分子诊断学：第六章 核酸的分离与纯化试题

第六章核酸的分离与纯化一、选择题1.真核生物染色体DNA主要以下列哪种形式存在A环状单链分子B线性单链分子C环状双链分子D线性双链分子E线性或环状双链分子[本题答案]C2.DNA在细胞核内通常与下列哪种物质结合A蛋白质B糖类C脂类D无机盐E水[本题答案]A3.RNA主要存在于A细胞质B线粒体C细胞核D溶酶体E内质网[本题答案]A4.人的二倍体细胞DNA大约由多少碱基对（bp）组成A.1.0×109bpB.2.0×109bpC.3.0×109bpD.4.0×109bpE.5.0×109bp[本题答案]C5.紫外分光光度法测定核酸溶液选用的光波波长为A200nmB230nmC260nmD280nmE320nm[本题答案]C6.在纯化核酸时往往含有少量共沉淀的盐，常用下列哪种浓度的乙醇洗涤去除A100%B95%C70~75%D50~60%E30~40%[本题答案]C7.在核酸的分离与纯化过程中，不需去除的污染物是A蛋白质B脂类C对后续实验有影响的溶液和试剂D不需要的核酸分子E水[本题答案]E8.紫外分光光度法对DNA进行测定中，下列哪项是正确的ADNA的最大吸收波长为280nmBA260为1的光密度大约相当于50µg/ml双链DNACA260为1的光密度大约相当于40µg/ml双链DNADA260为1的光密度大约相当于33µg/ml双链DNAEA260/A280大于2.0[本题答案]B9.在核酸的提取过程中，将整个操作过程的pH尽可能控制在A2～3B4～10C10～11D11～12E12～14[本题答案]B10.紫外分光光度法可对核酸纯度进行鉴定，下列说法是正确的A纯DNA的A270/A280比值为2.0B纯DNA的A260/A280比值为1.8C纯DNA的A260/A280比值为2.0D纯DNA的A270/A280比值为1.8E纯DNA的A230/A270比值为1.8[本题答案]B11.通过凝胶电泳法可对RNA分子完整性进行鉴定，提示无RNA的降解时应A28SRNA的荧光强度约为18S的2倍B18SRNA的荧光强度约为28S的2倍C5SRNA的荧光强度约为18S的2倍D5SRNA的荧光强度约为28S的2倍E28SRNA的荧光强度约为5S的2倍[本题答案]A12.总RNA经琼脂糖凝胶电泳EB染色后观察不到的是AmRNAB28SrRNAC18SrRNAD5SrRNAE5.8SrRNA[本题答案]A13.以下哪项有利于DNA的保存A溶于TE中DNA在室温可储存数年B加入少量DNaseC溶于pH3.0溶液D加入少量DNase和RNaseE在DNA样品中加入少量氯仿，可有效避免细菌污染[本题答案]E14.酚抽提法可用于高分子量DNA的分离纯化，所用试剂分别有不同的功能，下列正确的是ASDS为阳离子去污剂，主要引起细胞膜的降解并能乳化脂质和蛋白质BEDTA为二价金属离子螯合剂，可促进DNase的活性C蛋白酶K只可消化K类蛋白质D酚可使蛋白质变性沉淀E无RNase的DNase可有效地水解RNA[本题答案]C15.下列哪种不是对核酸分子完整性进行鉴定的方法A凝胶电泳法BNorthern杂交CELISADWesternblottingE生物芯片技术[本题答案]D16.下列哪种方法不是分离纯化高分子量DNA的A酚抽提法B煮沸裂解法C甲酰胺解聚法D玻棒缠绕法E异丙醇沉淀法[本题答案]B17.下列哪种不是从琼脂糖凝胶中回收DNA片段的方法A DEAE纤维素膜插片电泳法B电泳洗脱法C冷冻挤压法D低熔点琼脂糖挖块回收法E漂洗法[本题答案]E18.适合从琼脂糖凝胶中回收5kb的DNA片段的方法是ADEAE纤维素膜插片电泳法B非透析袋电泳洗脱法C透析袋电泳洗脱法D压碎与浸泡法E冷冻挤压法[本题答案]C19.适合从琼脂糖凝胶中回收500bp~5kb的DNA片段的方法是ADEAE纤维素膜插片电泳法B非透析袋电泳洗脱法C透析袋电泳洗脱法D压碎与浸泡法E冷冻挤压法[本题答案]A20.