性贫血定义２.溶血性贫血分类３.溶血性贫血常用筛查试验（游离血红蛋白的检测、含铁血黄素尿试验）４.溶血性贫血几种特殊检查（红细胞渗透脆性试验、红细胞孵育渗透脆性试验、抗人球蛋白试验、酸化溶血试验、蔗糖溶血试验）

溶血性贫血定义:

指各种原因导致红细胞生存时间缩短，破坏增多或加速，而骨髓造血功能不能相应代偿而发生的一类贫血。

红细胞破坏过程（溶血部位）

血管内溶血包括｛

血管外溶血

溶血部位分类血管内溶血:

指受到严重损伤的红细胞,直接在血循环中破坏。*红细胞严重受损*破坏在血管内*多见于获得性红细胞损伤

溶血部位分类血管外溶血：

红细胞破坏发生在脾肝或骨髓中的单核-巨噬细胞内。*异常红细胞（主要为内在缺陷）*脾*肝}巨噬细胞中破坏*骨髓*多见于先天性细胞缺陷

溶血病因分类

红细胞内在缺陷分类｛

红细胞外在因素

溶血病因分类红细胞内在缺陷

代表性疾病膜：

１.遗传性球形红细胞增多症２.阵发性睡眠性Ｈb尿（ＰＮＨ）酶：

１.Ｇ６ＰＤ缺乏症２.ＰＫ缺乏症Ｈb：

１.海洋性贫血２.异常Ｈb病

溶血病因分类红细胞外在因素损伤

免疫性非免疫性１.自身免疫性溶贫１.物理因素２.新生儿溶血２.化学因素３.输血后溶血３.生物因素４.药物免疫性溶血４.脾功能亢进５.其他：ＳＬＥ淋巴瘤

溶血发病机制分类

先天性／遗传性溶血（主要见于红细胞内在缺陷）｛获得性溶血１.免疫性溶血

}主要见于红细胞外

在缺陷２.非免疫性溶血３.获得性红细胞膜缺陷（如ＰＮＨ）溶血性贫血的诊断步骤及临床思维病史

贫血、黄疸

网织红细胞计数增加

溶血可能

寻找溶血证据（结合珠蛋白测定、血清胆红素、尿胆原、尿胆红素、Hb尿、Rous试验、骨髓涂片）

血管内溶血

确定溶血病因

血管外溶血

溶血性贫血共性检查1.血象和骨髓象变化2.血液生化改变3.尿液改变4.红细胞寿命缩短.

溶血性贫血常用筛查试验1.血浆游离血红蛋白的检测2.血清结合珠蛋白检测3.血浆高铁血红素清蛋白检测4.含铁血黄素尿试验5.红细胞寿命测定

血浆游离血红蛋白的检测

［原理］

联苯胺在酸性溶液和过氧化氢内,能受Hb催化，发生氧化作用，产生一系列颜色反应，绿色→蓝色→紫红。颜色的深浅用光电比色计检测或用已知浓度的Hb来检测其量。

血浆游离血红蛋白的检测

［参考值］〈50mg/L［临床意义］１.血管内溶血时血浆游离血红蛋白↑↑２.

自身免疫性溶血性贫血，珠蛋白生成障碍性贫血可轻度↑。３.血管外溶血时阴性。含铁血黄素尿试验（Ｒous） ［原理］

铁离子在酸化的低铁氰化钾溶液中生成蓝色的亚铁氰化铁，即普鲁士蓝反应。［参考值］阴性［临床意义］１.在溶血初期阴性。２.慢性血管内溶血可呈现阳性，并持续数周,如ＰＮＨ

血清结合珠蛋白检测 ［原理］血清结合珠蛋白(HP)具有与Ｈb结合形成复合物的特性。将待测血清与Hb溶液混合作用后，可用电泳法将HP-Ｈb与多余未结合Ｈb分开，测定HP-Ｈb中的Ｈb的量，用以代表HP的含量。［参考值］0.7-1.5g/Ｌ

