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文档简介
研究背景心肌细胞收缩/舒张功能与心肌细胞内钙循环密切相关心衰时心肌细胞钙离子循环异常是心肌舒缩功能障碍的细胞学基础稳心颗粒抗心律失常时能改善心衰患者和动物的心功能稳心颗粒与西药联合应用治疗CHF具有协同增强心功能的作用研究背景心肌细胞收缩/舒张功能与心肌细胞内钙循环密切相关Bers(2002)Nature415:198-205钙循环Bers(2002)Nature415:198-20通过左心容量和压力超负荷方法制作家兔心衰模型及稳心颗粒对心衰家兔心功能的作用探讨稳心颗粒对心衰时钙调控蛋白的影响研究目的通过左心容量和压力超负荷方法制作家兔心衰模型及稳心颗粒对心衰实验动物
新西兰大耳白兔,3月龄,雌雄不拘,体重2.0~3.0kg分组假手术组(shame)8只假手术稳心颗粒组(HF-drug)
8只心衰组(HF)
10只心衰稳心颗粒组(HF-drug)
10只
材料和方法实验动物材料和方法主要器材
多道生理记录仪(中国四川锦江通用实业有限公司)超声心动图仪(Vivid7,美国GE公司)基因扩增仪(Bioneer,EDC-810)
DNA电泳仪(Bio-RAD,Sub-CellModel96)酶标仪(PerKinElmer,Wallac1420)凝胶成像仪(Bio-RAD,UniversalHoodⅡ)
材料和方法主要器材材料和方法材料和方法主要药品和试剂稳心颗粒(山东步长制药有限公司)肝素钠注射液(天津生物化学制药有限公司)
钙调控蛋白引物(InvitrogenBiot)钙调控蛋白一抗(abcam公司)组织总蛋白提取试剂盒(谷歌生物公司)材料和方法主要药品和试剂稳心颗粒心衰动物模型制作
新西兰大耳兔主动脉瓣关闭不全腹主动脉缩窄EF<45%LVESD>1.20cm脉压增大50%心衰动物模型制作新西兰大耳兔主动脉瓣关闭不全腹主动脉缩窄E超声资料左室舒张末内径LVEDD左室收缩末内径LVESD左室舒张末容积LVEDV左室收缩末容积LVESV左室射血分数LVEF左室短轴缩短分数LVFS检测指标超声资料检测指标RT-PCR和Westernblot肌浆网钙泵SERCA2a雷诺定受体RyR2受磷蛋白PLB钠钙交换体NCX基因和蛋白表达情况检测指标RT-PCR和Westernblot检测指标计量数据均以均数±标准差表示采用单因素方差分析所有数据均采用SPSS13.0分析P<0.05有统计学意义统计学处理计量数据均以均数±标准差表示统计学处理稳心颗粒改善心衰家兔的心功能LVEDD(mm)1.30±0.13
1.31±0.10
1.84±0.08※1.55±0.07﹟LVESD(mm)0.78±0.070.81±0.081.54±0.12※
1.05±0.07﹟LVEDV(ml)4.18±1.074.08±0.80
10.34±1.19※
6.68±0.79﹟
LVESV(ml)1.06±0.271.16±0.31
5.90±0.75※
3.04±0.51﹟
LVEF(%)74.47±2.5074.05±4.19
44.39±2.04※
55.15±2.28﹟
LVFS(%)39.72±2.23
39.49±3.63
20.39±1.01※
26.35±1.28﹟
与假手术组相比,※P<0.05;与心衰组相比,﹟P<0.05假手术组(n=8)假手术稳心颗粒组(n=8)心衰组(n=7)心衰稳心颗粒组(n=7)
结果稳心颗粒改善心衰家兔的心功能LVEDD(mm)1.30±0稳心颗粒能提高心衰家兔的LVEF和LVFS*P<0.05,与假手术组比较,#P<0.05,与心衰组比较
结果稳心颗粒能提高心衰家兔的LVEF和LVFS心衰组RyR2mRNA表达降低,稳心颗粒对RyR2表达无影响RyR2β-actin
1.
shame2.shame-drug3.HF4.HF-drug149bp184bp
12341234*P<0.05
结果心衰组RyR2mRNA表达降低,稳心颗粒对RyR2表达无影心衰组SERCA2a表达降低,心衰稳心颗粒组
SERCA2a表达水平上调
143bp184bpSERCA2aβ-actin1.shame2.shame-drug3.HF4.HF-drug*P<0.05,与假手术组比较,#P<0.05,与心衰组比较123
4
1234
结果心衰组SERCA2a表达降低,心衰稳心颗粒组
SE各组间PLB表达无显差异146bp184bpPLBβ-actin1.shame2.shame-drug3.HF4.HF-drug
12341234P>0.05
结果各组间PLB表达无显差异146bp184bpPLBβ-act心衰组NCXmRNA和蛋白水平表达降低
稳心颗粒对NCX表达无影响133bp184bpNCXβ-actin*P<0.05vs假手术组1.
shame2.shame-drug3.HF4.HF-drug123
41234结果心衰组NCXmRNA和蛋白水平表达降低
稳心颗粒对NC本研究采用主动脉瓣返流联合腹主动脉缩窄致左室压力和容量超负荷的方法成功制作家兔心衰模型
稳心颗粒可增加容量和压力超负荷心衰兔的LVEF和LVFS,改善左室收缩功能结论本研究采用主动脉瓣返流联合腹主动脉缩窄致左室压力和容量超负荷结论稳心颗粒改善心衰心功能的机制SERCA2a表达↑SR摄钙能力↑SR钙容量↑钙瞬变↑稳心颗粒收缩功能↑舒张期Ca2+浓度↓舒张功能↑胞浆Ca2+清除率↑结论稳心颗粒改善心衰心功能的机制SERCA2aPLB表达水平不变SERCA表达水平↑PLB/SERCA2a水平比值↓PLB对SERCA2a的抑制作用↓SERCA2a功能↑稳心颗粒改善心衰心功能的机制结论PLB表达水平不变SERCA表达水平↑PLB/SER 心衰组NCXmRNA和蛋白表达减少,可能与心衰分期有关,相关的机制还需要进一步研究。结论 心衰组NCXmRNA和蛋白表达减少,可能与心衰分期有关
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