18-24章螺旋体等及真菌(检验)

第十八章螺旋体(Spirochete)——是一类细长、柔软、弯曲呈螺旋状、运动活泼的原核细胞型微生物。介于细菌和原虫之间分类：螺旋体目螺旋体科八个属〔Ⅰ~Ⅷ〕Ⅰ，Ⅴ，Ⅷ三个属为致病性螺旋体第一节分类与命名疏螺旋体属〔Ⅰ〕：螺旋3~10个，稀疏、粗、浅，不规那么。如：奋森疏螺旋体密螺旋体属〔Ⅷ〕：螺旋8~14个、细密、深、规那么、两端尖直。如：梅毒螺旋体钩端螺旋体属〔Ⅴ〕：螺旋细密、规那么，两端或一端呈钩状。如：问号状钩端螺旋体问号钩端螺旋体：致病双曲钩端螺旋体：无致病性第二节钩端螺旋体(Leptospira)一、临床意义1.致病物质：内毒素样物质〔ELS〕/脂多糖样物质〔LLS)溶血素细胞毒性因子〔GTF〕细胞致病作用物质2.所致疾病钩体病〔打谷黄〕，自然疫源性疾病，人畜共患病传染源和储存宿主：鼠类、幼猪传播途径：皮肤粘膜接触疫水、胎盘、消化道、吸血昆虫易感人群：农民、饲养员、矿工临床表现寒热酸痛一身软，眼红腿痛淋巴大。〔尤其是腓肠肌压痛明显〕⒈形态染色：⑴具有细密而规那么的螺旋，菌体一端或两端弯曲成钩状⑵Fontana镀银染色：棕褐色图⑶电子显微镜：轴丝，“内鞭毛〞⑷暗视野显微镜：观察活标本可见运动二、生物学特性⒉抗原构造属特异性抗原群特异性抗原型特异性抗原显微镜凝集试验〔ＭＡＴ〕凝集素吸收试验〔ＡＡＴ〕⒊基因组⒋培养特性营养要求高；常用Korthof培养基〔柯索夫培养基〕，生长缓慢；最适温度为28～30℃；最适pH为7.2~7.6；在液体培养基中呈半透明云雾状生长；在固体培养基中形成透明、不规那么、直径约2mm的扁平菌落。⒌抵抗力：在自然界存活力强耐潮湿、耐碱〔NaHCO3碱化尿液〕；对热敏感；对普通化学消毒剂敏感；对青霉素敏感。〔一〕检验程序见图18-2〔二〕标本采集：第一周内取血第二周取尿液或脑脊液三、微生物学检验〔三〕标本直接检查1.直接显微镜检查暗视野显微镜检查普通光镜检查〔Fontana镀银染色〕直接免疫荧光法检查2.核酸检查：PCR、特异DNA探针法〔四〕别离培养及鉴定Korthof培养基暗视野检查、镀银染色，血清学鉴定。〔五〕抗体检测1.显微镜凝集试验〔凝集溶解〕：钩体+血清小蜘蛛样凝集血清中补体含量高凝集稍后溶解效价＞1:300，取双份血清，抗体效价呈4倍增高

