液相悬浮芯片(Bio-Plex)PPT-培训

液相悬浮芯片技术生物芯片液相芯片技术生物芯片概况生物芯片种类生物芯片基质液相芯片技术概述液相芯片前处理Bio-Plex光路系统Bio-Plex操作流程同类比较与总结液相芯片技术应用生物芯片概况综合应用多种高技术在微小的载体表面上同时分析检测多种目标生物分子的技术.更少样品、更多信息、更高效率、数据相关性更好.生物样品分析检测技术的主导发展趋势.探针分子：蛋白质（抗体或抗原）、糖类、核酸或多肽等.生物检测芯片

生物功能芯片

生物芯片种类PoetzOet.al,MechanismsofgeneandDevelopment,2005,126,161–170.生物芯片基质滤膜、尼龙、凝胶膜玻璃片、石英玻璃片特殊结构：标准玻璃片制备表面开放的微孔结构，并使用金粒子包被微孔，提高检测灵敏度。微球系统：即液相芯片，灵敏度，活性，效率，成本片膜芯片的问题…表面张力、空间位阻影响反应的动力学片膜的反射和偏光影响荧光检测以一个点计数，系统误差较高可以几个重复点计平均数，但效率受影响每一个芯片必须独立点样或光刻，大规模样品筛查时芯片制作成本较高检测大分子受到限制液相芯片克服了这些问题…开拓了生物芯片新的应用领域成本问题数据精度重复性问题液相芯片技术20世纪90年代兴起，集流式细胞、激光、数字信号处理等技术为一体的多功能液相分析平台。基本原理探针分子待测分子标记的检测分子捕获微球微球特点不同浓度的两种颜色荧光分类染料

FluorescentClassification

Dyes

红色和红外

RedandInfrared10种比例可以对100种微球进行编码5.5μmpolystyrenemicrospheres/magneticmicrospheres微球制备RedInfrared100%0%100%0%IL-4IL-4IL-4IL-4IL-4IL-4IL-4IL-4IL-2IL-2IL-2IL-2IL-2IL-2IL-2IL-2XMAP色标编码微球100色标

colorcodes=100simultaneoustests

同时检测UnknownMulti-Analytes-ProfilingTechnology微球标记探针共价结合在微球表面每个小球通常结合几千个探针探针：抗原、酶、核酸、糖蛋白、其它配体等.液相芯片前处理多种微球混合一种微球对应一种抗体多种微球对应多种目标分子样品孵育混合好的微球与样品反应样品中的目标分子（抗原）与微球上的第一抗体结合标记检测分子孵育标记有生物素的二抗用第二抗体检测可以增加特异性荧光检测利于定量分析Bio-Plex系统检测微球小球进入石英毛细管一次一个通过绿、红激光Bio-Plex光路系统532nmGreenLASER635nmREDLASERFiltersDetectorsDetectorFlowcell红色激光(635nm)激发微球的标码荧光荧光密度对应红色和红外的比例与预先存储的数据比较确定微球的身份激发二抗标记的荧光采集荧光密度数据，FI(FluorescentIntensity)FI对应样品中特定抗原的量绿色激光(532nm)DATA!DATA!DATA!DATA!Ex1Ex2Em1Em3Em2DD

Read100eachcolorbeadinassay

1-100beadsetsavail.液相芯片检测过程5PL对数标准曲线线性标准曲线→标准曲线定量液相芯片的优点表面张力、空间位阻不再影响反应的动力学微球不易发生反射，同时荧光偏光的影响降低以多个微球计数，系统误差降低多个微球检测计平均数，效率不受影响大规模样品筛查时芯片制作成本大大降低利于检测大分子液相芯片开拓了生物芯片新的应用领域成本降低提高了数据精度重复性Bio-Plex液相悬浮系统开机、校正（校验）选择检测项目、标准对照、设置96孔板格局～40分钟完成96样品的读板生成和优化数据报告打印、输出数据自动关机Bio-Plex操作流程开机校正、校验MCVPlate自动清洗、校正、校验校正所有检测器通道重置DD,CL1,CL2,RP1标准信号输出RP1低电压、高电压校正以调整灵敏度和动态范围校正Kit标有各项目标值，输入对话框自动完成校正校正程序校验工具和作用保证仪器性能符合设定的参数保证世界上任意两个地方的仪器的数据可以比较用作维修时故障测试和问题解决可以作为IQ/OQ4套试剂OpticsBeads2bottlesReporterBeads6bottlesClassificationBeads5bottlesFluidicsBeads2bottles

