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内吞抑制剂阻止PAMAMDendrimer内化和渗透进Caco-2细胞内KellyM.Kitchens,RohitB.Kolhatkar,PeterW.Swaan,andHamidrezaGhandehari*MOLECULARPHARMACEUTICSVOL.5,NO.2,364–369背景介绍治疗剂和诊断用药固定药物，酶，靶向制剂和其他有生物活性的制剂显影剂最初的机制研究证明阳离子PAMAMdendrimers是通过细胞旁路和吸附胞饮的作用进行运输。我们实验室随后的研究证明了，在Caco-2中阳离子和阴离子的PAMAMdendrimers与标记的内体和溶酶体共区域化，从初级内体到次级内体和溶酶体的细胞内交换有依赖时间和表面电荷依赖性。PAMAMDendrimer实验部分---材料G4NH2溶液TritonX-100(聚乙二醇辛基苯基醚一种非离子型表面活性剂（或称去污剂）hank’s平衡盐溶液（HBSS）肝素钠[3H]-醋酸酐[3H]-核黄素Caco-2细胞细胞培养试剂WST-1细胞增殖试剂BCA蛋白检测试剂盒实验部分---放射性G4NH2的制备在有过量三乙胺的情况下，G4NH2与[3H]标记的无水乙酸(5mCi/mmolofthepolymer)反应。G4NH2（0.100g,0.03mmol）用纯甲醇（10ml）溶解，然后添加[3H]-醋酸酐(5mCi/mmol)(0.062g,0.61mmol)和三乙胺(0.12g,1.2mmol)。溶解室温搅拌12h，然后挥发掉甲醇获得粗乙酰化的G4NH2。粗产物再溶解于水中，用1000截留分子量的透析膜对蒸馏水透析。使用PD-10柱排阻色谱小分子量杂质不能被检测到。被标记的G4NH2的放射性比率在2-3毫居里/毫摩尔。实验部分---Caco-2细胞培养

25μg/ml的两性霉素DMEM10%的胎牛血清1%的非必需氨基酸10000单位/ml的青霉素10000μg/ml的链霉素37℃5%CO2湿度95%每两天换液长到70-90%用0.25%的胰蛋白酶-EDTA溶液传代转运介质由HBSS辅以10mM的HEPES缓冲液（pH值7.4）实验部分---PAMAMDendrimer对增殖期细胞的毒性

30000cells/well→96孔板→细胞培养条件48h54321细胞用转运介质HBSS洗两次用100μL(1-10μM)的G4NH2进行培养细胞用HBSS洗三次移去G4NH2，并用100μL的HBSS替换每个小孔添加10μL细胞增殖试剂WT

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