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血清总补体活性测定(CH50)

溶血反应SRBC+兔抗SRBC抗体(溶血素)新鲜血清(提供补体）溶血+启动经典激活途径CH50实验原理绵羊红细胞（Ag)与溶血素(Ab)，在补体（新鲜血清）的作用下，绵羊红细胞可被溶解，出现溶血现象。溶血程度与血清中补体量正相关，呈一S形曲线。在50%溶血附近，稍微改变补体量，溶血程度变化明显（溶血程度与补体量之间呈明显线性关系），因此以50％溶血率来判定终点较100％更为敏感，所以该试验称为50％溶血试验-CH50CH50实验是反映补体经典途径的溶血活性，检测的主要是C1-C9所有组分的综合水平。临床多用于诊断和分析补体系统缺失病、某些自身免疫病、超敏反应性疾病和传染性疾病等。CH50实验临床意义CH50实验方法1.制备1:20待测血清

抽静脉血3ml凝固→500-1000rpm×5min,离心→分出血清，用BB液进行1：20稀释2.制备2％SRBC

取抗凝保存羊血（SRBC）用5-10倍NS洗涤3次，前两次2000rpm×5min,最后一次2500rpm×10min→按压积用B.B液配成2%悬液：取2ml压积(沉淀）+98mlB.B液配成2%SRBC悬液，并进行验证：

2%SRBC悬液0.2ml+BB液5ml,混匀后倒入0.5cm比色杯542nm比色，调T为38%~42%CH50实验方法3.制备50%溶血标准管

取调整好的2％SRBC悬液2ml+DW8ml配成100%全溶管，然后取全溶管上清2.5ml+B.B液2.5ml，即为50%溶血标准管⒋CH50测定按下表加各试剂→摇匀→37℃水浴30min→离心→与50%溶血标准管进行目视及比色比较→计算出每ml血清中总补体活性（u)管号1：20稀释血清（ml）B.B液（ml）溶血素（ml）2%SRBC（ml）CH50（U/ml）10.101.400.50.520020.151.350.50.513330.201.300.50.510040.251.250.50.58050.301.200.50.566.660.351.150.50.557.170.401.100.50.55080.451.050.50.544.490.501.000.50.54010--1.500.50.5--血清总补体溶血活性测定2.5ml体系结果判断取各管离心后与50%溶血标准管做初步目视比较，观察溶血程度。选择与标准管在分光光度计上A542nm光密度值最接近一管的稀释血清量，按下列公式计算CH50活性。

1血清总补体活性＝血清量×血清稀释倍数正常值为50-100U/ml。待检血清标本必须新鲜，如室温放置2h以上，会使补体活性下降。待检血清标本应无溶血、无乳糜、无污染。缓冲液、致

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