毛细管电泳法测定栀子金花丸中黄芩苷的含量

毛细管电泳法测定栀子金花丸中黄芩苷的含量【摘要】目的建立栀子金花丸中黄芩苷的含量测定方法。方法采用未涂层弹性融硅石英毛细管柱(60cm×75μm，有效长度52cm)，以40mmol·L-1硼砂溶液()为运行缓冲液;分离电压为12kV;重力进样10s(高度15cm);检测波长为280nm;以对硝基苯甲酸为内标。结果黄芩苷质量浓度在～μg·mL-1范围内具有良好的线性关系(r=6)，黄芩苷平均回收率为%，RSD值为%(n=6)。结论该方法专属性强，结果准确可靠、重现性好，可用于栀子金花丸的质量控制。

【关键词】毛细管电泳法;栀子金花丸;黄芩苷

Abstract:ObjectiveToestablishthemethodforthedeterminationofbaicalininZhizijinhuapillsbycapillaryelectrophoresis.MethodsTheseparationwasperformedinanuncoatedfusedsilicacapillaryof60cm×75μmID(52cmeffectivelength).Therunningbufferwes40mmol·L-1Na2B4O7buffersolution().Thevoltageappliedwas12kV.Thesamplewasinjectedbygravity(10s，15cm).Thedetectionwavelengthwas280nm,andtheinternalstandardwaspnitrobenzoicacid.ResultsThelinearrangeofbaicalinwasμg·mL-1(r=6).Theaveragerecoveryforbaicalinwas%(RSD=%,n=6).ConclusionThemethodprovedtobeexclusive,convenient,rapidandwellrepeatable，andcanbeusedforquantitativedeterminationofZhizijinhuapills.

Keywords:capillaryelectrophoresis;Zhizijinhuapills;baicalin

栀子金花丸是由栀子、黄芩、黄连、黄柏等8味药材制成的中药成方制剂，具有清热泻火、凉血解毒之功效。用于肺胃热盛，口舌生疮，牙龈肿痛，目赤眩晕，咽喉肿痛，吐血衄血，大便秘结等的治疗。栀子金花丸的现行标准采用HPLC法测定制剂中栀子苷的含量，亦有其他文献报道采用HPLC法测定其中黄芩苷、栀子苷、绿原酸等成分的含量[2～6]，但采用毛细管电泳法对栀子金花丸进行质量控制的方法尚未见报道。本文采用毛细管电泳法测定栀子金花丸中黄芩苷的含量，为更好地控制栀子金花丸质量提供了依据。

1仪器与试药

仪器

CL1030型高效毛细管电泳仪(北京彩陆科学仪器有限公司)，KNAUERK2501紫外-可见检测器(德国)，HW2000色谱站版(南京千谱有限公司)。ORIONMODEL828型pH计(美国)。DL360超声波清洗器[宁波石浦海天电子仪器厂，频率(±)kHZ，功率240W]。未涂层弹性融硅石英毛细管柱(河北锐年永沣色谱器件有限公司)。

试药

黄芩苷(中国药品生物制品检定所，批号110715-200815)。栀子金花丸(山东孔圣堂制药有限公司，批号090457、090546、090741，规格9g·袋-1)。甲醇为色谱纯;硼砂、对硝基苯甲酸、NaOH均为分析纯;水为双蒸水。

2方法与结果

溶液的制备

内标溶液的制备精密称取对硝基苯甲酸适量，加水制成100μg·mL-1的内标贮备液。

对照品贮备液的制备精密称取在60℃减压干燥4h的黄芩苷对照品15mg，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液(黄芩苷质量浓度为150μg·mL-1)。

供试品溶液的制备取栀子金花丸样品，研碎，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%(体积分数)甲醇50mL，称定重量，超声处理40min，放冷，再称定重量，用70%(体积分数)甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液10mL至蒸发皿中，水浴挥干，再用70%(体积分数)甲醇溶解转移至10mL量瓶中，加入内标溶液mL，用70%(体积分数)甲醇稀释至刻度，摇匀，μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。

