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文档简介

实验三细菌的分离培养及移植两个概念：在细菌学检验中，细菌的分离培养是重要的基本技术之一。

分离：从混杂微生物中获得单一菌株纯培养的方法；

纯培养：一株菌种或一个培养物中所有的细菌都是由一个细胞分裂、繁殖而产生的后代。实验目的：1掌握细菌分离培养的基本要领和方法2掌握挑菌、纯培养及移植技术3了解细菌的菌落形态及其在各种培养基上的培养性状实验材料：球1菌种：大肠杆菌斜面、大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的混合培养肉汤等；2培养基：普通肉汤、普通琼脂斜面、普通琼脂平板3器械：剪刀、记号笔、酒精灯、接种环一需氧型细菌分离培养法1.平板划线分离法

菌种被其他杂菌污染时或混合菌悬液常用平板划线法进行纯种分离。

此法是借助将蘸有混合菌悬液的接种环在平板表面多方向连续划线，使混杂的微生物细胞在平板表面分散，以求得到分散的由单个微生物细胞繁殖而成的菌落，从而达到纯化目的。

划线培养时注意问题：左手持皿，用左手拇指、食指及中指将平皿揭开约呈20°的角度(图1)；右手持接种环，灼烧冷却后从混合培养肉汤中取少量涂布于培养基边缘，开始划线(图2)；划线前先将接种环稍稍弯曲，使之易与琼脂面平行，不致划破培养基；划线中不易过多的重复旧线，以免形成菌苔；接种完毕，在皿底作好标记（菌名、日期、接种者等），平皿倒扣，置于37℃培养。图2连续划线法区划线法图1划线分离示意图2.纯培养的获得与移植法

---琼脂斜面分离法

将37℃下培养24h的平板从温箱取出，挑取单个菌落，镜检不含杂菌，即用接种环挑取单个菌落移植于琼脂斜面培养，所得的培养物即为纯培养物。图3斜面接种时试管的拿法图4斜面接种时无菌操作的程序左手斜持菌种管和被接种琼脂斜面管，使管口相互并齐，管底部放在拇指和食指之间，松动两管塞子，以便接种时易拔出（图3）。

右手持接种棒，火焰灭菌后，用右手小指和无名指并齐同时拔出两管塞，将管口进行火焰灭菌，使其靠近火焰。将接种环深入菌种管内，先在无菌生长的琼脂上接触使之冷却，再挑取少许细菌后拉出接种环立即放入另一斜面培养基上，勿碰及斜面和管壁，直达斜面底部。

从斜面底部开始划曲线，向上至斜面顶端为止，管口通过火焰灭菌，塞好棉塞，灭菌接种环，作好标记，置于37℃温箱培养。（图4）2.1两试管间的斜面移植2.2平板到试管斜面移植手执接种棒，火焰灭菌，左手打开平皿盖，将接种环置于平皿盖上使之冷却；挑取可疑的菌落，左手盖上平皿盖后立即取斜面管，深入斜面管中，从斜面底部开始划曲线，向上至斜面顶端为止；管口通过火焰灭菌，塞好棉塞，灭菌接种环，作好标记，置于37℃温箱培养。当组织病料中含病原菌少，或有抗菌药残留时，用琼脂斜面或平板分离法可能无菌落长出，为提高由病料中分离培养细菌的机会，这时可以无菌操作剪取一小块病料直接投入肉汤，经37℃培养，在肉汤中长出细菌后，观察其在液体培养基上的生长表现，再用琼脂斜面或琼脂平板分离。3.营养肉汤增菌培养法4.穿刺培养法

半固体移植多用穿刺

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