大学生科研开题报告

承德医学院大学生科研计划申请书项目名称：蒲公英水煎剂对双肾双夹高血压大鼠血压影响及心血管的重塑研究类别：应用基础研究申请单位（学生）：09级临本09班申请人：09级临本9班----第八小组小组组员：骆森林卢会杰吴天士郝婷婷杨淑娴刘娟娟指导教师：于海荣申报日期：11月03日项目名称蒲公英水煎剂对双肾双夹高血压大鼠血压的影响及心血管的重塑起止时间.11—.11申请经费3000元研究类别应用基础研究预期水平国内领先课题负责人姓名部系年级所学专业基础部09级临床医学指导教师职称学历学位年龄专业项目内容摘要蒲公英MongolianDandelion属菊科数年生草本植物，俗称“尿床草"

因其对于利尿有非常好的效果而得名。它具有丰富的维生素Ａ和Ｃ及矿物质。在加拿大是正式注册为利尿，解水肿的草药。并且体内的低钾不会连同水分排出。根据利尿降压药的原理，钠的摄入量与血压亲密有关，利尿药能排钠、利尿，使血容量减少，心脏血液输出量下降，血压下降。中药抗高血压的研究及应用逐渐深入，现已经有多种单味及中药复方用于临床高血压的治疗。蒲公英在临床上有利尿、缓泻、退黄疸、利胆等功能，但暂无有关降压的报道，由其有着较强的利尿作用。本研究给双肾双夹高血压大鼠以蒲公英水煎剂，用无创伤鼠尾动脉血压测量仪测量大鼠尾动脉收缩压，对比吲达帕胺（利尿降压药）的降压效应，并观测决蒲公英对双肾双夹高血压大鼠血压的影响，为蒲公英用于临床降压提供试验根据。一、立论根据（包括科学意义、应用背景、国内外研究现实状况分析、参照文献）科学意义及应用前景高血压（hypertension）对机体的影响取决于血压升高和血液动力学变化的速度、程度、持续时间以及原发性疾病的状况等多种原因。其影响重要表目前心、脑、肾等重要器官的功能和构造的变化。而如今，利尿降压也在临床广泛应用，可是今年利尿剂用于降压也出现了某些副作用，例如：①.低血钾症利尿剂可使肾小管在排钠同步也排钾，使钾的排出增长而导致低钾，此时病人常体现全身无力，肌肉张力低下，腹胀，食欲不振，消化不良，心悸和期前收缩等症状。查心电图有时可有T波低平和增高的U波，或T-U波融合。一旦发既有低钾趋向应补钾，并进行必要的监护。②高尿酸血症噻嗪类利尿剂能引起高尿酸血症，诱发痛风，减低肾功能，故有痛风及肾功能不全者，慎用噻嗪类利尿剂。蒲公英为菊科数年生草本植物，具有丰富的维生素Ａ和Ｃ及矿物质。在加拿大是正式注册为利尿，解水肿的草药。并且体内的低钾不会连同水分排出。临床上常用于利尿、缓泻、退黄疸、利胆等功能，但暂无有关降压的报道，有文献报道其有着较强的利尿作用，但未表明其品种【1】。少见有用于降压的报道。动物试验是研究高血压的发病机制及防治措施的重要手段，人们已用不一样的措施制备了多种高血压动物模型(遗传性、神经原性、肾性、内分泌性、盐性等)用于高血压的试验研究。双肾双夹为肾性高血压动物模型，具有高血压形成率、存活率高的特点，并且抵达高峰后血压稳定、波动小，为多种升压和降压试验发明良好的条件。本研究观测蒲公英水煎剂对双肾双夹肾性高血压大鼠血压及心血管重构的影响，并观测其对心脏的保护作用【2】，为蒲公英水煎剂降压的临床应用提供试验根据。参照文献【1】王裕生.中药药理与应用.北京人民卫生出版社.1983；176【2】金政,李相伍,金美善等;蒲公英对体外培养心肌细胞保护作用的研究[J];中国中医药科技;05期二、研究内容（阐明详细研究内容、拟处理的关键问题和创新点）研究内容蒲公英水煎剂对双肾双夹高血压大鼠动脉血压的影响。蒲公英水煎剂对心血管系统的重塑效果。拟处理的关键问题1.用尾动脉测压仪测量大鼠尾动脉收缩压。2.大鼠左心室插管术测定大鼠左心功能。3.HE染色观测蒲公英对高血压大鼠心血管的影响。创新点1.蒲公英水煎剂对双肾双夹高血压大鼠有降压作用。2.观测蒲公英水煎剂对双肾双夹高血压大鼠心血管重塑效果。三、研究方案（包括研究措施、试验方案、技术路线）一.试验材料1.试验动物:健康雄性wistar大鼠45只,体重200±10g。2.试验器械与药物：无菌手术器械一套，无创尾动脉血压测定分析系统BP—6，BL—420生物信号记录分析系统，显微镜，戊巴比妥钠;铝制易拉罐;无菌针灸针;手术丝线，规格5/0;BP_6无创动物血压测试仪。蒲公英，10%水合氯醛，吲达帕胺（利尿降压药），3%戊巴比妥钠双肾双夹高血压模型制备铝夹的制作：将铝制易拉罐表面油漆刮掉，剪成长12mm、宽1mm的铝条，按需要将不一样直径的针灸针置于长条之间，用尖嘴钳小心压制成圆形小环，环的内径与针灸针直径基本相等。