血清结合珠蛋白检测 ［临床意义］１.各种溶血时HP↓甚至可测不出。２.传染性单核细胞增多症，先天性无结合珠蛋白血症↓甚至可测不出。３.肝细胞病变↓↓，肝外阻塞性黄疸↑。４.感染，创伤，恶性肿瘤，红斑狼苍，糖皮质激素治疗，口服避孕药，可↑

血浆高铁血红素清蛋白检测［原理］

生化法为高铁血红素清蛋白能与硫化铵形成铵血色原，光谱仪观察在５５８nm处有一吸收带。电泳法为醋酸纤维膜电泳，出现一条高铁血红素清蛋白区带。［参考值］阴性［临床意义］阳性表示为严重血管内溶血

红细胞寿命测定 ［原理］用51Cr标记红细胞检测红细胞半衰期［参考值］２５-３２天［临床意义］１.溶血性贫血时常小于15天。２.这是确定溶血性贫血的可靠方法。溶血性贫血特殊检查1.红细胞膜缺陷的检测

2.红细胞酶缺陷的检测3.珠蛋白生成异常的检测

4.自身免疫性溶血性贫血检测

5.

阵发性睡眠性血红蛋白尿症检测

红细胞膜缺陷的检测㈠红细胞渗透脆性试验㈡红细胞孵育渗透脆性试验㈢自身溶血试验及纠正试验

红细胞膜缺陷的检测㈠红细胞渗透脆性试验［原理］：红细胞在低渗氯化钠溶液中细胞逐渐膨胀甚至破裂而出血，红细胞渗透脆性试验时测定红细胞对不同浓度低渗氯化钠溶血的抵抗力，即红细胞的渗透脆性。［参考值］：开始溶血：0.42%-0.46%NaCl溶液完全溶血：0.28%-0.34%NaCl溶液

红细胞膜缺陷的检测㈠红细胞渗透脆性试验［临床意义］：相差0.０４%以上才有诊断价值。

1.↑：遗传性球形红细胞增多症、遗传性椭圆形细胞增多症、温抗体型自身免疫性溶血性贫血。２.↓：海洋性贫血血红蛋白病、缺铁性贫血、某些肝硬化及阻塞性黄疸。

红细胞膜缺陷的检测㈡红细胞孵育渗透脆性试验

［原理］：红细胞孵育过程中，葡萄糖的消耗增加，贮备的ATP减少,导致红细胞膜对阳离子的主动传递受阻，钠离子在红细胞内凝集细胞膨胀，渗透脆性增加。

红细胞膜缺陷的检测㈡红细胞孵育渗透脆性试验

［参考值］未孵育50%溶血为4.00-4.45g/L

NaCl37°C孵育24h50%溶血为4.65-5.9g/LNaCl

红细胞膜缺陷的检测㈡红细胞孵育渗透脆性试验

［临床意义］：常用于轻型遗传性球性细胞增多症，遗传性非球形细胞溶贫的诊断和鉴别诊断。1.↑：见于遗传性球形细胞增多症，遗传性椭圆形细胞增多症，遗传性非球形细胞溶贫。2.↓：见于珠蛋白生成障碍性贫血，缺铁性贫血，镰形细胞贫血，脾切除术后。

红细胞膜缺陷的检测自身溶血试验及纠正试验［原理］:

正常人红细胞温育后的轻微溶血在给予葡萄糖和不同程度后的纠正。［参考值］:正常人红细胞温育２４～４８ｈ后轻微溶血在给予葡萄糖和ＡＴＰ后纠正红细胞膜缺陷的检测［临床意义］:

