单剂量口服氟康唑制剂在健康人体的生物等效性研究

单剂量口服氟康唑制剂在健康人体的生物等效性研究

三氟乙醇是一种新型抗真菌药物。它的抗菌谱与托康唑相似，但其抗菌活性比托康唑强。对真菌羊毛甾醇14α-脱甲基酶的抑制作用具有高度选择性,即通过抑制麦角甾醇合成酶,使麦角甾醇合成受阻从而破坏真菌细胞壁的完整性,抑制其生长繁殖。对白色念珠菌、大小孢子菌、新型隐球菌、表皮癣菌及夹膜组织胞浆菌等均有强力抗菌活性。氟康唑具有吸收快、体内分布广、半衰期长、耐受性好、副作用小等特点,临床广泛用于各种深部真菌感染性疾病及浅表、粘膜真菌感染的治疗。材料、对象和方法1药品、化学品受试制剂:氟康唑片,规格:每片150mg,批号:070509;氟康唑胶囊,规格:每粒150mg,批号:070604,均为广东环球制药有限公司生产;参比制剂:氟康唑胶囊(商品名:大扶康),规格:每粒150mg,批号:45892007,辉瑞制药有限公司生产;氟康唑对照品,含量:99.9%,批号:0070126;酮康唑对照品,含量:99.5,批号:061101,均中国药品生物制品检定所提供。甲醇(色谱纯),美国天地公司生产;醋酸铵(分析纯),沈阳化学试剂厂提供;乙酸乙酯(分析纯),沈阳市经济开发区试剂厂生产;异丙醇(分析纯),天津市博迪化工有限公司生产;空白血浆,中国医科大学附属第一医院提供;水为重蒸馏水。LC/MS仪,包括:LC-10ATvp液相色谱输液泵、2010A型单重四极杆质谱仪(APCI源)、SIL-HT型自动进样器、LC-MSSolution3.0数据采集系统,日本岛津公司产品;统计软件3P97数据处理软件,中国药理学会;TG-328A分析天平,上海天平仪器厂产品;CAY-1型液体快速混合器振荡器,北京长安仪器厂产品;WM-2H型无油压缩机蒸发仪,天津医疗仪器厂产品;TDL-40B型离心机,上海安亭科学仪器厂产品。2平均体质量和禁含治疗药物的范围18名健康男性受试者,平均年龄(22±0.6)岁;平均身高(171.7±3.7)cm;平均体质量(64±5.9)kg。试验前,所有受试者经体检证实,无胃肠道疾病,心、肝、肾功能正常。受试者在试验前1月内停用一切药品,从开始进入试验后直到试验结束,禁烟酒、禁含咖啡因的饮料。对试验内容及可能出现的不良反应充分了解,试验前签署知情同意书。3氟康唑胶囊组采用全排列组合,自身对照随机三制剂、三周期、三交叉试验设计方法。本试验方案经中国医科大学伦理委员会批准。18名受试者按体质量随机编号,分成3组,每组6名,分别于清晨7:00空腹给予受试制剂氟康唑片、氟康唑胶囊、及参比制剂氟康唑胶囊各600mg,以温开水250mL送服,服药后4h进食低油脂的标准中餐,服药后9h进食低油脂的标准晚餐,交叉给药时,标准餐相同。2次试验间隔均定为2周。经洗净期1周后,交叉给药。于服药前(0h)和服药后0.25、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、6.0、12.0、24.0、48.0、72.0、96.0h由前臂静脉取血5mL,置肝素抗凝管中摇匀,立即3000r·min-1离心10min,分离血浆,置于-20℃冷冻保存至分析。4血液中药物浓度的测定4.1c7-3-预柱s1c3-1-3.2.2循环柱分析柱KromasilC18(150mm×4.6mm,5μm),预柱C18保护柱(10mm×4.6mm),购于大连中汇达公司;流动相为甲醇-0.5mmol·L-1醋酸铵缓冲液-冰醋酸(75∶25∶0.02);流量:0.8mL·min-1;进样量2μL;柱温为室温。4.2热块温度离子源为大气压化学电离源(APCI源);接口温度为400℃;CDL温度250℃;加热块温度250℃;雾化气(N2)流量2.5L·min-1;干燥气(N2)流量:2.0L·min-1;检测电压1.4kV;正离子方式检测;扫描方式为选择离子监测(SIM),用于定量分析的离子分别为m/z307.2(氟康唑)和m/z531.2(酮康唑)。