2.间接凝集试验：钩体+炭粒〔乳胶〕+待测血清结果炭粒(>1:8)；乳胶(>1:2)3.酶联免疫吸附试验〔六〕动物试验：标本豚鼠腹腔接种1.3~5d腹腔抽取液暗视野2.3~6天取心脏血检查及别离培养3.死亡动物解剖：第三节密螺旋体属——梅毒螺旋体(T.pallidum,TP)一、临床意义〔一〕致病物质外膜蛋白：粘附作用荚膜样物质：外表粘多糖和唾液酸透明质酸酶㈡所致疾病1、传染源和宿主都是人2、传播途径：先天梅毒：胎盘 后天梅毒：性接触3、疾病特点：〔1〕后天梅毒〔获得性梅毒〕：分为三期：Ⅰ期梅毒〔初期，初疮〕——无痛性硬下疳，病灶中有大量螺旋体，传染性极强，可4~8周自然愈合，Ab〔+/-〕，活检〔+〕图Ⅱ期梅毒〔中期〕——硬下疳后2~8周全身皮肤粘膜梅毒疹，淋巴结肿大，有螺旋体，传染性极强，此期可反复，Ab〔+〕，活检〔+〕图Ⅲ期梅毒〔晚期〕——累及全身，根本损害为慢性肉芽肿，大片溃疡，梅毒瘤，危及生命，无螺旋体，传染性小，Ab〔+〕，活检〔-〕图⑵先天梅毒〔胎传梅毒〕经胎盘进入胎儿所致多发生于妊娠4个月之后表现：流产、早产、死胎、先天畸形〔马鞍鼻、锯齿形牙、间质性角膜炎、神经性耳聋〕二、生物学特性1、形态与染色：图8~14个致密规那么的螺旋，两端尖直，运动活泼，Fontana镀银染色呈棕褐色2、培养：尚未成功〔人工无生命培养基〕3、抵抗力：极弱对温度敏感，50℃5min,4℃3天死亡；对枯燥敏感；对肥皂、青霉素敏感。三、微生物学检验1、检验程序见图18-52、标本采集分泌物、渗出液、穿刺液、组织块Ⅰ期梅毒取下疳分泌物Ⅱ期梅毒取梅毒疹渗出液或淋巴结穿刺液先天性梅毒：脐血3、标本直接检查直接显微镜检查核酸检测4、体外培养5、抗体检测〔1〕非密螺旋体抗原试验：VDRL试验和RPR试验〔2〕密螺旋体抗原试验〔1〕非密螺旋体抗原试验VDRL(性病研究实验室〕试验原理：胆固醇〔载体〕+心脂质〔抗原〕——致敏颗粒检测血清中的反响素表现：絮凝块状物结果需要低倍显微镜观察RPR〔快速血浆反响素环状卡〕试验原理活性炭颗粒〔载体〕+心脂质〔抗原〕——致敏颗粒检测血清中的反响素表现：黑色凝集块结果可肉眼观察FTA-ABS〔荧光密螺旋体抗体吸收〕试验FTA-ABS-DS〔梅毒螺旋体荧光抗体双染色〕试验MHA-TP〔抗梅毒螺旋体抗体微量血凝〕试验ELISA〔血清学诊断首选试验〕TPPA梅毒螺旋体抗体明胶颗粒凝集试验〔筛查阳性标本确诊试验〕〔2〕密螺旋体抗原试验第十九章支原体(Mycoplasma)——是一类缺乏细胞壁，呈多形性，能通过细菌滤器，并能在无生命培养基中独立生长繁殖的最小的原核细胞型微生物。支原体科：支原体属(Mycoplasma)、脲原体属(Ureaplasma)对人致病的支原体：肺炎支原体、溶脲脲原体〔解脲脲原体〕、人型支原体、生殖器支原体、穿通支原体等分类与命名一、临床意义〔一〕致病物质及机制黏附素：粘附和定植功能多糖荚膜：抗吞噬作用3.毒性代谢产物〔如神经毒素、超氧离子、氨等〕，引起细胞损伤4.超抗原〔二〕所致疾病支原体感染部位所致疾病肺炎支原体呼吸道上呼吸道感染、非典型肺炎、支气管炎、肺外症状人型支原体呼吸道、生殖道附睾炎、盆腔炎、产褥热生殖器支原体生殖道尿道炎溶脲脲原体呼吸道、生殖道尿道炎穿通支原体生殖道协同HIV致病二、生物学特性1、形态结构A.无细胞壁，呈多形性B.细胞膜胆固醇含量高C.某些支原体具有荚膜D.某些支原体具有顶端结构，与侵袭性有关2、抗原结构糖脂抗原和蛋白质抗原3、培养特性⑴营养要求高：胆固醇、脂肪酸⑵pH要求：7.6~8.0，低于7.0会死亡，溶脲脲原体5.5~6.5⑶气体环境：5%CO2⑷生长缓慢，可形成“荷包蛋样〞菌落⑸在液体培养基中呈极浅淡的浑浊性状支原体细菌L型细胞壁无无通过滤菌器能能对青霉素敏感性不敏感不敏感来源自然界、人与动物体内在一定条件下诱导细菌形成遗传性与细菌无关与原菌相同，去除诱导因素后，可回复为原菌培养含胆固醇培养基大多需高渗培养支原体与细菌L型比较5、生化反响支原体葡萄糖精氨酸尿素吸附细胞肺炎支原体+--红细胞人型支原体-+--生殖器支原体+---穿通支原体++-红细胞、CD4+T细胞、巨噬细胞溶脲脲原体--+-6、抵抗力A.对理化因素的抵抗力比细菌弱；B.作用于细胞壁的抗生素无效；C.对作用于胆固醇的药物敏感；D.对阻止蛋白质合成的抗生素敏感。三、微生物学检验〔一〕检验程序〔二〕标本采集：痰、咽拭子、鼻咽洗液、血清标本、尿、精液、分泌物等。〔三〕标本直接检查1．标本涂片2.核酸检测：PCR〔四〕别离与鉴定1、别离培养2、鉴定：生化反响、血清学试验〔五〕抗体检测ELISA、补体结合试验、间接血凝试验、冷凝集试验第二十章衣原体(chlamydia)——是一类严格细胞内寄生，具有独特发育周期，并能通过细菌滤器的原核细胞型微生物。分类与命名四个种：

