微生物检测培训

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-无菌操作与GLP学习目的Explaintheimportanceofasepsisinthemicrolab/无菌的重要性Explainthemethodsusedtosterilizeequipment/设备灭菌的方法Identifywaystoprepareasepticworkplace/无菌工作区域的准备Identifypracticeforaseptictechniqueduringtestingprocess/实验过程中的无菌技术Explainhowtosetupalabsoitpromotesasepticpracticeandsafety/实验室布局Identifywaystoensuresafetywhileworkinginalab/安全工作主要内容介绍无菌技术无菌的过程实验的无菌技术实验室布局GLP要点安全工作无菌的重要性第一章在微生物实验室,必须达到一定程度的无菌状态,免于微生物污染.假如在一个肮脏的实验室或者早先打翻过样品的地方作微生物实验,引入新的微生物污染样品的几率是很大的.微生物的实验可以分为两大部分:准备培养基和样品检验.事实上,保持整个实验室清洁是非常重要的,这样就不用在灭菌前担心太多了,然而,灭菌后必须保证样品或者培养基免受污染.其实,可以把灭菌想像成”一扇门”,在培养基中或者一些设备比如吸管的微生物都在灭菌过程中被杀死了,没有微生物困扰实验了.必须保证灭菌后的环境(门后的部分)的洁净,杜绝灭菌后的培养基和设备受到污染.无菌技术–高压湿热灭菌(Autoclave)要点描述原理在压力下产生的湿热的蒸汽杀死微生物的营养体和孢子.密封灭菌锅必须密闭以阻隔外部空气,

避免空气的存在会影响压力并降低灭菌锅里面的温度灭菌压力在灭菌国内,合适的灭菌温度是通过压力达到的,

压力对于灭菌没有效用但是使蒸汽温度上升.对于标准操作来说,15lbs/inch2时的1210C并赶走所有空气可以达到灭菌的效果灭菌时间当到达一定的温度和压力时,

需要保持一定的时间来达到效果,为了杀灭微生物,1210C必须保持至少15分钟培养基的灭菌大部分情况下,实验室配置培养基后应灭菌,灭菌时应根据供应商指导,

使用合适的温度时间;有些培养基不适合灭菌的.器皿的灭菌当灭菌那些器皿时,

需要考虑使用数量,比如,一天用10根吸管,在灭菌时,一般就可以以10根为一包,这样可以减低器皿在使用过程中遭受微生物的污染的可能性.灭菌条在灭菌过程中,可以用灭菌条来监控效果,灭菌条在灭菌前是有颜色的,灭菌后会变成黑色.重新灭菌假如一次灭菌无效,可以重新进行灭菌过程,但是,培养基是不可以进行第二次灭菌的,应抛弃.储存灭菌完成后,培养基和器皿应妥善储存.一般来说,培养基应存放于避光的洁净空间,同时应参照供应商的指示.

第二章无菌技术–过滤(Filtration)要点描述简述物理分离方法,使用高效过滤将微生物从液体培养基分离使用于对热敏感的培养基和化学品,

比如,当需要酒石酸来调节OSA的酸度时由于不需要加热和冷却过程,过滤比高温湿热灭菌省时间,过滤头0.2微米的过滤头可以分离所有的细菌营养体,

把它安装在针筒末端.第二章无菌技术能够保持灭过菌的培养基,器皿免受微生物污染保证实验的有效性第二章无菌过程注意点要点描述综述一旦培养基或者器皿经过灭菌过程,这种灭菌状态应保持直到实验结束.区域最好能把培养基准备区域(门外)和实验区域(门内)分开.关于实验室布局在第五章讨论工作台面工作前必须消毒,可以用70%的酒精,

也可以用含氯的消毒剂.在第六章具体讨论消毒时间不管使用何种消毒剂,需要提供充分的消毒时间来杀灭微生物,

一般5-10分钟.可以用纸巾擦干表面洁净台必须有2个光源:普通照明用和杀菌紫外光.

紫外灯用于保持工作台面免于微生物污染.在使用前仍然需要使用消毒剂清洁.摆放应该有好习惯把工作桌面的物品摆放好,把移动放到最低限度,

避免带来污染镊子如果使用薄膜过滤法,需要准备一个小烧杯并有少量酒精,

镊子不用时就放在杯子里培养基培养基使用前,应该有相关日期,比如配置日期,或者实验室收到日期(直接使用的培养基).假如没有所需日期,

这个培养基不能使用.实验服穿着干净的实验服,袖子应卷起至肘部以避免碰到培养基或样品带来污染,当然,做实验前要洗手.第三章实验的无菌技术注意点–前采样个人卫生酒精灯样品应无菌采得使用无菌采样袋或者采样瓶采样员应戴防护手套,在采样前烧采样口样品容器应紧闭并安全储存.万一培养基或者样品溅到实验服上,应在做完一个实验后换上干净的咳嗽或者鼻塞可能会带来微生物并影响实验,

应戴好防护手套面罩.

在第六章具体讨论使用本森灯或者酒精灯,在实验前点燃火焰在实验区域产生一个防护层,可以防止那些悬浮在空气中的微生物掉落在工作台面上或者培养基上.第四章实验的无菌技术注意点–中开瓶瓶口培养皿开瓶前,

应用清洁剂的纸巾清洁瓶盖和附近区域,除去盖子上可能留存的微生物盖子打开后,玻璃瓶口应进行灭菌,

可以在酒精灯上方旋转瓶口和螺纹,一般2-3秒.

当打开培养皿时,

不能完全移除盖子,而应该保持在培养皿的上侧,从而能够倒入培养基或者样品,这样可以减少空气灰尘或者微生物的污染;倒完培养基或者样品后,

瓶口重新过火,盖盖子,用消毒剂清洁.第四章实验的无菌技术注意点–中滤膜镊子打开薄膜包装,绝对不能碰到薄膜!用镊子把薄膜移除包装并放到过滤头上,过滤的漏斗不能完全移开,只需移开一点点放入滤膜即可过滤完后,用镊子把滤膜转到培养皿中,放置于中间用镊子转移滤膜过火时,拿住镊子的尾部,放到火焰上,保持一下能够到火就好,时间太长会在尖部结碳

拿镊子的时候,尾部向上直至烧完.第四章实验的无菌技术注意点–后实验结束打扫废弃物实验结束后,培养皿放入培养箱;剩余的培养基可以放回储存区域,盖子必须盖紧

抛弃废弃物,比如样品袋;可回用的物品放在远离工作区域的地方以回收,清洗,灭菌.用含有消毒剂的纸巾清洁工作台面.在实验过程中暴露于微生物的物品应作为有害废弃物这些废弃物可能含有微生物并致病;假如含有致病菌可能会产生公共卫生的事件.最好废弃物能够进行湿热灭菌第四章实验室布局一个设计合理的实验室能提供一个合格的环境以支持实验能够安全有效地进行.首先,需要为实验室选择一个合适的物理位置:远离其他操作区域,比如,生产或者储运没有从其他区域进入实验室的直接入口实验室必须是微生物实验专用实验室应分为准备区域和测试区域.湿热灭菌锅,作为这两个区域的典型的分隔(门).这种分隔保证了能有效使用无菌技术并帮助防止培养基和样品的交叉污染.假如两个区域无法分开,实验室应根据实验准备和测试两个行为来区分不同的区域.第五章实验室布局–要点通风和气流安保工作区域微生物实验室应该有单独的通风系统,与其他操作区域的空气供给分开;房间应该是负压的,

这表示实验室里面的空气永远是向内流动的;空