HBV的变异及其耐药的诊治课件

HBV的变异及其耐药的诊治上海瑞金医院陆志檬教授HBV的变异及其耐药的诊治上海瑞金医院陆志檬教授1变异是病毒重要生物学特征之一慢性HBV感染者体内每天可产生1011~13个病毒体复制过程中DNA多聚酶可发生错误导致病毒DNA中出现核苷错误配对HBVDNA每个复制循环中每10,000个碱基对可发生1个核苷错误，因而形成HBV突变株：可能改变了宿主对病毒的免疫反应可能增强了病毒的复制能力1CarmanWF,London:ChurchillLivingstone,1998;141-172变异是病毒重要生物学特征之一慢性HBV感染者体内每天可产生12变异株≠突变株

（variant）（mutant）HBV变异株

是指在自然环境中发生变化的病毒株HBV基因型、HBsAg血清型和亚型HBV突变株

是指在宿主体内自发产生或者在治疗压力或其它压力下发生改变的病毒株HBV自发性前核心区/核心区和核心启动子(BCP)突变与HBV基因型密切相关1LokAS,Gastroenterology,2001;120:1828-1853变异株≠突变株

（variant）（mutant）HBV3病毒感染的持久性及耐药性病毒肝细胞病毒多聚酶缺乏矫正功能CCCDNA半衰期长受染细胞半衰期长宿主选择性压力免疫应答病毒感染的持久性对耐药突变株的选择1ZoulimF,SeminLiverdis,2002;22S1:23-322ZoulimF,AntivirChemChemother,2001,12:131-142病毒高复制高变异率病毒感染的持久性及耐药性病毒肝细胞病毒多聚酶CCCDNA4耐药分析耐药基序 （Drugresistancemotifs）HBV表型耐药 （Phenotypicresistance）临床耐药 （Clinicalresistance）三者相关，但不完全等同

耐药分析耐药基序 （Drugresist5

HBVpolymerase(wild-type)Lamivudineandwild-typeHBV(一)

Nucleotides

ss(-)DNAhighaffinity

Y

M

D

DHBVpolymerase(wild-type)Lami6

Lamivudineandwild-typeHBV(二)HBVpolymerase

(wild-type)

NucleotideshighaffinityLamivudineinhibitionss(-)DNA

Y

M

D

DLamivudineandwild-typeHBV(7

LamivudineandYMDDvariantHBV

YV/I

D

DNucleotidesreducedaffinityLamivudineweakinhibitionss(-)DNAHBVpolymerase(variant)LamivudineandYMDDvariantH8病毒耐药性的诊断表型耐药－在治疗期间血清病毒DNA水平上升基因型耐药－病毒多聚酶基因出现突变1NafaS,Hepatology,2000;32:1078-1088

2StuyverL,JclinMicrobiol,2000;38;702-707病毒耐药性的诊断表型耐药－在治疗期间血清病毒DNA水平上升9耐药变异的检测方法SequencesanalysisLineprobeassayPCR-RFLPanalysis (Restrictionfragmentlengthpolymorphism)Real-timePCRMolecularbeaconsDNAchip耐药变异的检测方法Sequencesanalysis10LightCyclerDetectionFormats

MutationAnalysisTemperaturelow medium highMismatchPerfect

MatchLightCyclerDetectionFormats11YMDD变异检测结果YMDD变异检测结果12HBV的变异及其耐药的诊治课件13HBV的变异及其耐药的诊治课件14YMDD基序变异发生后的临床影响IncidenceofYMDDvariantHBVIncidenceofdetectableserumYMDDvariantHBVinHBeAg+vepatientsafterlamivudinetherapyfor:1yr=24%(Laietal,2001)2yr=38%(Liawetal,2000)3yr=49%(Leungetal,1999)4yr=67%(Changetal,2000)EmergenceofYMDDvariantsdoesnotnecessarilyequatetoclinicalresistanceYMDD基序变异发生后的临床影响IncidenceofY15HBV的变异及其耐药的诊治课件16HBV的变异及其耐药的诊治课件17HBV的变异及其耐药的诊治课件18HBV的变异及其耐药的诊治课件19YMDD变异检测结果00020153017510002000002146511068.720213100181013.603192100231010.511171变异株百分比(%)YVDDYIDDYMDD变异株百分比(%)YVDDYIDDYMDD治疗48周治疗前编号张欣欣等瑞金医院YMDD变异检测结果0002015301751000200020YMDD变异对临床的影响张欣欣等瑞金医院YMDD变异对临床的影响张欣欣等瑞金医院21YMDD变异对临床的影响张欣欣等瑞金医院YMDD变异对临床的影响张欣欣等瑞金医院22CountryMethodNumberofPatientsPercentsofDetectionofYMDDmutantinuntreatedpatientsChinaCloneAnalysis580%(4/5)Japan1PCR–ELISA&mini-sequencemethod1828%(5/18)Japan2Peptidenucleicacid(PNA)mediatedpolymerasechainreactionclamping1822%(4/18)GermanyLine-probe-assay86

Ofthepatientswhodevelopedresistance,32%hadYMDDmutantspretreatment.Ofthosewhodidnotdevelopresistance,59%hadYMDDmutantspretreatment.Therefore,YMDDpre-treateddoesn’tpredicttreatmentfailure.Japan1:SatsukiKobayashi,TatsuyaIde,MichioSataJapan2:ToshihikoKirishima,TakeshiOkanoue,YukikoDaimon,etal.CountryMethodNumberofPatient23对拉米夫定耐药株的治疗不明部分活性不明LFd4C不明不明不明LdC不明不明不明LdT不明无不明Clevudine不明无不明Emtricitabine有部分活性无报道恩替卡韦有有无报道阿地福韦无无有:25%/1y;50%/2y拉米夫定有尚未研究有:75%的患者干扰素

对拉米夫定耐药株的活性体外体内耐药性抗病毒药物1NafaS,Hepatology,2000;32:1078-1088

2DelaneyWet,AntimicrobAgentsChemother,2001;45:1705-1713对拉米夫定耐药株的治疗不明部分活性不明LFd4C不明不明不明242002年欧洲肝病会议信息（二）2002.4.西班牙

Adefovir治疗CHB及对LAM耐药变异的体内外试验

2002年欧洲肝病会议信息（二）2002.4.西班牙25Inhibitionoflamivudine-ResistantHBVbyAdefovirinCellCultureAssay

FoldIncreaseinIC50MutationLamivudineAdefovirWidetype11

V521L1.41.9

L528M3.51.9M552I3803.2L528M+M552V20802.5V521L+L528M+M552V16660.7L528M

&

V521L:

compensatorymutationsenhancingreplicationfitnessInhibitionoflamivudine-Resis26ViralLoadSuppressioninPatientsTreatedwithADVforUpto72Weeks

MedianDecreaseinDurationofADVNo.ofHBVDNATherapypatients*(Log10c/ml)24weeks106-3.648weeks46-4.472weeks14-4.7Genotypedpatientswithbothbaselineandpost-treatmentHBVDNAdataavailable

ViralLoadSuppressioninPati27对拉米夫定耐药的预防针对病毒拉米夫定+泛昔洛韦拉米夫定+阿地福韦(或+恩替卡韦,LdT)拉米夫定+干扰素

(或IFN

续贯治疗)针对宿主恢复特异性抗HBVCD4/CD8免疫应答诱导持续病毒抑制HBVDNA疫苗细胞因子1GishRG,Ant