沙眼衣原体鹦鹉热衣原体肺炎衣原体家畜衣原体一、临床意义1.致病物质蛋白质、LPS促进衣原体吸附易感细胞，侵入机体阻止吞噬体和溶酶体融合，使衣原体得以生存类似G-菌感染的炎症反响和迟发性变态反响使细胞释放IL-1类细胞因子，导致机体损伤2.致病机理入侵机体→吸附易感细胞→细胞内陷形成包涵体→衣原体分裂繁殖→破坏细胞→释放→感染其它细胞3、衣原体及其所致疾病肺炎衣原体致病性:1、经飞沫〔呼吸道〕传播。2、主要引起青少年急性呼吸道感染，以肺炎多见，也可致气管炎、咽炎。3、肺炎衣原体慢性感染可能与冠心病有关。鹦鹉热衣原体致病性：1、呼吸道传播。2、引起呼吸道感染和肺炎。沙眼衣原体的致病性:1.沙眼：间接或直接接触传播。2.包涵体结膜炎：经产道或污物而感染。3.泌尿生殖道感染：由性接触传播。4.沙眼衣原体肺炎：多见于婴幼儿，经呼吸道感染5.性病淋巴肉芽肿：主要由性接触传播。1、圆形或椭圆形，G-，不易着色，Giemsa染色呈紫色。图2、能通过细菌滤器；有DNA和RNA两种核酸；有肽聚糖组成的细胞壁。3、酶系统不够完善，活细胞内才能生长繁殖。4、有独特的生长发育周期，类似二分裂方式繁殖。5、抵抗力较弱，多种抗生素能抑制其生长。二、生物学特性发育周期：原体------始体------原体原体〔EB〕：小球形颗粒，具有细胞壁，是发育成熟的衣原体，为胞外形式，具感染性，无繁殖能力，在细胞内的空泡中发育始体〔网状体，RB〕：圆形，较大，无细胞壁，是繁殖体，不具感染性，在细胞内的空泡中繁殖为原体包涵体易感细胞内含繁殖的始体和子代原体的空泡性状原体始体大小（直径μm）0.2～0.40.5～1.0细胞壁+-代谢活性-++胞外稳定性+-感染性+-繁殖能力-+RNA∶DNA1∶13∶1表21－2原体和网状体的性状比较三、微生物学检验㈠标本采集痰、咽拭子、血液、分泌物、精液等㈡标本直接检查1.直接显微镜检查：观察有无包涵体包涵体即指在易感染细胞内含增殖的网状体和子代原体的空泡。成熟的包涵体含大量的原体，包涵体为嗜碱性，用Giemsa染色时呈蓝色或暗紫色，用碘染色时包涵体呈棕褐色，而其他细胞那么不着色，有利于鉴别。衣原体包涵体2．酶免疫检测3．胶体金法检测衣原体4．核酸检测：核酸杂交；PCR〔四〕别离培养与鉴定1、别离培养：细胞培养别离、鸡胚培养2、鉴定〔五〕抗体检测：补体结合试验〔CF〕、间接血凝试验〔IHA〕和酶联免疫吸附试验〔ELISA〕等，常用CF和ELISA法。第二十一章立克次体(Rickettsia)------立克次体(Rickettsia)是一类专性活细胞内寄生的G-原核细胞型微生物。

一、临床意义内毒素磷脂酶A造成微循环障碍常以节肢动物为传播媒介或储存宿主大多是人畜共患病病原体，引起以发热、出疹为特征的疾病致病性立克次体及其所致疾病病原体所致疾病媒介传播方式普氏立克次体流行性斑疹伤寒人虱虱粪经伤口感染莫氏立克次体地方性斑疹伤寒鼠蚤蚤粪经伤口感染立氏立克次体落基山斑点热蜱蜱叮咬贝氏立克次体Q热蜱接触、呼吸道等恙虫病立克次体恙虫病恙螨恙螨幼虫叮咬查菲埃立克体人单核细胞埃立克体病蜱蜱叮咬五日热巴通体战壕热人虱虱粪经伤口感染二、生物学特性大小介于细菌与病毒之间，能通过细菌滤器呈杆状或球状，G-，Giemsa染色成紫红色

