不同产地艾叶挥发性有机物含量测定

不同产地艾叶挥发性有机物含量测定

aihiliaargirevl和etvart.干燥的叶子在中国广泛分布。其中大部分是用苦艾酒制成的。2010年版。其化学成分复杂,主要成分是挥发油,其次还有鞣质、黄酮类、甾醇类、多糖类、微量元素等。中国药典测定艾叶含量的指标只有桉油精,艾叶含有多种挥发油成分,不同产地艾叶成分由于环境、气候等差别有着明显差异。古今文献有端午采艾之说,本文建立了同时测定端午当天艾叶中桉油精、侧柏酮、樟脑、龙脑4个挥发性成分含量的方法,为艾叶质量标准的提高提供了依据。1材料来源药品气相色谱仪(GC,AgilentTechnologies6980N,FID检测器),安捷伦HP-5毛细管柱(30m×0.32mm×0.25μm)。正己烷(色谱纯,天津市四友精细化学品有限公司);15个不同产地艾叶(湖北蕲春、湖北襄樊、北京、陕西西安、江西南昌、山西太原、安徽合肥、甘肃兰州、河北安国、黑龙江、河南浙川、河南桐柏、河南郑州、河南固始、河南安阳),均采摘于2010年端午节当天(2010年6月16日),阴干,密封保存。由北京市药品检验所药师鉴定为正品艾叶;对照品桉油精(批号110788-9202)、樟脑(批号110747-200507)、龙脑(批号110881-200706)均购于中国食品药品检定研究院;侧柏酮(批号89231-1ML)购于SIGMA-ALORICH公司。2方法和结果2.1混合溶液的配制混合对照品溶液①:精密称取桉油精、侧柏酮、樟脑、龙脑适量,以正己烷配制浓度分别为1.8078、1.2305、0.2760、0.5027mg·mL-1的混合溶液,即得;混合对照品溶液②:精密吸取对照品溶液①4mL于10mL量瓶中,加正己烷稀释至刻度,制成含桉油精、侧柏酮、樟脑、龙脑的浓度分别为0.7231、0.4922、0.1104、0.2011mg·mL-1的混合溶液,即得。2.2挥发油提取器支管的制备将艾叶剪碎,取5g,精密称定,置于500mL圆底烧瓶中,连接挥发油提取器,加入蒸馏水250mL,在挥发油提取器支管中加入正己烷2mL,加热回流4h,放冷,收集正己烷液置于10mL量瓶中,加正己烷定容至刻度,摇匀,即得。2.3对照品、样品采用安捷伦HP-5毛细管柱(30m×0.32mm×0.25μm);载气为高纯氮气(99.99%),流速为0.6mL·min-1,分流比为10∶1;进样口温度:240℃,进样量1μL,检测器温度250℃;程序升温:起始温度50℃,以4.0℃·min-1升至75℃,保持10min,以1.0℃·min-1升至100℃,以8.0℃·min-1升至150℃,保持2min,以3.0℃·min-1升至165℃,保持5min,以8.0℃·min-1升至250℃,保持3min。在上述色谱条件下,对照品及样品(湖北蕲春)色谱图见图1。1.桉油精(eucalyptol)2.侧柏酮(thujone)3.樟脑(camphor)4.龙脑(borneol)2.4方法研究2.4.1标准曲线的绘制以正己烷为溶剂配制桉油精、侧柏酮、樟脑、龙脑浓度分别为3.8739、2.0500、0.5520、1.0054mg·mL-1的对照品溶液A;准确移取对照品溶液A2mL于5mL量瓶中,以正己烷定容,得对照品溶液B;准确移取对照品溶液B2mL于5mL量瓶中,以正己烷定容,得对照品溶液C;准确移取对照品溶液C2mL于5mL量瓶中,以正己烷定容,得对照品溶液D;准确移取对照品溶液D2mL于5mL量瓶中,以正己烷定容,得对照品溶液E;将对照品溶液E稀释1倍即得对照品溶液F;另外因为个别样品中侧柏酮含量较高,单独配制高浓度侧柏酮溶液4.1018mg·mL-1。取上述不同浓度对照品溶液各1μL,分别进样测定。以各成分浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,各成分在一定范围内相关性良好。各成分回归方程及线性范围见表1。2.4.2仪器精密度试验精密吸取混合对照品溶液②1μL,注入气相色谱仪,连续进样6次,测定桉油精、侧柏酮、樟脑、龙脑峰面积,结果峰面积的RSD<0.5%,表明仪器精密度良好。2.4.3稳定性分析取同一批湖北蕲春采集的艾叶样品,按“2.2”项下方法制备供试品溶液,分别于室温放置0、1、2、4、8、16、24h,精密吸取1μL进行GC分析,测定桉油精、侧柏酮、樟脑、龙脑峰面积,结果峰面积的RSD<2%,表明供试品溶液在24h内稳定性良好。2.4.4gc-ms分析取同一批湖北蕲春采集的艾叶样品6份,按“2.2”项下方法制备供试品溶液,精密吸取各供试品溶液1μL,进行GC分析,通过外标法计算各样品挥发油成分含量,RSD<3%,表明该方法重复性良好。2.4.5加标回收率的测定精密称取湖北蕲春采集的艾叶样品2.5152g、2.5200g、2.5314g、2.5214g、2.4518g、2.5319g,分别置于500mL量瓶中,加入水250mL,加入混合对照品溶液①2mL,加热回流4h,收集正己烷,以正己烷定容在10mL量瓶中,制得供试溶液。分别取供试溶液和混合对照品溶液②进行GC分析,以外标法计算各成分的量,求得回收率,结果桉油精、侧柏酮、樟脑、龙脑的回收率分别在97%~103%、96%~103%、95%~101%、95%~103%之间,且RSD<3%。各待测成分平均回收率见表2。2.5挥发性成分的测定取不同产地的艾叶样品,按“2.2”项下方法制备供试品溶液,精密吸取各供试品溶液1μL,进样3针,进行GC分析,按外标法以干燥品计算不同产地艾叶中4个挥发性成分的含量,测定结果见表3。3不同产地叶挥发性成分的检测3.1曾采用本法同时对样品中石竹烯进行含量测定,但回收率在75%~94%之间,平均回收率87.6%,回收率不佳无法定量。这种情况可能与石竹烯较难挥发有关,回流4h并不能将其充分提取,但回流时间过长可能会导致易挥发的成分回收率降低。所以该方法不适合同时对艾叶中石竹烯进行定量测定。3.2中国药典艾叶的含量测定中,艾叶需要粉碎,取粉末(过3号筛),然后进行前处理。但艾叶经粉碎加工会变成绒状,筛去渣滓后就是艾灸用的艾绒,按中国药典的方法所用的粉末只是艾叶中的叶肉部分,所测含量并不包括整体艾叶。所以样品应该剪碎,然后进行前处理、检测。3.3比较水蒸气蒸馏法和正己烷加热回流法提取艾叶挥发性成分,相同气相色谱条件下进行检测,前者所得化学成分峰面积较大,所以选用水蒸气蒸馏法提取挥发性成分;同一批样品采用水蒸气蒸馏法分别提取2、3、4、5、6h,相同气相色谱条件下,提取4h的艾叶挥发性成分峰面积较大,所以提取时间采用4h;由于艾叶挥发性成分复杂,色谱峰多不易分离,本法采用了程序升温的色谱条件,在该方法下各峰分离程度理想。3.4在相同实验条件下用气质联用仪对艾叶挥发性成分进行定性分析,结果示不同产地艾