高效液相色谱法测定洗发类化妆品中四种去屑剂的含量

高效液相色谱法测定洗发类化妆品中四种去屑剂的含量

据中国保险部统计，中国约60%的成年人受到不同程度的上肢崇拜的影响，其中15%的人非常严重。头皮屑的发病机制至今尚未明确,但其产生的主要原因与头皮表面马拉色菌属真菌的繁殖密切相关。目前,市场上常见的去屑洗发水多添加各种抑制真菌生长的化学成分,包括水杨酸、酮康唑、氯咪巴唑和吡啰克酮乙醇胺盐等,其中酮康唑是一种治疗头皮屑效果较好的药物,但这些去屑剂同时又具有一定的安全性问题。据《化妆品卫生规范》(2007年版)的要求,酮康唑为不得在化妆品中添加的禁用组分,而其他三种成分则是可以添加到化妆品中的限用组分。因此,建立洗发液中去屑剂的测定方法对于产品监管及维护消费者的健康权益具有重要意义。而在对化妆品中各种禁限用去屑剂进行市场监管的过程中,能够一次性的对这四种常见成分进行鉴定、分离和定量是最快速、便捷、省时、节约的方案。本研究以市售去屑洗发水为样品,采用反相高效液相色潽法,对标准规定的四种禁限用物质进行分离,确立了实验室条件下四种物质的分析定量方法。1设备和材料1.1超声波粉碎机法Waters2695高效液相色谱仪及二极管阵列检测器(沃特世中国有限公司);B5500S-MT型超声波清洗机(必能信(上海)有限公司);PB-21型pH计(德国Sartorius公司);CP225D型电子天平(德国Sartorius公司)。1.2测试剂磷酸二氢钾、EDTA、磷酸均为分析纯;甲醇、乙腈均为色谱纯。1.3药品微生物指标检验对照品:水杨酸,购自中国药品生物制品检验检定院,批号200303;酮康唑,购自中国药品生物制品检验检定院,批号200602;氯咪巴唑,购自Dr.Ehrenstorfer,批号00208;吡啰克酮乙醇胺盐,购自Fluka,批号001437800;供试样品:去屑洗发露,厂家X,批号BK200B。2测试方法2.1对照品溶液的制备0.01mol/L磷酸二氢钾缓冲液的配制:称取磷酸二氢钾1.36g,加EDTA0.19g(终浓度为0.5mmol/L),用水稀释至1000ml,用磷酸调节水溶液的pH至4.0。对照品稀释溶液:乙腈:甲醇=95:5。流动相:乙腈:甲醇:0.01mol/L磷酸二氢钾缓冲液=50:10:40。2.2对照品溶液的制备对照品储备溶液的制备:分别称取水杨酸、酮康唑、氯咪巴唑和吡啰克酮乙醇胺盐对照品24.42mg、25.05mg、49.81mg和52.84mg,用对照品稀释溶液定容至50ml容量瓶中。对照品系列溶液的制备:分别量取四种对照品储备液1.00,2.00,4.00,8.00,10.00ml,用流动相A稀释至10ml。相应对照品溶液含量见表1。2.3提取液的制备称取样品约0.5g,置于50ml容量瓶中,加对照品稀释液定容至刻度,振摇,超声提取40min,经0.45μm滤膜过滤,滤液做为待测溶液。2.4色度分析色谱柱:C18;柱温:室温;流速:0.8ml/min;进样量:5μl;检测波长:230nm。2.5化合物终浓度的测定量取标准曲线第一点40μl,用对照品稀释溶液定容至10ml,使水杨酸、酮康唑、氯咪巴唑和吡啰克酮乙醇胺盐的终浓度分别为0.2μg/ml、0.2μg/ml、0.4μg/ml和0.4μg/ml。2.6复配盐终浓度的测定量取标准曲线第一点100μl,用对照品稀释溶液定容至10ml,使水杨酸、酮康唑、氯咪巴唑和吡啰克酮乙醇胺盐的终浓度分别为0.5μg/ml、0.5μg/ml、1.0μg/ml和1.0μg/ml。2.7加样回收率测定分别精密吸取标准贮备液1.00和10.00ml各三份,置于10ml容量瓶中,分别称取样品6份(约0.05g),精密称定于上述容量瓶中,按样品溶液制备方法制备回收率测定溶液,按上述色谱条件测定,计算回收率。3结果3.1种去屑剂的色谱分离按照本文的色谱条件试验,分别对标准溶液和样品溶液进样,对照溶液中四种去屑剂组分的色谱分离图见图1。理论板数按水杨酸、酮康唑、氯咪巴唑和吡啰克酮乙醇胺盐计分别为9385、8155、14087和17548,分离度均大于1.5。3.2标准曲线的绘制以峰面积积分值为纵坐标,以表1中的系列浓度(μg/ml)为横坐标,绘制四种去屑剂组分的标准曲线,分别计算回归方程如下:水杨酸、酮康唑、氯咪巴唑和吡啰克酮乙醇胺盐的线性范围分别为48.84~488.40μg/ml、50.10~501.00μg/ml、99.62~996.20μg/ml和105.68~1056.80μg/ml,该范围内四种组分的进样浓度与峰面积呈良好的线性关系。3.3进样的精密度取标准曲线第一点,按方法色谱条件连续进样5次,测定四种去屑剂组分峰面积,组分水杨酸、酮康唑、氯咪巴唑和吡啰克酮乙醇胺盐的RSD分别为0.7%、0.5%、0.4%和0.7%,四种组分重复进样结果表明该色谱条件下测定结果的精密度良好,如图2所示。3.4胺盐的检测限和定量限按方法2.5制备的检出限溶液,按上述色谱条件测定,进样量5μl,水杨酸、酮康唑、氯咪巴唑和吡啰克酮乙醇胺盐的信噪比分别为37、56、39和1.7,如图3所示,确定检出浓度为0.2μg/ml、0.2μg/ml、0.4μg/ml和0.4μg/ml,按照稀释体积50ml,称样量0.5g,计算水杨酸、酮康唑、氯咪巴唑和吡啰克酮乙醇胺盐的方法检出限依次为20.0μg/g、20.0μg/g、40.0μg/g和40.0μg/g。3.5测定酮乙醇胺盐的定量按方法2.6制备的定量限溶液,按上述色谱条件测定,进样量5μl,水杨酸、酮康唑、氯咪巴唑和吡啰克酮乙醇胺盐的信噪比分别为182、68、46和4,如图4所示,确定定量浓度为0.5μg/ml、0.5μg/ml、1.0μg/ml和1.0μg/ml,按照稀释体积50ml,称样量0.5g,计算水杨酸、酮康唑、氯咪巴唑和吡啰克酮乙醇胺盐的方法定量依次为50.0μg/g、50.0μg/g、100.0μ3.6加样回收率计算经过测定,供试样品中四种组分的含量均小于检出限,通过对照品加入量和对照品测得量计算四种组分的平均回收率分别为99.86%、100.65%、99.67%和103.76%,回收率计算结果及RSD(%)见表2。4高效液相色谱分离水杨酸具有一定的抑菌作用,是一种常用于化妆品中的防腐剂,目前常用的检测方法也很多,由于其具有紫外吸收,而可以通过液相系统分离后经紫外检测器检测。酮康唑的含量测定通常采用电位滴定的方法,但也有研究报道以甲醇和磷酸盐缓冲液作为流动相进行高效液相色谱分离的方法。据化妆品国家标准QB/T4128-2010和QB/T4127-2010中规定的方法,