淡紫拟青霉对根结线蠕虫的抗性研究

淡紫拟青霉对根结线蠕虫的抗性研究

根生昆虫是影响植物的重要致病性线虫，在植物和反季节栽培的植物中发生了严重事件。用于预防和控制植物根结线虫疾病的化学杀虫剂通常被忽视。因此，人们更关注有害控制和病虫害的防治。在植物种类中，浅紫色假生物（thom.）是一种广泛分布于线虫科的寄生虫菌，自然寄生率低。为了充分利用生物资源，作者通过实地调查、室内测量、盆栽和社区测试，研究了浅紫色假生物对控制植物根结线虫病的影响。1材料和方法1.1样品采集根据地理条件和作物结构特点,分别在泉州、福州、建瓯和顺昌等县(市)采集作物根结线虫病的病根样品,在实验室分离根结线虫和线虫寄生菌.1.2培养法分离fz2c29挑取变色的根结线虫卵囊和雌虫,经体积分数为1.0%的NaClO溶液消毒3min,无菌水洗3次,移入PSA抗生素平板(含0.25mg·mL-1氯霉素),于25℃培养.菌落形成后移入斜面纯化.通过几丁质平板筛选和几丁质酶活测定获得FZ0289菌株.1.3扫描电镜wa的制备用灭菌水将PSA斜面上新鲜的淡紫拟青霉孢子洗下,配制成106个·mL-1孢子含量的菌悬浮液.侵染试验采用水琼脂平板法:吸取100μL根结线虫卵悬浮液和2μL孢子悬浮液,于水琼脂平板上混匀,而后轻轻涂布,于培养箱中(28℃)培养.设3个重复.3d后于体视显微镜下测定检查寄生率并进行显微拍照.将盖玻片充分洗净后,用砂轮将其割成4mm×4mm左右的小方块,灭菌后置于质量分数为1%的WA平板上;在小方块边缘滴加5μL孢子悬浮液,用封口膜将培养皿封好后于28℃黑暗培养1-2d;在已蔓延至盖玻片上的菌丝上方滴加3μL根结线虫卵悬浮液,重新封口后进行保湿培养,培养7d;每日取出盖玻片.以盖玻片为载体,卵粒面朝上,制备扫描电镜样品.制备过程在一干净的小培养皿内进行;盖玻片经真空干燥、粘样和喷金镀膜,样品固定、后固定及脱水后在Jsm-5310扫描电镜(15kV加速电压)下观察.1.4苗苗处理.在瓜苗生长和根结严重度时,盆栽试验:在栽培大棚内进行.供试菌为孢子含量为2×109个·g-1的淡紫拟青霉FZ0289菌株麦粒菌剂,供试作物为黄瓜,供试线虫为南方根结线虫(M.incognita).用河砂营养钵培育瓜苗.将两叶一心期瓜苗移栽到花盆中的栽培基质内,栽培基质为发酵后的木屑、无病土以及质量比为25∶50∶3的有机肥混合配剂,每盆1株.从感染根结线虫病的番茄病根上剪取新鲜根结,移栽时将40g病土+40个根结+10g菌剂混合后撒施于每株瓜苗根部.对照:每株施40g病土+40个新鲜根结.每一处理设20盆.接菌后按常规管理,于接种后60d将全部处理植株扣盆倒出,统计植株高度和鲜重、根鲜重,并进行根结严重度分级,计算病情指数和防治效果.小区试验:试验地为栽培大棚,栽培基质为等量混合的河砂与泥炭土,前茬发生根结线虫病.52条栽培槽,每槽面积为0.47m×35m,实际试验面积为855m2.每槽为1个小区.移栽时穴施5g孢子含量为4×109个·g-1的淡紫拟青霉FZ0289菌株麸皮谷壳培养物;对照不施菌剂.防治小区与对照小区间隔排列.定植后30d调查株高,统计产量.采收后期调查根结指数、根重,评价防治效果.根结严重度分0-10级,分级标准参照文献.2结果与分析2.1淡紫拟青霉种群淡紫拟青霉在田间分布较普遍.采集到的4个县(市)的10种作物的根结线虫样本中,有8种可分离到该菌.淡紫拟青霉种群水平与土壤类型、生境有关.在彩叶草、鸡冠花等盆栽花卉的根结线虫上该菌的自然种群水平较高,而在田间蔬菜和果树的根结线虫上该菌的自然种群水平很低.淡紫拟青霉在根结线虫卵囊上的寄生率明显高于雌虫上的寄生率,表明该菌以卵寄生为主(表1).2.2区域形态观察在水琼脂平板上混合接种淡紫拟青霉FZ0289菌株孢子和线虫卵,5d后观察发现有98.2%的卵被寄生.光学显微镜下观察发现接种淡紫拟青霉2d后菌丝侵入卵中,侵入的菌丝以卵内蛋白质为营养而快速生长.被寄生的卵内充满菌丝,卵壳基本完整(图1A).接种5d后从卵内长出分生孢子梗和分生孢子.菌丝在胚胎期的卵内扩展较快,也能侵染含幼虫的卵(图1B).扫描电镜观察发现被寄生卵后期完全被淡紫拟青霉菌丝所包裹(图1C).2.3黄瓜属植物的分布盆栽试验和小区试验结果均表明,淡紫拟青霉菌剂对黄瓜根结线虫病的防治效果分别为77.7%和73.3%,植株地上部生物产量显著提高(表2).小区试验测产结果表明,防治后增产率为19.7%.经防治的黄瓜根系发达、健壮(图1D),而未防治的黄瓜(对照)根结严重,根系生长脆弱(图1E).防治区的黄瓜只有少量根结出现于老根和上部根上,其严重度和病情指数明显低于未防治小区.由此推测,淡紫拟青霉在控制根结线虫再侵染过程中发挥了重要作用.3对根结线幼虫的防治效果植物线虫的接种方法有带线虫材料混播混栽法、离体卵和幼虫喷雾接种法和伤口接种法等多种方法,选用的接种方法与试验目的、线虫传染方式和侵入途径有关.田间残存于作物病根内的根结线虫卵囊和土壤中2龄幼虫是主要的侵染源.淡紫拟青霉侵染根结上的卵囊,进而侵染线虫卵,以达到控制线虫的目的.因此,盆栽试验以新鲜根结、病土和淡紫拟青霉混合接种,比较符合田间实际.盆栽试验和小区试验防效结果表现出一致性.盆栽试验的线虫接种量较大,试验小区前茬发生过