自动生化分析仪操作方法

四 血液临床酶学诊断血清酶的总活性测定酶是由组织细胞合成的具有特别催化功能的蛋白质，是对化学反响具有强化的催化性，对作用物由严格选择性的生物催化剂。酶的活性是对酶的催化力气大小的度量。酶活性的测定就是PH，离子强度，底物浓度等多种因素的影响，故酶的活性都是用在特定条件下，单位时间内，酶促反响中低物的消耗量或产物的生成量来进展测定。酶活性的测定承受手工或自动生化的两种方法进展测定。自动生化分为半自动分析仪和全自动两种。半自动由手工完成样品及反响混合体递送，局部操作由仪器自动完成。全自动生化则是从加样到出结果的全过程完全由仪器自动完成。按仪器简洁的程度及功能分类分为小型，中型，大型自动。小型一般分为单通道，中型为多通道，2－10各工程，大型多通道的仪器可同时测10个以上工程，分析工程可自由选择。MD－100型半自动简介：本仪器是由美国Sysmtey生化仪器公司生产。该仪器承受单一通道，可连程测试20个以上的工程。该仪器主要分为计算机把握系统，吸样泵，光学系统比色池三个局部。MD-100型半自动操作：〈130分钟。〈2〉用专用清洗液或自配3%84消毒液清洗仪器。如仪器久未使用需翻开仪器侧小门，取下吸样泵小管，用注射器来回推入清洗液，清洗吸样通道。〈3〉进入所测工程的界面，点击轻轨鼠标右键编辑工程参数。〈4〉点击轻轨鼠标左键进入运行工程。〈5〉按仪器提示的方法进展下一步操作，依次吸取空白试剂、标准试剂、样本试剂测试。〈6〉本工程测试完毕，需用专用清洗液或自配3%84消毒液清洗。〈7〉退出工程测试，在根名目下关闭电源。乳酸脱氢酶〔LDH-L〕测定a原理L-乳酸+NAD正离子——→丙酮酸+NADH+氢离子b试剂原装诊断试剂盒c方法取确定量的R2〔Tris缓冲液PH8.9，100mmol/L;KCl100mmol/L;L-乳酸锂52mmol/L〕R1〔NAD6.5mmol/L〕轻轻摇动，并倒置几次，完全溶解后，即为工作液。工作液工作液蒸馏水样品空白管1.00ml0.02ml-------样品管1.00ml------0.02ml混合均匀，在7℃保温30秒钟，读取初始吸光度〔波长340n，同时开头计时，在准确的2，3〔△A/分〕d上机操作程序〈1〉按试剂盒说明书编辑参数：点右键进入编辑参数界面。移动鼠标至温度设置处，设定温度为371.00ml;移动鼠标至样品吸入量处，设定样品吸入量为0.02ml1min30〈2〉点击轻轨鼠标左键，进入运行界面，按仪器提示，先行清洗吸入空白试剂，仪器自动测试空白管，再按提示吸入测定试剂，仪器自动测试样品管。〈3〉仪器自动计算结果，人工记录或仪器自动输出结果。〈4〉本工程测试完毕，点击退出键，仪器提示清洗，清洗完毕，仪器自动退出界面。计算LDH〔U/L〕=〔△A/分－△A/分〕×FF=V1÷〔V2×消光系数〕×1000=8095V1=反响总体积 V2=样品体积NADH340nm=6.3留意事项〈1〉当△A/0.190.3ml0.1ml4。〈2〉复溶后溶液变混浊，或初始吸光度大于0.5,则不能使用。临床意义乳酸脱氢酶总活性上升见于急性心肌梗死、充血性心力衰竭、肺梗死、肝炎、贫血、肌养分不良、肾病综合症。天门冬氨酸氨基转移酶〔AST/GOT〕测定a原理L-天冬氨酸+ａ-酮戊二酸——→草酰乙酸+L-谷氨酸草酰乙酸+NADH+氢离子——→L-苹果酸+NAD正离子+水b试剂原装诊断试剂盒方法波长：340nm温度：37℃比色杯光径：1cmR2〔TrisPH7.8,80mmol/L;L240mmol/L〕R1〔ａ-酮戊二酸12mmol/L;NADH0.18mmol/L;苹果酸脱氢酶≥1000U/L；LDH≥5000U/L〕空白管样品管工作液1.00ml1.00ml蒸馏水0.10ml--------样品------0.10ml11，2，3分钟时，分别读取吸光度，确定每分钟平均吸光度的变化〔△A/分。