适合从聚丙烯酰胺凝胶中回收DNA片段的标准方法是ADEAE纤维素膜插片电泳法B非透析袋电泳洗脱法C透析袋电泳洗脱法D压碎与浸泡法E冷冻挤压法[本题答案]D21.大多数质粒的结构特点一般为A单链线性DNAB双链线性DNAC闭合环状单链DNAD闭合环状双链DNAEDNA-RNA杂交体[本题答案]D22.目前使用较为广泛的质粒DNA小量提取的方法是A牙签少量制备法B小量一步提取法CSDS裂解法D碱裂解法E煮沸裂解法[本题答案]D23.有关煮沸裂解法提取质粒DNA的正确叙述是A该法是一种条件比较温和的物理方法B煮沸能完全灭活核酸内酶AC不适用于大多数E.coli菌株D适用于HB101菌株E适用于<15kb的质粒DNA制备[本题答案]E24.CsCl2-EB法中在过量EB存在的下，超速离心后密度最大沉于管底的是A蛋白质B带切口的环状或线性DNACRNAD复合糖类E闭环质粒DNA[本题答案]C25.用柱层析法纯化质粒DNA时DNA的何种残基与硅基质结合A嘌呤B磷酸盐残基C嘧啶D糖基E氢离子[本题答案]B26.在RNA纯化时，常使用的水饱和酚的pH值为A3.5-4.0B4.5-5.5C6.0-7.5D7.0-8.5E9.0-10.0[本题答案]B27.分离与纯化mRNA可采用下列哪种方法Aoligo(dT)-纤维素柱层析法Boligo(dA)-纤维素液相结合离心法Coligo(U)-滤纸法Doligo(dC)-纤维素柱层析法Eoligo(dG)-纤维素液相结合离心法[本题答案]A名词解释1.RNA酶蛋白抑制剂[本题答案]RNA酶蛋白抑制剂（RNasin）是从人胎盘分离的一种蛋白质可与多种RNA酶紧密结合形成非共价结合的等摩尔复合物，使RNA酶失活。2.电泳洗脱法[本题答案]电泳洗脱法是将待回收的DNA片段电泳出凝胶介质，使其进入一个便于回收的固定的小容积溶液中；再通过一些方法分离纯化出DNA片段。目前主要有透析袋电泳洗脱法与非透析袋电泳洗脱法两大类。3.A260/A280[本题答案]指核酸溶液在260nm和280nm紫外波长下的吸光度的比值，根据比值来判断核酸样品有无蛋白质和酚等的污染。问答题1.在核酸的分离和纯化过程中，如何保持核酸的完整性？[本题答案]为了保证核酸的完整性，首先在操作过程中，应尽量简化操作步骤，减少各种破坏核酸的有害因素，包括物理、化学与生物学的因素。提取应在0～4℃2.试述举2种质粒DNA提取的方法及应用。[答案]质粒DNA提取的方法包括碱裂解法、煮沸裂解法和SDS裂解法。1）碱裂解法：在NaOH存在的强碱性（pH12.0～14.0）的条件下，用强阳离子去垢剂SDS破坏细胞壁和裂解细胞，并使宿主细胞的蛋白质与染色体DNA发生变性，释放出质粒DNA。它是一种适用范围很广的方法，能从所有的大肠杆菌（E.coli）菌株中分离出质粒DNA，制备量可大可小。2）煮沸裂解法：是将细菌悬浮于含TritonX-100和溶菌酶的缓冲液中，TritonX-100和溶菌酶能破坏细胞壁，再用沸水浴裂解细胞，使宿主细胞的蛋白质与染色体DNA发生变性。对CCC质粒DNA因结构紧密不会解链，当温度下降后，CCC质粒DNA可重新回复其超螺旋结构，通过离心去除变性的蛋白质和染色体DNA，然后回收上清液中的质粒DNA。本法只能用于小质粒DNA（小于15kb）的小量或大量制备，适用于大多数从大肠杆菌（E.coli）菌株中分离出质粒DNA。3）SDS裂解法：它是将细菌悬浮于等渗的蔗糖溶液中，用溶菌酶和EDTA处理以破坏细胞壁，再用SDS裂解去壁细菌，从而温和地释放出质粒DNA到等渗溶液中，然后用酚/氯仿抽提。适用于大质粒DNA的提取。3.简述哺乳动物细胞基因组DNA抽提的主要方法有哪几种？[本题答案]哺乳动物细胞基因组DNA抽提的主要方法有：酚提取法、甲酰胺解聚法、玻棒缠绕法和异丙醇沉淀法、磁珠吸附法等。4.简述从琼脂糖凝胶中回收DNA片段的主要方法有哪几种？[本题答案]从琼脂糖凝胶中回收DNA片段的方法主要包括DEAE-纤维素膜插片电泳法、电泳洗脱法、低熔点琼脂糖凝胶挖块回收法、冷冻挤压法及现在有试剂盒供