丹参酒制方法与其水溶性有效成分含量的关系

丹参酒制方法与其水溶性有效成分含量的关系作者：石勇强，王玉作者单位：徐州市中心医院中药科【摘要】目的：研究不同酒制方法对丹参水溶性总酚含量的影响，进而探讨丹参的较佳炮制工艺。方法：运用不同的酒炙法及酒烘法对丹参进行炮制，采用2005版中国药典一部附录规定的冷浸法对生品及各炮制品的水溶性总酚进行提取，并利用紫外分光光度法对生品及各炮制品的水溶性总酚含量进行测定，测定波长为280nm。结果：丹参及各炮制品其水溶性有效成分含量由高至低排列如下：白酒烘（酒精浓度为50%）、白酒炙（酒精浓度为50%）、黄酒炙、白酒炙（酒精浓度为39%）、黄酒烘、白酒烘（酒精浓度为39%）、生丹参。结论：丹参经过酒制后，其水溶性总酚含量均有不同程度的提高。而白酒烘（酒精浓度为50%）能最大程度浸出其水溶性有效成分，故此为较优的丹参炮制方法。【关键词】丹参；（黄/白）酒炙;（黄/白）酒烘;紫外分光光度法;水溶性总酚;原儿茶醛在对丹参化学及药理学的研究表明：丹参中的有效成分有两类，一类是脂溶性丹参酮类化合物，如丹参酮IIA、隐丹参酮等;另一类是水溶性的丹参酚酸类成分，如丹参素、丹酚酸B等。二十世纪早期的研究主要集中在以丹参酮为代表的脂溶性成分方面。《中国药典》把丹参酮IIA作为唯一的药效活性指标成分。但越来越多的研究表明：丹参中丹参酚酸类成分具有多种多样的生理活性，如抗氧化作用、对心血管系统的保护作用和对脑组织细胞损伤的保护作用等。丹参或复方丹参注射液等以水溶性成分为主的制剂在临床上良好的应用效果充分说明了这一点。从中体现出丹参的水溶性有效成分存在着一定的研究价值。现在，丹参在国内各大型医疗机构里的应用还是比较广泛，属于常用的中药饮片之一；而在每间医疗机构里，丹参炮制品的应用种类亦有所不同，其疗效亦相应有所差异。而尽管关于丹参炮制的研究很多，且以酒炙法居多，但是对于利用酒烘法对丹参进行炮制的有关报道却很少见。本次实验主要针对丹参的生品与其酒烘品、酒炙品之间的有效成分一一水溶性酚类的含量进行分析，比较丹参在酒制前后，其有效成分的变化。从而更有效地应用炮制方法加强中药饮片的成效，使其有效成分最大限度地发挥出作用。1仪器与试药1.1仪器UNICOUV-200紫外分光光度计（尤尼可上海有限公司），金马牌JPT-5架盘天平，SHIMADZUAUY120Max120d=0.1mg型电子天平，予华SHZ-D（III）循环水式真空泵，DHG-9076A型电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司），EHUI乐辉牌600w/1500w/2100w/锅炉，威尔HH-4电子恒温水浴锅，KQ2200B超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司），DFY-200200g摇摆式高速中药粉碎机（温岭市大德中药机械有限公司）。1.2试药原儿茶醛对照品（含量测定用，中国药品生物制品检定所，批号：110810-200506，规格：约50mg/瓶）,丹参饮片（广州致信中药饮片有限公司，生产批号：081210，规格：1kg/