图同时含DNA和RNA含两种核酸，行二分裂繁殖具有细胞壁和细胞膜微荚膜具粘附和抗吞噬作用专性细胞内寄生生长缓慢，常接种鸡胚〔卵黄囊〕培养对四环素、强力霉素等抗生素敏感三、微生物学检验㈠标本采集：病人血液标本活检或尸检材料㈡标本直接检查1、免疫荧光检测2、核酸检测㈢别离培养与鉴定1、动物接种、细胞培养、鸡胚卵黄囊2、鉴定㈣抗体检测1、外斐反响Weil-Felix反响〔外斐反响〕大局部立克次体与普通变形杆菌某些菌株〔X19、Xk、X2〕的菌体抗原有共同的抗原成分，故可用这些变形杆菌的菌体抗原与不同稀释度的患者血清做凝集反响，诊断立克次体病。立克次体病变形杆菌菌株OX19OX2OXk流行性斑疹伤寒+++++-地方性斑疹伤寒+++++-斑点热++++或++或++++-恙虫病--++++腺热--++外斐反响2、IFA试验3、ELISA4、CF试验5、其他MA、IHA和LA试验等

第二篇临床真菌学原核细胞型微生物与真核细胞型微生物比较原核细胞型微生物真核细胞型微生物细胞核结构核膜无有核仁无有分裂方式主要以二分裂有丝分裂，减数分裂细胞质结构质膜常缺乏固醇常有固醇内膜较简单，有中介体复杂，有内质网和高尔基体核糖体70S80S呼吸系统质膜或中介体线粒体第二十二章真菌学总论第一节生物学性状1.形态结构⑴单细胞真菌---圆形或椭圆形酵母型真菌：以芽生方式繁殖

类酵母型真菌：以芽生方式繁殖，有假菌丝

⑵多细胞真菌----又称丝状菌或霉菌，由菌丝和孢子组成.二相型真菌单细胞型：机体内寄生含动物蛋白培养基37℃酵母菌多细胞型：普通培养基25℃丝状菌2.培养：营养要求低沙保弱培养基〔沙氏培养基〕pH：4~6温度范围广：22～28℃深部感染真菌：37℃生长缓慢〔1～4周〕酵母型菌落：单细胞真菌菌落，圆、光滑、湿润。例：新隐球菌。图类酵母型菌落：假菌丝。例：白色念珠菌图丝状菌落：多细胞真菌菌落图棉絮状、绒毛状、粉末状〔气生菌丝体〕菌落正反面呈不同颜色〔可为鉴定依据〕生长现象3.变异性和抵抗力易变异形态、结构、菌落、色素以及毒力等抵抗力较强对枯燥、紫外线及多种化学药物耐受性较强对热抵抗力不强第二节病原学诊断一、标本采集和检验流程〔一〕临床标本的采集1、标本类型〔1〕皮肤的角质性物质〔2〕各种分泌物和排泄物〔3〕血液和体液〔4〕脓汁及渗出物2、采集标本本卷须知〔1〕采集的标本要适宜〔2〕在用药前采集标本〔3〕采集的标本量要足〔4〕严格无菌操作〔5〕采集的标本立即送检〔二〕检验程序图22-2镜检真菌形态真菌抗原检测真菌别离培养与鉴定真菌核酸检测真菌毒素检测1.直接镜检：方法简便，快速10%KOH微加热低倍/高倍镜检查有无菌丝/孢子角质标本〔皮肤癣菌〕二、真菌标本直接检查KOH10g，甘油20ml，加蒸馏水至100ml，瓶装备用〔不能用磨口玻璃瓶塞〕；KOH10g，甘油20ml，高级黑墨水10ml，加蒸馏水至100ml，瓶装备用〔黑墨水使真菌着色，呈深灰至棕黄色，镜下易识别〕