上机操作程序〈1〉按试剂盒说明书编辑参数：点右键进入编辑参数界面。移动鼠标至温度设置处，设定温度为371.00ml;移动鼠标至样品吸入量处，设定样品吸入量为0.1ml;移动鼠标至保存处，按键点击保存。移动鼠标至读数时间处，设定读3030〈2〉点击轻轨鼠标左键，进入运行界面，按仪器提示，先行清洗吸入空白试剂，仪器自动测试空白管，再按提示吸入测定试剂，仪器自动测试样品管。〈3〉仪器自动计算结果，人工记录或仪器自动输出结果。〈4〉本工程测试完毕，点击退出键，仪器提示清洗，清洗完毕，仪器自动退出界面。计算AST〔U/L〕=〔△A/分－△A/分〕×FF=V1÷〔V2×消光系数〕×1000=1746V1=反响总体积 V2=样品体积NADH340nm=6.3留意事项〈11分钟，△A/0.4003A/分0.200时，样品用生理盐水稀释后重测定，结果乘稀释倍数。〈21.000，勿用。〈3〉仅用于体外诊断，内含迭氮钠，避开直接接触皮肤和眼睛，切勿吞咽。〈42—82—80℃下存放。临床意义GOT急性心肌炎、慢性肾盂肾炎。葡萄糖〔Glu〕测定a原理Glu+氧气+水——→葡萄糖酸+双氧水双氧水+4-氨基安替吡啉+酚——→醌亚胺+水试剂原装诊断试剂盒方法波长：505nm温度：37℃比色杯光径：1cm10mlR1〔葡萄糖氧化酶≥13000U/L；过氧化物酶≥900U/L〕90mlR2空白管标准管样品管工作液1.50ml1.50ml1.50ml蒸馏水0.01ml------------标准-----0.01ml------样品-----------0.01ml分别混匀，37℃10-15A标准和A上机操作程序〈1〉按试剂盒说明书编辑参数：点右键进入编辑参数界面。移动鼠标至温度设置处，设定温度为371.50ml;移动鼠标至样品吸入量处，设定样品吸入量为0.01ml22〈2〉点击轻轨鼠标左键，进入运行界面，按仪器提示，先行清洗吸入空白试剂，仪器自动测试空白管，再按提示吸入标准试剂，仪器自动测试标准管，接下来按提示吸入测试试剂，仪器自〈3〉仪器自动计算结果，人工记录或仪器自动输出结果。〈4〉本工程测试完毕，点击退出键，仪器提示清洗，清洗完毕，仪器自动退出界面。计算葡萄糖浓度=AA葡萄糖标准液5.55mmol/L(100mg/dl)留意事项〈1〉样品葡萄糖浓度超过22.2mmol/L(400mg/dl)时，样品量可减半，改为5ul，标准量不变，重2。〈2〉仅用于体外诊断，内含迭氮钠，避开直接接触皮肤和眼睛，切勿吞咽。〈32—82—80℃下存放。临床意义〈1〉血糖上升见于糖尿病、应激、临时性高血糖症、内分泌紊乱、慢性肝脏疾病、马疝痛。〈2〉血糖降低见于仔猪低血糖、牛酮血症、肾上腺皮质功能减退、甲状腺功能降低、进展性肝病、严峻肾性糖尿病。总蛋白〔TP〕测定a原理在碱性条件下，蛋白质多肽链中的肽键与铜离子络合形成紫红色化合物。b试剂原装诊断试剂盒c方法波长：546nm温度：25℃比色杯光径：1cm空白管标准管样品管试剂1.00ml1.00ml1.00ml生理盐水12.5ul-----------标准------12.5ul------样品------------12.5ul10A标准和A上机操作程序〈1〉按试剂盒说明书编辑参数：点右键进入编辑参数界面。移动鼠标至温度设置处，设定温度为371.00ml;移动鼠标至样品吸入量处，设定样品吸入量为12.5µl移动鼠标至保存处，按键点击保存。移动鼠标至读数时间处，设定读22〈2〉点击轻轨鼠标左键，进入运行界面，按仪器提示，先行清洗吸入空白试剂，仪器自动测试空白管，再按提示吸入标准试剂，仪器自动测试标准管，接下来按提示吸入测试试剂，仪器自〈3〉仪器自动计算结果，人工记录或仪器自动输出结果。〈4〉本工程测试完毕，点击退出键，仪器提示清洗，清洗完毕，仪器自动退出计算总蛋白浓度=AA〔g/L〕留意事项〈1100g/L，可用生理盐水稀释样品，再重测定，结果乘以稀释倍数。〈225℃，测定值偏高。