袋），黄酒（“陈年花雕”，杭州浙牌酒业有限公，浓度为15%［ml/ml］）,白酒（尖庄牌浓香型白酒，浓度分别为39%［ml/ml］及50%［ml/ml］），其余试剂为分析纯。2炮制本实验共研究6个丹参炮制品，分别为黄酒烘、黄酒炙、酒精浓度39%白酒烘、酒精浓度50%白酒烘、酒精浓度39%白酒炙、酒精浓度50%白酒炙。炮制方法见表1表1炮制品的准备炮制用量、温度及时间见表2表2炮制用量、温度及时间表3炮制后性状3含量测定3.1对照品溶液的制备精密称取原儿茶醛0.0028g，置100ml容量瓶中，加蒸馏水溶解至刻度，摇匀即可。标准液浓度为28pg/ml03.2供试品溶液的制备各取丹参样品粉末约4g，精密称定，置250至300ml的锥形瓶中，精密加水100ml，密塞，前6小时内利用超声清洗器振摇，再静置18小时，用干燥滤器滤过，精密量取续滤液20ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105摄氏度干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量，定容到100ml容量瓶中。见表4及表5。表4提取用量、超声及静置时间表5干燥温度、时间及被提取成分质量3.3色谱条件与系统适用性实验最大紫外吸收值测定：丹参水溶性酚性成分在281±3nm波长处有最大吸收，故可将此特性作为酒制丹参的定性标准之一。分别取各待测样品溶液，在可见紫外分光光度计上扫描，在280nm处有最大吸收。3.4线性关系考察精取原儿茶醛标准溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分别置25ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，即得浓度为1.16pg/ml，2.32pg/ml，3.48pg/ml，4.64pg/ml，5.80pg/ml的原儿茶醛对照品溶液。置1cm石英比色池中，以蒸馏水为空白对照，于280nm波长处测定吸收度［7］。以测得吸光度为Y辄以标准品浓度（pg/ml）为X轴绘制标准曲线，得回归方程:y=0.0669x-0.0174，相关系数:r=0.9996，表明原儿茶醛对照品进样量在1.16pg/ml〜5.80pg/ml之间有良好的线性关系。结果见表6。表6标准品吸光度3.5精密度实验取原儿茶醛对照品液连续测定6次，吸光度的RSD=0.35%，小于2%，表明方法精密度良好。结果见表7。表7精密度实验结果3.6稳定性实验取同一供试品液，分别在0，1,2,4,8h，于280nm波长处测定吸光度，吸光度的RSD=0.39%，表明吸光度无明显变化，本品至少在8h内稳定。结果见表8。表8稳定性实验结果3.7含量测定

供试品液均分别取0.2ml，加蒸馏水稀释至25ml摇匀，待测。将各待测液以蒸馏水为空白，分别在280nm处测定吸收度，利用回归方程计算各样品的水溶性总酚含量。其结果见表9及表10。表9供试品吸光度利用上述回归方程：y=0.0669x-0.0174,将各样品吸光度代入其中计算，得出结果见表10。表10各样品水溶性总酚含量3.8加样回收率实验精密称取已知原儿茶醛含量的供试品5份，加入一定量的原儿茶醛对照品，按样品测定项下操作。按公式：回收率（%）=（测得量-供试品量）/添加对照品量*100%计算回收率。结果见表11。表11加样回收率实验结果4讨论4.1本实验中的丹参水溶性总酚含量测定结果表明，总酚含量的高低顺序为：白酒烘（酒精浓度为50%）、白酒炙（酒精浓度为50%）、黄酒炙、白酒炙（酒精浓度为39%）、黄酒烘、白酒烘（酒精浓度为39%）、生丹参。4.2本实验发现，利用酒精浓度为50%的白酒烘法和酒精浓度为50%的白酒炙法对丹参进行炮制，其水溶性总酚含量均高于黄酒炙法，且利用酒精浓度为50%的白酒烘法炮制的样品，其水溶性总酚含量浸出程度最好。但虽然同是白酒烘法与白酒炙法，酒精浓度为39%的白酒烘法与酒精浓度为39%的白酒炙法，其炮制品的水溶性总酚含量却低于黄酒炙样品。说明在酒制中，酒的浓度对丹参水溶性总酚含量有影响。4.3丹参中所含丹酚酸类成分随着加热时间的延长，丹酚酸B等大分子物质水解为丹参素，造成提取时间越长，丹酚酸B的含量越少，丹参素的含量越高。本实验按冷浸法对丹参的水溶性总酚进行提取，提取总时间为24小时，结果未见水溶性总酚含量有所降低。4.4利用紫外分光光度法测定了丹参及酒参、炒丹参、丹参碳及醋丹参这四种炮制品中原儿茶醛的含量。结果显示：丹参炮制后，原儿茶醛含量均有不同程度的下降。原儿茶醛成分在水液中不稳定，时间长了进行分解，在实际操作的时候标准溶液需要现配现用。出现丹参炮制后，原儿茶醛含量均有不同程度的下降，这可能是因为配备好的标准液以及供试液没有及时使用，以至于原儿茶醛在长时间的放置中进行了分解，导致了其含量的下降，以致出现上述结果。本实验中的标准品及供试品均现配现用，实验结果显示经炮制后的样品，其水溶性总酚含量均高于生品。结语丹参是一种用于治疗血瘀痛证的常用中药，具有活血调经，祛瘀止痛，凉血消痈，清心除烦，养血安神等功效，临床主要应用于胸肋胁痛，风湿痹痛，症瘕结块，疮疡肿痛，跌仆伤痛，月经不调，经闭痛经等症。本次研究利用酒炙及酒烘方法对丹参饮片进行炮制，并利用紫外分光光度计测定其炮制后的水溶性总酚含量，找出丹参饮片相对较优的炮制方法，使丹参的有效成分能更好地发挥其治疗作用，为丹参炮制的炮制工艺研究提供相应的依据。【参考文献】李磊、戴金凤、黎先春等.丹参水溶性标准提取物生物活性研究[J].现代中药研究与实

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