制作方法常用的染色方法革兰染色瑞氏染色荧光染色乳酸酚棉蓝染色墨汁负染等

直接检查的意义1.直接检查阳性有诊断意义，说明有真菌感染，但阴性不能除外诊断。2.直接检查阳性可确定少数病原菌的种，如新型隐球菌、黄癣菌、花斑癣菌、鼻孢子菌等。有时可确定属，如念珠菌属。3.直接检查的真菌镜下形态代表该菌在组织内的形态即组织相。4.提示真菌的致病活动性：念珠菌出现菌丝，皮肤癣菌的菌丝长而分枝多、胞浆浓、折光性强等表示菌活泼。2.抗原检测采用免疫学方法检测真菌抗原方法：胶乳凝集试验

ELISA

半定量放射免疫测定法

三、分离培养1.常用培养基沙氏琼脂血琼脂脑心浸液琼脂沙比琼脂选择培养基2.培养方法平皿培养：外表较大可使标本散布，便于观察菌落形态，但水分易蒸发，只能培养生长繁殖较快的真菌，如假丝酵母菌、隐球菌。大试管培养：水分不易蒸发，主要用于皮肤癣菌的培养和真菌菌种的保存。玻片培养(微量培养/小培养)：可用于真菌菌种的鉴定。观察菌落形态时注意1.菌落性质2.菌落大小3.菌落颜色4.菌落的下沉现象：致病性真菌菌落下沉，污染性真菌菌落不下沉；致病性真菌有时使培养基开裂，但污染霉菌很少引起培养基开裂。

四、真菌鉴定常用的生化反响：糖(醇)类发酵试验、同化碳源试验、同化氮源试验或利用硝酸钾试验、牛乳分解试验、酚氧化酶试验、明胶液化试验和脲酶试验等。----试验方法同细菌试验，主要用于检验深部感染真菌如假丝酵母菌、隐球菌等。〔一〕常用抗真菌药物根据化学结构分类：1.多烯类抗生素，如两性霉素B、制霉菌素、曲古霉素等。2.吡咯类，包括酮康唑、伊曲康唑、氟康唑、伏立康唑、克霉唑、益康唑等。3.其他类，如氟胞嘧啶。五、药敏试验根据作用机理分类1.作用于真菌细胞膜：两性霉素B、制霉菌素、氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、酮康唑及克霉唑等。2.作用于真菌细胞壁：尼可霉素Z、卡泊芬净及普拉米星等。3.作用于真菌核酸：干扰真菌DNA合成，5-氟胞嘧啶〔5-FC〕等。4.其他：大蒜新素及冰醋酸等。〔二〕真菌药物敏感试验方法:肉汤稀释法，包括常量稀释法和微量稀释法。培养基:含谷氨酰胺和pH指示剂，不含碳酸氢钠RPMI1640培养基。程序六、真菌非培养检测技术动物试验核酸检测真菌毒素的检测

第二十三章浅部感染真菌主要侵犯机体皮肤、毛发和指〔趾〕甲，引起浅部真菌病。毛癣菌属临床上常见的有红色毛癣菌(trichophytonrubrum)须癣毛癣菌(T.mentagrophytes,又称石膏样毛癣菌)许兰毛癣菌(T.schoenleinii,又称黄癣菌)紫色毛癣菌〔T.violaceum〕断发毛癣菌〔T.tonsurans〕临床意义易侵犯人体皮肤、指〔趾〕甲、毛发的角蛋白可引起发癣、体癣、甲癣主要通过接触感染，好发于夏秋季节毛癣菌：菌落灰白、红、橙或棕色,外表呈绒毛状、粉末状或蜡样。细长薄壁大分生孢子。菌丝有螺旋状、球拍状、鹿角状和结节状微生物学检验

一、标本采集二、直接显微镜检查:皮屑+10%KOH液指甲+25%KOH/25%NaOH含5%甘油处理

皮肤癣菌感染的毛发三、别离培养标本→70%乙醇或在青、链霉素混合液内处理5min→生理盐水洗3次→接种沙氏琼脂斜面，25℃培养观察菌落特征四、其他鉴定试验毛发穿孔试验脲酶试验特殊营养需要试验表皮癣菌属

表皮癣菌属〔Epidermophyton〕目前只有一个种，即絮状表皮癣菌〔E.floccosum〕。絮状表皮癣菌是一种常见的皮肤癣菌，可引股癣、足癣、体癣、手癣和甲癣。表皮癣菌：菌落初为白色鹅毛状,以后变为黄绿色粉末状。粗棒状薄壁大分生孢子。菌丝球拍状小孢子菌