4.3流动相-内酰胺5-t的制备取血浆100μL,加甲醇100μL,内标溶液50μL,涡旋混合3min,乙酸乙酯-异丙醇(95∶5)混合液3mL,涡旋3min,离心(4000r·min-1)5min,取上清液置另一试管中,氮气流下吹干,残渣加流动相200μL,超声1min,涡旋1min,离心(12000r·min-1)3min,取上清液2μL进样。4.4模拟样品测定取空白血浆100μL,加氟康唑标准系列溶液100μL,制成相当于氟康唑浓度为0.04、0.1、0.4、2.0、5.0、12μg·mL-1的模拟血浆样品,按“血浆样品的处理”项下的方法操作,每一浓度进行双样本分析,进样2μL,记录色谱图。以待测物浓度为横坐标,待测物与内标物的峰面积比值为纵坐标,用加权(w=1/x2)最小二乘法进行回归运算,求得的直线回归方程即为标准曲线,Y=1.20×10-3X+1.46×10-2,γ=0.9995。根据标准曲线,氟康唑的线性范围为0.04~12μg·mL-1,定量下限为0.04μg·mL-1。4.5定量分析方法氟康唑和酮康唑(内标物)离子化(APCI源),主要生成[M+H]+准分子离子峰,分别为m/z307.2和m/z531.2,将2者作为定量分析时的监测离子。在本色谱条件下,最低检测限为0.02μg·mL-1(S/N≥3)。4.6回收率、精密度、准确度方法回收率取空白血浆100μL,按“标准曲线的制备”项下的方法,制备低、中、高3个浓度(氟康唑分别为0.1、2.0和10μg·mL-1)的模拟血浆样品,每一浓度进行6样本分析。将所得峰面积比代入标准曲线计算测得量,以测得量与添加量之比,计算得方法回收率分别为96.3%、97.2%和101.4%。提取回收率取空白血浆100μL,按“标准曲线的制备”项下的方法,制备低、中、高3个浓度(氟康唑分别为0.1、2.0和10μg·mL-1)的模拟血浆样品,每一浓度进行6样本分析。同时,另取空白血浆100μL,除不加标准系列溶液和内标溶液外,其他按“血浆样品的处理”项下的方法操作,残渣加相应浓度的氟康唑和内标溶液分别为100、50μL,流动相50μL溶解,进样分析,获得相应峰面积(3次测定的平均值)。以每一浓度2种处理方法的峰面积比值,计算得提取回收率分别为77.2%、81.8%和80.1%。4.7氟康唑测定法取空白血浆100μL,按“标准曲线与定量下限”项下的方法,制成高、中、低3个浓度(氟康唑浓度分别为0.1、2.0和10μg·mL-1)的质量控制(QC)样品,每一浓度进行6样本分析,连续测定3天,根据当日的标准曲线,计算QC样品的测得浓度。根据QC样品测定结果,计算精密度与准确度,见表1。结果1氟康唑和酮康唑内标物保留时间b在本色谱条件下,取受试者的空白血浆100μL,按“血浆样品的处理”项下的方法操作(不加内标溶液),进样2μL;将一定浓度的标准溶液和内标溶液加入空白血浆中,依同法操作;氟康唑和酮康唑(内标物)的保留时间分别为2.3、6.2min。取受试者口服给药后的血浆样品,同法操作,分别得色谱图A、B,见图1。结果表明,空白血浆中的内源性物质和代谢物不干扰血浆中氟康唑和酮康唑的测定。2平均血药浓度—药时曲线18名健康志愿者单次口服氟康唑胶囊(参比制剂和受试制剂)600mg后,平均血药浓度—时间曲线见图2,由图2可见,氟康唑胶囊在健康人体内的药时变化规律符合一室模型。3生物利用度评价主要药代动力学参数用DASS2.0程序处理,将测得的数据输入计算机,采用梯形法计算AUC0-t和AUC0-∞;以半对数作图法,由消除相的浓度点计算ke和t1/2,tmax和Cmax采用实测值,见表2。将2种制剂的主要药代动力学参数Cmax、AUC0-t和AUC0-∞经程序统计处理,求得氟康唑片的相对生物利用度为(103.4±5.4)%;氟康唑胶囊的相对生物利用度平均为(104.5±6.3)%,结果表明,受试制剂与参比制剂具有相同的生物效应。提高灵敏度和准确度本研究采用LC/MC法测定人血浆中氟康唑浓度,本方法在参考文献报道的基础上,进行了改进和创新,本方法简便易行,特异性、重现行好,灵敏度较