阴性对照液的制备取处方组成中除黄芩外的其余药材，制成不含黄芩的阴性对照品，按“”项下方法处理，即得。

运行缓冲液的制备精密称取硼砂适量，加水制成40mmol·L-1硼砂溶液(pH=)，μm微孔滤膜滤过，作为运行缓冲液。

电泳条件

采用未涂层弹性融硅石英毛细管柱(60cm×75μm，有效长度52cm);以40mmol·L-1硼砂溶液()为运行缓冲液;分离电压为12kV;重力进样10s(高度15cm);检测波长为280nm;温度为室温，湿度小于70%。毛细管柱在使用前依次用mol·L-1NaOH溶液和水冲洗15～20min，再用运行缓冲液冲洗约5min。以对硝基苯甲酸为内标。在此条件下进行测定，对照品、供试品、阴性对照溶液色谱见图1。

方考察

标准曲线的制备分别吸取对照品贮备液适量，加甲醇稀释成黄芩苷质量浓度为、、、、、、μg·mL-1，内标物质量浓度为μg·mL-1的溶液。依次重力进样10s，每个浓度测定3次以上。以对照品与内标峰面积的比值为纵坐标(Y)，黄芩苷质量浓度(ρ)为横坐标进行线性回归，得回归方程Y=ρ-，r=6。表明黄芩苷在～μg·mL-1范围内线性关系良好。

精密度试验取质量浓度为g·mL-1的黄芩苷对照品溶液，按“”项下电泳条件，连续测定5次，记录峰面积并计算RSD值。结果黄芩苷峰面积的RSD=%，表明仪器精密度良好。

稳定性试验取供试品溶液(批号090741)，在0、2、4、6、8、12h分别重力进样10s，记录峰面积并计算RSD。结果黄芩苷峰面积的RSD=%，表明供试品溶液在12h内稳定。

重复性试验取同一批号(批号090741)的栀子金花丸样品6份，按“”项下方法制备供试品溶液，依法测定。结果栀子金花丸中黄芩苷的平均含量为mg·g-1，RSD=%(n=6)。表明重复性良好。

加样回收率试验精密称取栀子金花丸样品(批号090741)共6份，加入黄芩苷对照品适量，按“”项下方法处理并依法测定，计算回收率，结果见表1。栀子金花丸中黄芩苷的平均回收率为%,RSD=%。表1加样回收率试验

样品测定

取栀子金花丸样品3批，按“”项下方法处理后依法测定，记录峰面积，代入回归方程计算样品中黄芩苷的含量，结果见表2。表2样品含量测定

3讨论

提取方法的选择参考有关文献[7，8]中黄芩苷的提取方法，本实验先后以50%(体积分数)甲醇、70%(体积分数)甲醇、甲醇为溶剂进行超声提取。结果表明，样品采用70%(体积分数)甲醇超声提取基本完全，且黄芩苷与杂质峰分离度较好。同时考察了不同提取时间(30、40、50min)对提取效率的影响，结果显示超声40min时提取率已达最高，超声时间延长而提取率并未提高。因此，确定以70%(体积分数)甲醇为提取溶剂，超声提取40min。

内标物的选择毛细管电泳有重现性差的缺点，因此采用内标法定量。苯甲酸钠、对氨基苯甲酸以及对硝基苯甲酸在280nm波长处均有吸收。预实验结果表明，苯甲酸钠在体系中不出峰;对氨基苯甲酸灵敏度低，且出峰时间与黄芩苷过于接近，容易产生干扰;对硝基苯甲酸峰型好，虽出峰时间与黄芩苷接近，但在样品中无干扰，故选其作为内标物。

运行缓冲液的选择黄芩苷极性较强，容易离子化;而在硼砂溶液中，黄芩苷中邻二羟基基团更易形成络离子[10]，加快离子化。因此选择硼砂溶液为运行缓冲液，并通过实验确定其最佳浓度为40mmol·L-1。

采用毛细管电泳法测定栀子金花丸中黄芩苷含量，与高效液相色谱法相比[1，5，6]具有样品用量少，分析成本低等优点，并减少了对的污染，可用于栀子金花丸的质量控制。

【参考文献】

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李彤彤，李宏，侯茂君，等.黄芩化学成分及黄芩苷提取方法研究进展[J].天津药学，2002，14(3)：7-8.