适应性喂养1周，术前一天所有手术器械进行高压蒸汽灭菌备用，下午6时开始对次日手术大鼠禁食，不禁水。自制铝夹于手术当日在75%酒精溶液中至少浸泡30分钟。手术过程：腹腔注射3%戊巴比妥钠溶液(0.15ml/100g)，麻醉wistar大鼠，仰卧位固定备皮消毒后，铺无菌手术洞巾，于剑突下沿腹正中线依次切开皮肤、肌腱，腹膜进入腹腔，狭窄左肾动脉时，用生理盐水纱布包好腹腔脏器将其推向右侧，暴露左肾及左肾蒂，左肾动静脉包裹在一种血管鞘中，一般状况左肾动脉位于肾静脉的上后方(偶尔会出目前肾静脉下方或横跨在肾静脉的上方)，可用润湿生理盐水的棉签拨开肾静脉，再用无齿小弯镊在动静脉之间小心分离，分出左肾动脉约0.5cm，将一内径为0.2mm或0.25mm的铝夹呈水平方向套在左肾动脉上，务必使左肾动脉所有落入铝夹顶部的圆形小孔内，距小孔约0.25cm处用5/0手术丝线结扎，使铝夹的两脚紧密闭合。以狭窄后左肾颜色变为“浅红色”为宜。狭窄右肾动脉时将腹腔脏器推向左侧，暴露右肾及右肾蒂，右肾动脉位置变异少，且与右肾静脉相距稍远，较左肾动脉易于分离。在下腔静脉与腹积极脉之间与右肾水平线相交处分开腹膜后壁即见右肾动脉，分离狭窄右肾动脉，详细措施同左肾动脉。多数状况下肉眼可见右肾动脉直径较左肾动脉大，故铝夹直径的选择上亦可以视详细状况进行调整，本研究常用0.3mm～0.4mm内径铝夹狭窄右肾动脉。亦以狭窄后右肾颜色变为“浅红色”为宜。双肾动脉狭窄完毕行腹腔、肌层全层持续缝合，间断缝合皮肤，手术完毕。试验组仅游离左右肾动脉，套入铝夹后取出，不予狭窄。术后护理：待动物清醒后，放入单笼喂养，注意保持呼吸道畅通，用100瓦白炽灯距离60cm照8小时以保温。术后禁食24小时，但不禁水，术后3天亲密观测皮肤切口、精神状态及进食进水状况。血压测量：采用BP_6无创动物血压测试仪测定大鼠清醒状态下尾动脉血压。将大鼠置于仪器配套的固定笼中，置30℃恒温箱预热15分钟，待大鼠完全安静后将鼠尾套袖放置于鼠尾的根部，套袖以约(20～30)mmHg/s的速度自动充气加压直至脉搏波消失，维持6s后套袖自动放气，出现的第一种血压波即为收缩压。持续测量至少三次，每次测量间隔一定期间，记录心率变化≤10次/分、血压变化≤6mmHg的三次读数，取其均数为当日收缩压值。以此法测量大鼠术前血压，血压在85mmHg～120mmHg范围为正常血压大鼠，术后血压比自身术前血压升高≥30mmHg者鉴定为高血压。三．试验分组、给药及观测1.分组：将成功双肾双夹肾性高血压大鼠，随机平均分为3组：阴性对照组（手术但不给药），试验组（手术并给蒲公英水煎剂），阳性对照组（手术并给吲达帕胺）于给药期间，定期测量尾动脉压。2.给药；试验组：每只大鼠每日给以10g蒲公英水煎剂20ml代水饮，饮完后，自由饮清水。阳性对照组：每只大鼠每日口服吲达帕胺2.5mg/日一次，自由饮清水。阴性对照组：自由饮清水。3.观测：血压：给药后每两周测一次鼠尾动脉收缩压，至给药第8周。左心室功能测定:给药观测8周后，试验结束前，腹腔麻醉，行左心室插管术测大鼠左室舒张末压等心功能指标。形态学观测：给药观测8周，腹腔麻醉后，行左心室插管术测大鼠左心室功能后，取心脏称左室重量后，取部分左心室，甲醛固定后石蜡包埋。取胸积极脉、肾动脉、肠系膜上动脉第2级分支，甲醛固定后石蜡包埋、切片。血管横切成3μm薄片作苏木精—伊红染色。在光学显微镜下通过图像分析仪对血管作形态学测量、观测心肌构造变化。测量血管在最舒张时的管腔内径L、血管壁中层厚度M、中层厚度与管腔比值M/L、血管壁横截面积CSA。每个标本测量3个切片，取平均值。四．记录学处理用Excel建立数据库，以SPSS13．0记录分析软件分析数据。定量资料以±s表达，组间比较采用t检查，多组间比较采用方差分析，定性资料比较采用x2检查，P<0．05为有记录学意义。四、预期目的1.明确蒲公英水煎剂的降压效应。2.明确蒲公英水煎剂对高血压大鼠血管重塑及心血管的重塑作用。3.公开刊登论文1-2篇。五、研究进度安排（规定详细详细、切实可行）11月---12月文献查阅、试验设计12月试验准备、购置动物、饲料01月---06月试验观测07月---11月数据记录、成果分析撰、写论文并刊登六、经费预算年度金额使用阐明1200元500元300元1000元动物费饲料费药物、试剂文章刊登费七、参与人员及分工姓名性别专业职务分工骆森林卢会杰男临床医学学生试验设计，模型复制，试验观测吴天士男临床医学学生动物喂养，动脉血压测量杨淑娴女临床医学学生动物喂养，动脉血压测量郝婷婷女临床医学学生动物喂养，动脉血压测量刘娟娟女临床医学学生动物喂养，形态学观测负