校验参数光学部分校正（光学部件位置精度）液流系统校正（液流精度和消除交叉污染）报告激光校正（线性、灵敏度、动态范围、斜率、精确度等）分类检测校正（微球色标编码的正确性）protocol编制Bio-Plex

总结Bio-Plex是一个定量检测系统，每孔可检测150种不同的指标灵敏----可检测2～4pg/ml蛋白快速----全部反应及数据处理只需2小时微量----样品只需12ul血清方便----样品无需复杂处理,可直接上样微球标记反应类型决定应用范围B-抗体-抗原-抗体-FB-抗原-抗体-抗体-FB-蛋白1-蛋白2-FB-配体-受体-FB-DNA-糖蛋白-FB-底物-酶-FB-DNA-DNA-F液相芯片应用基因诊断SNP基因分型疾病相关突变检测HLA测试或组织配型免疫诊断血库筛查传染病检测疫苗效果测试自身免疫过敏反应其它分子标志物如激素、多肽调控蛋白等Bio-PlexTMMulti-array基因分型基因多态性基因突变基因表达疾病标志物发育过程基因基因调节蛋白表达谱

一般细胞因子研究疾病建模后翻译修饰信号传导因子蛋白功能\相互作用抗体交叉反应和特异性蛋白蛋白相互作用受体配体结合酶的活性抗原决定簇药物筛选疾病Marker发现疾病Model试剂开发的公司ClinicalDiagnosticsBMD

FutureDiagnostics

Genaco

INOVADiagnostics,Inc.

ImmuneTech

MultimetrixGmbH

OneLambda,Inc.

OrchidDiagnostics

ZeusScientific,Inc.

Research/DrugDiscoveryAppliedCytometrySystems

BenderMedSystems

BiosourceInternational

LINCOResearch

MarligenBiosciences,Inc

MiraiBio

QIAGEN

R&DSystems

RadixBioSolutions

RulesBasedMedicine

TmBioScience

Upstate

糖链解析—凝集素液相芯片技术分布：溶酶体、细胞膜、细胞外液功能：分子识别、配体；细胞内外信号传递；细胞黏附、迁移、增殖、分化。凝集素芯片现状液相凝集素芯片的建立Proteomics2014,14,78–86Detectionlimitandresponselinearityofdirectassayandantibody-overlayassayFigure2.(A)LODand(B)linearityofresponseofdirectassaywithRCA120(n=3).(C)LODand(D)linearityofresponseofantibodyoverlayassayforHpprofilingwithRCA120(n=3).GalMethodvalidationofmultiplexedassayFigure3.Multiplexedassayofbead-basedlectinarray(n=3).(A)MultiplexedassayofRCA120andWGAtotestthespecificities.ASF,FET(500ng/mLeach),andthesamemoleofBSAwereused.(B)Dose-dependentnetintensityofASFandFET(20to500ng/mLeach)forRCA120andWGA.(C)MultiplexedassayofRCA120,PNA,andConAtotestthespecificitiesandcomparethesignalsbetweensingleandmultiplexedassay.ASF(12ng/mL)andthesamemoleofHRPandBSAwereused.(D)Dose-dependentnetintensityofASF(1.8to600ng/mL)forConA,RCA120,andPNA.(E)Multiplexedantibody-overlaylectinarrayofRCA120andSNA-I.Hp(3ng/mL)andthesamemoleoftransferrinwereused.(F)Dose-dependentnetintensityofHp(0.3to75ng/mL)forRCA120andSNA-I.Glycosylationprofilingtestof17selectedlectinsFigure4.Glycanprofilingwith17-lectinbead-basedlectinarray(n=3).(A)Seventeenlectinswithdifferentbindingspecificitieswereincubatedwiththreeglycoproteins(50ng/mLofHRP,33ng/mLofmLam,and50ng/mLofASF)thatcontaindifferenttypesofglycans.(B)ThespecificitiesandcleavagesitesofPNGaseFandO-glycanase.(C)Biotin-ASF(50ng/mL)intactordigestedbyPNGaseFwasprobedonthearray.(D)Biotin-ASF(50ng/mL)intactordigestedbyO-glycanasewasprobedonthearray.ErrorbarsrepresentSDoftriplicatedeterminantsDifferentialglycosylationprofilingofHCC-AssociatedIgG((i)(ɑ-1,6)corefucosylationasconfirmedbyPSA,Lensculinarisagglutinin,andAAL;(ii)heavy(ɑ-2,6)sialyl