白蛋白〔A〕测定a原理在PH4.2环境中，溴甲酚绿在有非离子去垢剂聚氧乙烯月桂醚存在时，可与蛋白形成蓝绿色复合物。试剂原装诊断试剂盒方法波长：630nm温度：37℃比色杯光径：1cm试剂试剂生理盐水标准样品空白管1.50ml5ul------------标准管1.50ml------5ul------样品管1.50ml------------5ul5A标准和A上机操作程序〈1〉按试剂盒说明书编辑参数：点右键进入编辑参数界面。移动鼠标至温度设置处，设定温度为371.50ml;移动鼠标至样品吸入量处，设定样品吸入量为5.00µl22〈2〉点击轻轨鼠标左键，进入运行界面，按仪器提示，先行清洗吸入空白试剂，仪器自动测试空白管，按提示吸入测试试剂，仪器自动测试样品管。〈3〉仪器自动计算结果，人工记录或仪器自动输出结果。〈4〉本工程测试完毕，点击退出键，仪器提示清洗，清洗完毕，仪器自动退出界面。计算白蛋白浓度=AA〔g/L〕留意事项〈160g/L可用生理盐水稀释样品，再重测定，结果乘以稀释倍数。〈2〉仅用于体外诊断，内含迭氮钠，避开直接接触皮肤和眼睛，切勿吞咽。〈32—82—80℃下存放。临床意义〈1〉血清总蛋白，白蛋白及球蛋白/球蛋白比值减低者见于肝功能损害如脂肪肝、肝硬化、肾炎、恶性贫血、恶病质。〈2〉总蛋白、球蛋白上升、白蛋白/球蛋白比值下降者见于各种感染及慢性肝脏疾病。〈3〉血清总蛋白上升，但白蛋白/球蛋白比值不变者见于各种缘由的腹水。血清同工酶的测定催化功能一样而构造不同的一类酶，称为同工酶。同工酶具有适应生物进化需要、符合器官的代谢功能、协调各细胞器的代谢反响、理顺病理特别代谢等功能。LDHILDH主要存在于骨骼肌、心脏、肾脏，其次是肝脏、胰腺、肺脏、肿瘤组织等，红细胞内含量也很丰富。5LDH1-存在与心脏、红细胞、脑和睾丸。LDH2-存在于平滑肌、心肌、脑、肾、骨骼和甲状腺。LDH3LDH4LDH5原理以聚丙烯酰胺作电泳介质，经电泳后分别后显色，用光密度计扫描，以确定各型同工酶的相对百分率。试剂的配制⑴PH8.9Tris:6g EDTA:1.17g NaCl:1.0g 100ml,4⑵丙烯酰胺贮藏液丙烯酰胺：30g双丙烯酰胺：0．８g 加重蒸馏水溶至100ml,4℃保存。⑶2.28％的过硫酸铵(每周配):过硫酸铵:4.0g 加水溶至100ml。⑷4％三乙醇胺⑸电泳缓冲液〔PH8.3〕Tris:0.6g甘氨酸:2.88g加水至100ml,410⑹40％的蔗糖0.1‰⑻1molDL-乳酸钠:9.35ml60g/dl50ml。⑼NADNND：100mg10ml，4℃；保存，可用两周。⑽0.1NaClNaCl:584mg100ml。⑾5mMMgCl2MgCl2·6H2O：100mg100ml。⑿0.5M〔PH7.4〕KH2PO468gNaOH调整PH7.450g/ml,NaOH22ml1000ml。⒀NB〔氯化硝基四氯唑蓝：NBT50ml加水至50m，4℃保存。⒁PM〔酚秦甲脂硫酸盐：1mg/m℃保存暗处。⒂7.575ml100ml。操作：〈1〉制凝胶：PH8.91.8ml1.8ml,4﹪0.8ml5.1ml,4﹪0.5ml5-7cm5cm〈240﹪1：25ul1：1于电泳槽中参与已稀释的电泳缓冲液，上槽中参与溴酚兰液6〈3300，电泳约1h〔点样于阴极，电泳方向从阴极向阳极。〈4〉完毕电泳后，取出凝胶：置培育皿中。〈5〉染色液：1M乳酸钠溶液：3.0ml,NAD溶液:3.0ml,0.1MNaCl溶液:3.0ml,5mMMgCl2溶液:3.0ml,0.5M7.5ml,NBT7.5ml,PMS:0.75ml,混匀于培育37℃25-30〈67.5﹪冰醋酸溶液中,24h后放入水中保存。〈7〉扫描、计算。dLD1、LD2上升为主，LD1＞LD2 见于急性心肌梗死、肺梗死、肾梗死、恶性贫血。LD3、LD2，上升为主见于恶性淋巴瘤、血小板增多、肺、胰、脾坏死