宋粉云，龚红全，林琳，等.毛细管电泳法测定银黄胶囊及银黄颗粒中黄芩苷和绿原酸的含量[J].广东药学院学报，2007，23(3)：231-233.

[10]陈义.毛细管电泳技术及[M].北京：化学工业出版社，2000.

方考察

标准曲线的制备分别吸取对照品贮备液适量，加甲醇稀释成黄芩苷质量浓度为、、、、、、μg·mL-1，内标物质量浓度为μg·mL-1的溶液。依次重力进样10s，每个浓度测定3次以上。以对照品与内标峰面积的比值为纵坐标(Y)，黄芩苷质量浓度(ρ)为横坐标进行线性回归，得回归方程Y=ρ-，r=6。表明黄芩苷在～μg·mL-1范围内线性关系良好。

精密度试验取质量浓度为g·mL-1的黄芩苷对照品溶液，按“”项下电泳条件，连续测定5次，记录峰面积并计算RSD值。结果黄芩苷峰面积的RSD=%，表明仪器精密度良好。

稳定性试验取供试品溶液(批号090741)，在0、2、4、6、8、12h分别重力进样10s，记录峰面积并计算RSD。结果黄芩苷峰面积的RSD=%，表明供试品溶液在12h内稳定。

重复性试验取同一批号(批号090741)的栀子金花丸样品6份，按“”项下方法制备供试品溶液，依法测定。结果栀子金花丸中黄芩苷的平均含量为mg·g-1，RSD=%(n=6)。表明重复性良好。

加样回收率试验精密称取栀子金花丸样品(批号090741)共6份，加入黄芩苷对照品适量，按“”项下方法处理并依法测定，计算回收率，结果见表1。栀子金花丸中黄芩苷的平均回收率为%,RSD=%。表1加样回收率试验

样品测定

取栀子金花丸样品3批，按“”项下方法处理后依法测定，记录峰面积，代入回归方程计算样品中黄芩苷的含量，结果见表2。表2样品含量测定

3讨论

提取方法的选择参考有关文献[7，8]中黄芩苷的提取方法，本实验先后以50%(体积分数)甲醇、70%(体积分数)甲醇、甲醇为溶剂进行超声提取。结果表明，样品采用70%(体积分数)甲醇超声提取基本完全，且黄芩苷与杂质峰分离度较好。同时考察了不同提取时间(30、40、50min)对提取效率的影响，结果显示超声40min时提取率已达最高，超声时间延长而提取率并未提高。因此，确定以70%(体积分数)甲醇为提取溶剂，超声提取40min。

内标物的选择毛细管电泳有重现性差的缺点，因此采用内标法定量。苯甲酸钠、对氨基苯甲酸以及对硝基苯甲酸在280nm波长处均有吸收。预实验结果表明，苯甲酸钠在体系中不出峰;对氨基苯甲酸灵敏度低，且出峰时间与黄芩苷过于接近，容易产生干扰;对硝基苯甲酸峰型好，虽出峰时间与黄芩苷接近，但在样品中无干扰，故选其作为内标物。

运行缓冲液的选择黄芩苷极性较强，容易离子化;而在硼砂溶液中，黄芩苷中邻二羟基基团更易形成络离子[10]，加快离子化。因此选择硼砂溶液为运行缓冲液，并通过实验确定其最佳浓度为40mmol·L-1。

采用毛细管电泳法测定栀子金花丸中黄芩苷含量，与高效液相色谱法相比[1，5，6]具有样品用量少，分析成本低等优点，并减少了对的污染，可用于栀子金花丸的质量控制。

【参考文献】

国药典委员会.中华人民共和国药典：201