可用作遗传性球形细胞增多症和先天性非球形细胞性溶血性贫血的鉴别诊断。遗传性球形细胞增多症时，经孵育后溶血明显增强。加入葡萄糖及加入ATP后孵育，溶血均得到明显纠正；I型先天性非球形细胞性溶血性贫血(葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺陷症)时自身溶血加重，加葡萄糖和ATP均可使溶血部分纠正；Ⅱ型先天性非球形细胞性溶血性贫血(丙酮酸激酶缺陷症)自身溶血明显增强，加入葡萄糖孵育，溶血不能纠正．只有加入ATP才能纠正。

红细胞酶缺陷的检测㈠高铁血红蛋白还原试验㈡氰化物-抗坏血酸试验㈢变性珠蛋白小体生成试验㈣葡萄糖-6-磷酸脱氢酶荧光斑点试验和活性测定㈤丙酮酸激酶荧光筛选试验和活性测定

珠蛋白生成异常的检测㈠血红蛋白电泳㈡胎儿血红蛋白酸洗脱试验㈢胎儿血红蛋白测定或HbF碱变性试验㈣HbA2定量测定㈤限制性内切酶谱分析

自身免疫性溶血性贫血检测㈠抗人球蛋白试验㈡冷凝集试验㈢冷热双相溶试验

自身免疫性溶血性贫血检测㈠抗人球蛋白试验（Ｃoombs）［原理］

不完全抗体IgG无法架接两个邻近的红细胞，而只能和一个红细胞抗原相结合。抗人球蛋白抗体是完全抗体，可与多个不完全抗体的Fc片段相结合，导致红细胞凝集现象，称为抗人球蛋白试验阳性。直接抗人球蛋白试验阳性说明病人红细胞表面上包被有不完全抗体。而间接Coombs试验阳性则说明病人血清中存在着不完全抗体。直接抗人球蛋白试验原理：利用抗人球蛋白血清可与体内已被不完全抗体或补体致敏红细胞产生凝集反应，可检查红细胞是否已被不完全抗体所致敏，如新生儿溶血病、溶血性输血反应、自身免疫性溶血性贫血以及药物诱导产生的自身抗体。间接抗人球蛋白试验原理：用已知抗原的红细胞测定受检血清中相应的不完全抗体；或用已知抗体的抗血清测定受检红细胞上相应的抗原。常用于血型鉴定、抗体的检出和鉴定、输血前交叉配血试验以及其他特殊研究。

自身免疫性溶血性贫血检测㈠抗人球蛋白试验（Ｃoombs）

［参考值］直接、间接抗人球蛋白均呈阴性反应。［临床意义］1.阳性：见于新生儿溶血病，自身免疫性溶血性贫血，SLE，类风湿关节炎，恶性淋巴瘤，甲基多巴及青霉素型等药物性溶血反应。2.AIHA大多属于温抗体型(IgG)，但也有小部分属冷抗体型(IgM)，故必要时应用于4°C条件下进行试验，排除假阴性反应。

自身免疫性溶血性贫血检测㈠抗人球蛋白试验（Ｃoombs）

［临床意义］3.AIHA大多为IgG型抗体，还有IgG+C3型，C3型，极少数IgG亚型，IgA，IgM型，故应使用广谱的抗人球蛋白血清进行试验，必要时须加用上述各种单价抗血清，以提高检出阳性率。4.间接Coombs试验主要用于RH或ABO妊免疫型新生儿溶血病母体血清中不完全抗体的检测。很少用于AIHA诊断。

自身免疫性溶血性贫血检测㈠抗人球蛋白试验（Ｃoombs）

［临床意义］3.AIHA大多为IgG型抗体，还有IgG+C3型，C3型，极少数IgG亚型，IgA，IgM型，故应使用广谱的抗人球蛋白血清进行试验，必要时须加用上述各种单价抗血清，以提高检出阳性率。4.间接Coombs试验主要用于RH或ABO妊免疫型新生儿溶血病母体血清中不完全抗体的检测。很少用于AIHA诊断。

自身免疫性溶血性贫血检测冷热双